Электроды ока 46: цены от 252 рублей, отзывы, производители, поиск и каталог моделей – интернет-магазин ВсеИнструменты.ру

Содержание

Электроды ОК 46.00. | МеханикИнфо

 

Сварочные электроды ОК 46 предназначены для сварки низколегированных и низкоуглеродистых сортов стали с пределом текучести до 380 МПа. Сварку данными электродами производят во всех пространственных положения, переменным и постоянным током любой полярности. Электроды ОК 46 можно смело назвать универсальными.

Изготавливают диаметром: 2, 2.5, 3, 4, 5.

Технические характеристики ОК 46.00.

 

Покрытие: рутил-целлюлозное;

Стержень электрода: стальная сварочная проволока Св08 (Св08А);

Производительность при наплавке (диаметр 4.0): 1.4 кг/ч;

Расход электродов на 1 кг наплавленного металла: 1.7 кг;

Наплавочный коэффициент: 8.5 г/А·ч;

Ток: постоянный и переменный любой полярности;

Напряжение холостого хода: 50 В;

Режим прокалки: 70-90°С, 1 час.

 

Таблица 1.

Технические характеристики сварочных электродов ОК 46.00.

Диаметр, мм Сила тока, А Длина, мм Количество электродов в 1 кг, шт
Нижнее Вертикальное Потолочное
2 40-80 40-60 50-70 300 50
2,5 60-110 60-90 60-110 350 45
3 80-160 80-140 80-180 350 39
4 110-210 110-200 90-220 450 19
5 150-300 150-280 150-270 350 13

 

ОК 46 малочувствительны к плохо зачищенной поверхности металла от ржавчины, к воде, окисленным поверхностям и другим загрязнениям, что говорит о их технологичности. ОК 46.00 можно использовать при сварке гальванических поверхностей, т.е. с оцинкованным покрытием. Также к плюсу этих электродов можно отнести легкость поджигов первой и последующих дуг, а значит сварку можно производить как на коротких расстояниях (прихватками), так и на длинных.

 

Шов ОК 46.00.

 

Отличительной чертой ОК 46.00 являются его швы. По поверхности металла формируется гладких шов с плавным переходом к свариваемым деталям. Можно сказать, что они имеют хороший товарный вид и отличную визитную карточку.

 

Читайте также:

Самые распространенные электроды в строительстве. Электроды тип э 42 46 50.;

Сварочные электроды ЦЛ-11 технические характеристики.;

Электроды УОНИ-13/55 технические характеристики.

Сварочные электроды АНО-4 технические характеристики.

 

Механические характеристики свойств металла шва ОК 46.00.

 

Предел текучести: 400 МПа;

Временное сопротивление электродов: 515 МПа;

Относительное удлинение: 25 %;

Ударная вязкость:

140 Дж/см2.

 

Таблица 2.

Массовая доля химических элементов в сварочном шве.

Углерод, С Кремний, Si Марганец, Mn Фосфор, P Сера, S
Не более Не более
0,08 0,3 0,4 0,03 0,03

 

Сварка электродами ОК 46.

 

Сварка электроды ОК 46 может производиться на относительно низких пороговых значениях минимального тока. Это говорит о том, что в отличии от других марок электродов, при низких значениях тока, дуга неизменно, стабильно горит. Благодаря малым напряжениям на холостом ходе стало возможно проводить сварочные работы в повседневном быту от домашних источников питания.

Экономическая составляющая при работе данными электродами не высока.

 

Электроды ОК

46.00 технические характеристики.

 

Из-за низкого тепловложения возможна сварка металла с широкими зазорами между ними.

Также к достоинствам можно отнести относительно низкие температуры в области сварки, что не допускает перегрева, образование горячих трещин и разбрызгивания.

Аналоги: АНО 4, АНО 6, АНО 29М, АНО 23, ОЗС 6, ОЗС 12, МР 3.

Сварочные электроды ОК 46.00 используют по всему и во всех отраслях, благодаря своим качествам и быстротой проведения свариваемых работ. Их швы обладают высокой герметичностью и хорошей стойкостью к агрессивным средам.

 

Электроды ESAB ОК-46 4 мм 6,6 кг, цена

Электроды ESAB ОК-46 4 мм 6,6 кг   Электроды ESAB ОК-46 4 мм – уникальные в своем классе электроды, обладающие великолепными сварочно-технологическими характеристиками, предназначенные для сварки конструкций из низкоуглеродистых и низколегированных сталей с пределом текучести до 380 МПа во всех пространственных положениях на постоянном токе обратной полярности и переменном токе. Электрод ОК-46 отличается относительно слабой чувствительностью к ржавчине и другим поверхностным …

Читать далее
Виды работ
Сварка
Диаметр ?

Диаметр - фактический диаметр изделия с учетом толщины стенки.

4 мм
Материал назначения
Низколегированная сталь, Углеродистая сталь
Покрытие
Рутилово-целлюлозное
Положение сварки
Вертикальное, Горизонтальное, Нижнее, Потолочное
Тип тока
Переменный/Постоянный
Тип электрода
Металлический

Электроды ОК 46 — характеристики, режимы работы и описание

Для получения качественного шва и надежного сварного соединения необходимо выбирать универсальные электроды ОК46 ЭСАБ, которые не подведут даже начинающего сварщика.

Электроды ОК-46, изготовленные компанией ЭСАБ (Швеция), получили массовое применение при проведении ремонтных и монтажных работ. Они предназначены для сварки конструкционных углеродистых и низколегированных сталей с пределом текучести не выше 380 МПа, а также судовых сталей.

Сфера использования – создание новых стальных изделий в условиях промышленного производства и небольшой мастерской и ремонт на месте.

Технические параметры и характеристики


Многофункциональный электрод ОК-46 с отличными сварочно-технологическими свойствами имеет плотную обмазку и стабильную дугу, благодаря чему сварочная ванна защищена от влияния внешних факторов. Он хорошо поджигается даже при низком токе в начале работы и при повторном розжиге, когда обмазка уже обгорела или конец расплавлен.

Рисунок 1 — Результат сварки

Электроды ОК-46 универсальны в вопросе пространственного положения сварочного шва. Они варят даже в узких местах и по окрашенной поверхности. Подходят для выполнения монтажных прихваток, наложения коротких и корневых сварочных швов. Хорошо себя зарекомендовали при периодических обрывах дуги.

Ключевые особенности:

  • используются для сваривания оцинкованных изделий и с другим гальваническим покрытием;
  • хорошо сваривают тонкостенные детали;
  • легкий поджиг, в том числе и повторный;
  • благодаря низкому тепловложению хорошо подходят для заполнения больших зазоров;
  • есть возможность накладывать шов в вертикальном положении в направлении на спуск;
  • отсутствие чувствительности к загрязнениям и ржавчине упрощает подготовку кромок.

Наплавлять металл рекомендуется участками небольшой длины, а швы большой протяженности разбивать на маленькие отрезки.

Описание


Электроды ОК-46 по ГОСТ 9467-75 производятся диаметром 1,6; 2; 2,5; 3; 4 и 5 мм. Для маленьких сечений ∅1,6 и 2 мм длина составляет 300 мм, для остальных – 350 и 450 мм. Стержни изготавливаются из сварочной стальной проволоки СВ-08 или СВ-08А с нанесением рутиловой обмазки.

Стандартная производительность работ – 1,4 кг/час. Именно столько потребуется электродов для наплавки 1 кг металла. Для прокалки потребуется режим 70–90 °C и продолжительность нагрева 1 час.

Рисунок 2 — Технические параметры

В обозначении ОК-46 указано, что электрод предназначен для выполнения ручной дуговой сварки. Готовое соединение выдерживает нагрузку 46 кг/мм².

Свойства готового сварного шва определяют надежность будущей металлоконструкции и возможность эксплуатации в заданных условиях. Эти параметры зависят от химического состава электродов и протекания процесса сварки. Именно по техническим характеристикам и виду выполняемой работы сварщики подбирают электроды.

Химический состав наплавленного металла характеризуется содержанием следующих элементов: С=0,08%, Si=0,3%, Mn=0,4%.

Механические свойства шва:

  • предел прочности – 510 МПа;
  • предел текучести – 400 МПа;
  • сопротивлению разрыву – 510 Н/мм²;
  • ударная вязкость при температуре -20…0 °C составляет 33–70 Дж/см²;
  • выход наплавленного металла в относительном измерении – 96%.

Режимы работы


Оптимальные условия сварки достигаются при четком соблюдении режимов работы. Они подбираются исходя из диаметра стержня и расположения сварочного шва. Диапазон параметров позволяет создать наилучший режим для конкретного случая.

Режимы сварки

Диаметр электрода, ммРасход на 1 кг,

штук

Сила тока в зависимости от положения, А
нижнеевертикальноепотолочное
25040-8040-6050-70
2,54560-10060-9060-110
33980-16080-14080-180
419110-210110-20090-220
513150-300150-280150-270

Электроды ОК-46 работают от постоянного и переменного тока любой полярности. Могут подключаться к бытовым источникам питания, потому что имеют стабильное горение дуги при минимальном значении тока и малое напряжение холостого хода (50В).

Среди выявленных пользователями недостатков у электродов ОК-46 высокая цена, плохо проваривается толстостенный металл, не у всех новый электрод зажигается с первого раза, по своему шлаку уже не идут. Когда полежат в открытой пачке и наберут влаги, шлак приходится отбивать привычным способом.

Назначение и тонкости применения


Электроды ОК-46 могут служить основным присадочным материалом для заполнения стыков и пустот в металлических изделиях, а также дополнительным – для прихваток и предварительной сборки конструкции.

Рисунок 3 — Самоочищение сварного шва

Электроды ОК-46 не рекомендуется применять при сварке длинных швов. Они предназначены для накладывания коротких валиков.

Марка расходных материалов обеспечивает качественный и ровный шов с плавным переходом к основной поверхности. Металл при сваривании почти не разбрызгивается, происходит самоотделение небольшого количества шлака. Преимущества данных электродов лучше всего проявляются при проваривании швов с глубоким расположением корня.

При применении сварочных электродов ОК-46 гарантированно получатся прочные и надежные прихватки, необходимые при монтаже металлоконструкций и инженерных коммуникаций.

Расходные материалы упакованы в герметичный пакет и картонную коробку. Таким образом они надежно защищены от воздействия влаги и механических повреждений. Выдержат несколько перевозок и длительное хранение.

Если у вас есть опыт работы с электродами ОК-46, пишите: нам будет интересно услышать ваш отзыв.

Популярные электроды для инвертора - ОЗС-12, АНО-4, ОК-46

  Для выполнения сварочных работ необходимо  правильно выбрать не только сварочный инвертор, но и правильно подобрать к нему сварочные электроды. Электроды для ручной дуговой сварки изготавливают в виде стержней, выполненных из холоднотянутой калиброванной сварочной проволоки. На поверхность стержня  наносят слой покрытия, обеспечивающего устойчивое горение дуги и защищающего сварочную ванну от атмосферного воздействия.  Большое разнообразие электродов, а также принципов классификации, может затруднить их правильный выбор начинающим сварщиком.

Наиболее распространенные и качественные марки электродов,  применяемые для сварки сварочными инверторами, это электроды  ОК-46.00, ОЗС-12  и УОНИИ-13/55  производства  компании «ЭСАБ-СВЭЛ» (Санкт-Петербург, Россия),  а также электроды  АНО-4,  АНО-21 , ОЗС-12, а  для особо ответственных конструкций УОНИИ-13/55 производства «Судиславского завода сварочных материалов» (ООО «СЗСМ» г. Судиславль, Россия).

АНО-4 СЗСМ  – универсальный электрод для сварки корпусных конструкций из углеродистых сталей. Легкая отделяемость шлака. Покрытие – рутиловое.
Диаметр - 3мм и 4мм.

АНО-21 СЗСМ – универсальный  электрод общего назначения для сварки конструкций из низкоуглеродистой стали как переменным, так и постоянным током. Сварка производится преимущественно на короткой длине дуги. 
Диаметр - 2мм и 2,5мм.

ОЗС-12 СЗСМ - электрод отличает легкое зажигание и высокая эластичность дуги, возможность сварки по окисленным поверхностям. Сварка конструкций из углеродистой стали. 
Диаметр 3,0мм.

ОК-46.00 ЭСАБ-СВЭЛ – универсальный электрод, обеспечивающий высокие свойства шва. Легко поджигается, в том числе и повторно. Не чувствителен к ржавчине и поверхностным загрязнениям. Рекомендуется для сварки углеродистых конструкционных и судовых сталей. Диаметр 2,0мм, 2,5мм, 3мм и 4мм.

ОЗС-12 ЭСАБ-СВЭЛ - электрод отличает легкое зажигание и высокая эластичность дуги, возможность сварки по окисленным поверхностям. Сварка конструкций из углеродистой стали. 
Диаметр 2,5мм, 3мм и 4мм.

УОНИИ-13/55 ЭСАБ-СВЭЛ  - электрод для сварки особо ответственных конструкций из углеродистых и низколегированных сталей на постоянном токе, когда к металлу сварных швов предъявляют повышенные требования по пластичности и ударной вязкости.  Покрытие – основное.
Диаметр - 2,5мм, 3мм, 4мм и 5мм.

Для односторонней сварки трубопроводов большого диаметра применяют низководородные электроды пр-ва Япония - KOBELCO LB-52U или Nittetsu-16W.

При покупке электродов обращайте внимание на срок их годности. Просроченные электроды не обеспечат качественной сварки, т.е. надежного соединения деталей!
Хранить электроды необходимо в сухих помещениях в специальной упаковке, которая предотвратит попадание влаги. Если все же электроды отсырели, то поможет их просушка или прокалка.   
При сварке ответственных конструкций или трубопроводов для прокалки электродов применяют печи - переносные типа ЭПСЭ-10/400 или стационарные типа ПСПЭ-50/400, а для хранения прокаленных электродов на рабочем месте - термопеналы ТП-5/150.
 

разновидности, назначение, характеристики и режимы работы

Электроды ОК 46 пользуются популярностью у опытных и начинающих мастеров сварного дела. Их радует универсальность изделий и простота обращения. Отзывы о стержнях положительные.

Электрод, который варит сам.

Расшифровка маркировки

Полное название изделия – ESAB OK 4600, оно означает:

  • название производителя;
  • инициалы основателя фирмы – Оскара Кельберга;
  • испытываемую нагрузку, которую способен выдерживать шов.

Для изготовления стержня применяется проволока марки Св08. Снаружи она покрывается обмазкой, состоящей из рутила и целлюлозы.

Назначение ОК 46

Целью использования стержней является сварка цветных и черных металлов, тонких изделий с гальваническим защитным покрытием. Выпускаются они разного диаметра. Наиболее популярные – 4 и 3 мм.

Применяются в создании строительных конструкций, кораблей, в промышленности, в бытовых условиях. Низколегированные и низкоуглеродистые стали хорошо поддаются обработке сварочным электродом ОК 46.

Соединять детали можно в разных положениях: наносить горизонтальный, вертикальный и потолочный швы с использованием минимальных токов прямого и обратного направления. Перед применением стержней рекомендуется их просушить в течение не менее часа при +70…+90°С.

Разновидности электродов

ОК 46 имеют аналоги в виде Э46, СЕОК-46. Они поддерживают горение дуги, работают при переменном и постоянном токе в любом пространственном положении. Горячий металл разбрызгивается умеренно. Размеры варьируются в пределах 300-450 мм.

Заменой может служить ОЗС-12, АНО-4, МР-3 с рутиловым покрытием.

Многие показатели совпадают, но есть разница:

  • полярность им нужна только прямая;
  • отдельные фрагменты корки шлака удаляются с трудом;
  • поверхность шва выглядит вогнутой.

Аналоги рекомендованы к сварке тавровых и трубных конструкций.

По качеству шва близки к ОК 46 00 электроды с покрытием из целлюлозы и рутила – СЗСМ 46 и SE-46, в которых цифра показывает прочность шва на разрыв в кг/мм². Перед применением стержни рекомендовано прокалить в целях устранения непровара.

Процедура происходит при температуре 300°С не менее часа. Мастера не советуют это делать более 3 раз во избежание разрушения обмазки.

ОК 46 выпускает и фирма, находящаяся в Пензе. При изготовлении электродов используются те же материалы, что и у оригинала. Внешне изделия ничем не отличаются. Практика показала, что обмазка на стержне-аналоге держится хуже, горение дуги менее стабильное, но шов получается одинаковым.

ЭСАБ ОК 46 мастера заменяют марками: ОЗС 6, АНО с индексами 6, 23 и 29 М. С их помощью нельзя добиться качества сварки, но стоимость материалов намного ниже.

Аналоги не слишком качественные.

Технические характеристики

Электроды отличаются своими размерами, весом и другими параметрами. Общее в них – образование прочного шва с плавным переходом к поверхности основного металла.

Общая информация по диаметрам

По отзывам сварщиков составлен небольшой список рекомендаций по использованию изделий разной толщины.

2 мм – не рекомендуется применять при работе с трубопроводами. В остальных случаях они проявляют устойчивость к температурному воздействию.

2,5 мм – используются для соединения деталей из углеродистой и нержавеющей стали переменным током. Заготовки сначала нужно очистить металлическими щетками и шкуркой.

3 мм – их вязкость позволяет сваривать трубы.

4 мм – хорошо работают с постоянным напряжением. Требуют полного удаления следов ржавчины в месте наложения шва.

5 мм – при экономном расходе образуют ровный стык. Не рекомендуется варить короткой дугой.

Сварка электродом с минимальным количеством брызг.

Свойства при растяжении

Характеристики прочности, вязкости и пластичности рассчитываются по нахождению точек на графике растяжения в разное время. На практике определение производится по кривым, расположенным в координатах нагрузки и удлинения. Данные записываются на специальной ленте.

По графикам специалисты рассчитывают свойства материала. Среднее относительное удлинение при сварке ОК 46 – 25%, предел прочности – 510 Мпа, текучести – 400 МПа.

Ударные свойства

Они связаны с вязкостью и равняются 35-140 Дж/см². Измерения проводятся при температурных пределах 0…-20°С. Нормой принято считать 33-70 Дж/см².

Сила тока

При работе используют ток постоянной и переменной полярности. В таблице приведены значения его силы в зависимости от толщины электрода и положения шва:

Диаметр (мм)Сила тока (А)
НижнееВертикальноеПотолочное
2,040-8040-6050-70
2,560-11060-9060-110
3,080-16080-14080-180
4,0110-210110-20090-220
5,0150-300150-280150-270

После изготовления электродов производитель складывает их в картонную упаковку. Каждая пачка содержит разное количество ОК 46 00. Зависит оно от длины и толщины стержней.

Количество в 1 кг

Диаметр (мм)Длина в смКоличество в 1 кг
2,03050
2,53545
3,03539
4,04519
5,03513

Продаются стержни в коробках весом 1-2,5 кг.

Электроды в удобных упаковках.

Плюсы и минусы

Преимущества:

  • возможность работы по загрязненным и ржавым поверхностям;
  • легкое осуществление поджига;
  • стабильное горение дуги;
  • выполнение вертикальных, горизонтальных и потолочных швов;
  • минимальное разбрызгивание расплавленного металла;
  • сварка при напряжении 50 В;
  • небольшой расход;
  • высокое качество соединения;
  • электроды имеют гарантию качества и сертификаты соответствия.

Недостатки:

  • при сварке необходимо держать угол около 35°;
  • швы наносить мелкими отрезками;
  • ударная вязкость низкая.

Перед работой нужно выдержать изделия в термопенале не менее часа.

Сварка возможна по ржавчине и загрязненному металлу.

Особенности применения

Действия с ОК 46 производятся с выполнением нескольких правил:

  • для сварки используется ток переменного и постоянного направления;
  • шов накладывается во всех направлениях: горизонтальном, потолочном и вертикальном;
  • стержень применяется для соединения деталей с оцинковкой и другим покрытием;
  • легко поджигается;
  • электрод служит главным материалом при заполнении пустот в конструкциях;
  • не рекомендуется делать длинных швов.

Расходный материал на заводе укладывается в герметичную упаковку для защиты от влаги, потом – в картонную коробку. В таком виде изделия легко переносят несколько перевозок и хранятся длительное время на складах.

Удобная килограммовая пачка.

Доступные режимы работы и сварки

Правильные условия деятельности создаются при соблюдении подбора стержней в зависимости от направления шва в пространстве. Широкий диапазон параметров помогает в этом поиске вместе с таблицами и графиками. Аппарат не требует большого напряжения и подключается к домашней сети.

Пользователи отмечают недостатки расходников:

  • высокие цены;
  • плохо провариваются заготовки с толстыми стенками;
  • обмазка быстро впитывает влагу.

Эти недочеты не портят общего впечатления от универсальных электродов.

Характеристики шва ОК 46

Место сварки состоит из расплавленного металла, в составе которого находятся в процентном содержании:

  • углерод – 0,08;
  • марганец – 0,4;
  • кремний – 0,3;
  • фосфор – 0,03;
  • сера – 0,025.

Он застывает при охлаждении и образует ровный шов с плавным переходом в поверхность деталей.

Гладкий сварочный шов.

Кто производит

Производитель стержней – шведская компания ESAB («ЭСАБ»). Это мировой лидер в выпуске сварочного оборудования, инструмента и расходных материалов. Электроды имеют множество положительных отзывов: они легки в использовании и обладают высоким качеством, дают ровный и прочный шов. Опытные мастера рекомендуют расходники для новичков.

У этих изделий есть недостатки: подделки и высокие цены. Они могут иметь несколько иные названия и массу. Например, АК46. Многие предприятия в нашей стране и за рубежом производят аналоги шведской продукции, которые также отличаются названиями: ESAB-СВЭЛ ОК 46 Д3, ESAB ОК 74.46 d4,0 или 5 ОК 46.

Выпускают их в Пензе и Новосибирске, Санкт-Петербурге и Екатеринбурге, Нижнем Новгороде и Симферополе, Красноярске, Владивостоке, а также в городах Германии и Японии.

Во избежание подделок нужно приобретать материалы у представителей, имеющих сертификаты. ОК 46 – это гарантия результата сварки даже у начинающего мастера. Электрод с плотной обмазкой хорошо защищает ванну от внешних факторов даже при расплавившемся конце.

для чего они нужны и где применяются?

Электроды ОК 46 для сваривания сталей довольно популярны среди сварщиков. На эту продукцию оставлено много положительных отзывов. Профессионалов радует хороший функционал расходного материала, а новичков – его универсальность и простота в обращении. Давайте разберемся, для чего предназначены эти электроды и стоит ли их приобретать.

Содержание статьи

Расшифровка электродов ОК 46

Электроды ESAB ОК 46 имеют довольно простую маркировку. Прежде всего, это продукция компании, имеющей международную известность. Промышленное предприятие ESAB имеет более чем 110-летний опыт изготовления и усовершенствования сварочных материалов. Используемая в международной маркировке аббревиатура ОК – не что иное, как инициалы основателя компании-производителя Оскара Кельберга.  46, или же 46 00 – максимальная нагрузка, которую может испытывать шов, полученный в результате использования этих электродов.

Электроды ОК 46: технические характеристики

электроды ESAB OK 46 00

Электроды ЭСАБ ОК 46 покрыты рутилово-целлюлозной обмазкой. Стержень изготовлен из проволоки типа Св08 и Св08А.  Диаметр может быть 2мм, 3мм, 4мм (диапазон составляет 1.6-5 мм). После их использования сварной шов будет на 0,08% состоять из углерода, на 0,4% — из марганца, на 0,3% — из кремния, на 0,030% — из фосфора и на 0,025% из серы.

Напряжение холостого хода составляет 50 В.  Предел текучести равен 400 МПа, предел прочности – 510 МПа. Ударная вязкость колеблется от 35 Дж / см2 до 70 Дж / см2 при температуре от -20°C до 0°C. Сварка возможна во всех положениях. Можно производить сваривание короткими швами, формировать корневой проход, выполнять прихваточные швы. При этом используется как переменный ток, так и постоянный с обратной полярностью.

таблица зависимости диаметра электрода ок 46 от силы тока и положения сварки

Перед сваркой ОК 4600 рекомендуется прокалить. Это лучше всего осуществить при температуре от +70°С  до + 90°С. Время просушки – не менее часа.

Характеристика электродов разного диаметра

Чтобы знать, какая разновидность электродов ОК вам необходима, стоит учесть не только вид основного металла и оборудования. Предлагаем вашему вниманию описание качеств электродов на основе отзывов пользователей.

  • ОК диаметром 2 мм не могут использоваться при ремонте трубопроводов. Устойчивы к воздействию высоких температур.
  • 2,5 мм. Такие электроды лучше всего применять при варке нержавеющей и углеродистой стали, причем переменным током. Рабочую поверхность перед началом сварки стоит тщательно очистить от грязи и пыли.
  • 3 мм. Хорошо проявляют себя при работе, проводимой на трубопроводе. Вязкие.
  • 4 мм. Перед сваркой нужно удалить с металлических поверхностей всю ржавчину. Напряжение должно быть постоянным.
  • 5 мм. Нельзя применять при сварке короткой дугой. Очень хорошо наплавляют металл, при этом расходуются экономно.

Назначение электродов марки ОК 46

Электроды ОК 46 3мм и 4 мм широко применяются в строительстве, промышленности, судостроении, монтаже. Подходят они и для бытовых работ. С помощью таких электродов сваривают конструкции из низкоуглеродистых и низколегированных сталей, в том числе имеющие широкие зазоры. Так как есть возможность варить в положении сверху вниз, а дуга может стабильно гореть при минимальном токе, электроды марки ОК 46 используются при изготовлении деталей из тонкого металла. Вероятность прожига материала при этом минимальна, шов получается прочный и аккуратный. Можно также сваривать ими изделия, имеющие гальваническое покрытие.

Преимущества и недостатки

Перед тем, как приобрести электроды данной марки, следует ознакомиться с их преимуществами:

  • Сварка может осуществляться даже по ржавым и загрязненным поверхностям.
  • Осуществить первый и следующие поджиги изделия довольно просто.
  • Можно выполнять любые типы швов.
  • Разбрызгивание металла минимально.
  • Не требуется большого тепловложения.
  • Продукция имеет надлежащие сертификаты соответствия и гарантию качества от производителя.
  • Предусмотрены упаковки массой 2,5 кг, 2 кг и 1 кг, что довольно удобно при бытовой сварке.

К недостаткам можно отнести:

  • Угол наклона не может быть меньше, чем 35 градусов.
  • Относительно низкая ударная вязкость.
  • Наплавку даже протяженных швов нужно проводить небольшими отрезками.

Чтобы избежать иных недостатков, достаточно тщательно подбирать разновидность расходного материала для каждой отдельной операции с металлом, а также прислушиваться к советам экспертов.

В заключение

Если вы все еще сомневаетесь, какие электроды для сварки приобрести, обратите внимание на ok 4600. Они не только значительно расширяют спектр работ, которые можно провести, но и довольно экономичны: имеют небольшой расход вне зависимости от диаметра и при этом стоят недорого.  Универсальность, отличное качество шва, высокая скорость сварки – вот далеко не полный перечень преимуществ этих электродов.

Электроды ОК 46. 00 д. 2 мм. (пачка 2.0кг)

Универсальные сварочные электроды ОК 46 предназначены для сварки во всех пространственных положениях переменным (DC) и постоянным током (АС). Они широко применяются для сварки конструкционных и углеродистых сталей при ремонтах или монтаже инженерных сетей. Отличительной положительной чертой электродов ОК 46 является способность к легкому поджигу, в том числе при повторном поджигании. Их можно использовать для сваривания изделий с гальваническим покрытием (оцинкованных). Низкое тепловложение электродов позволяет использовать их для сварки широких зазоров, а нечувствительность к поверхностям с налетом ржавчины и загрязнениями обеспечивает им высокую технологичность.
Благодаря своим высоким качественным показателям, электроды ОК 46 производства завода ЭСАБ-СВЭЛ нашли широкое применение в различных отраслях промышленного производства, где необходимо применение эффективных сварочных материалов. Минимальное разбрызгивание и легкость удаления шлака придают шву хороший эстетический вид. Несмотря на универсальность применения электродов, они обеспечивают хорошие свойства шва и подходят идеально для коротких и корневых швов, а также для прихваток. Возможность применения электродов во всех положениях в пространстве делают их незаменимыми при проведении работ в ограниченных пространствах.
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭЛЕКТРОДОВ ОК 46

В качестве материала стержня применяется сварочная стальная проволока Св08 и Св08А.
Диаметр сварочной проволоки 2, 2,5, 3, 4 и 5 мм.
Производительность наплавки составляет около 1,4 кг/час. Этим определяется расход электродов, в среднем 1,4 кг для получения одного килограмма наплавленного металла.
Рабочая сила тока: 3 мм – 80-130А, 4 мм — 110-170А, 5 мм — 150-200А.
Электроды ОК 46 упакованы в коробки из прочного высококачественного картона защищенного термоусадочной пленкой. Герметичная упаковка надежно защищает содержимое от внешних воздействий и обеспечивает возможность продолжительного хранения без потери качества изделий. Упаковки с электродами покрытые толстой пленкой снаружи хорошо выдерживают неоднократные манипуляции при перевозках и складировании.

СКИДКИ ОТ ОБЪЕМА!!!

Использование записанных в скальп иктальных электроэнцефалограмм при детской эпилепсии со сложными парциальными припадками

Задний план: Авторы оценили полезность записанных на кожу головы иктальных электроэнцефалограмм (ЭЭГ) в диагностике эпилептогенной области при эпилепсии со сложными парциальными припадками.

Методы: Авторы проанализировали иктальную ЭЭГ 395 припадков у 43 пациентов со сложными парциальными припадками.На основании данных ЭЭГ пациенты были классифицированы по степени локализации очагов поражения. Затем результаты сравнивали с данными нейровизуализации.

Результаты: Только 10 пациентов попали в категорию «дискретных», что означает, что все начальные области (измеренные с помощью иктальной ЭЭГ) были локализованы в одной доле одного и того же полушария. Семь пациентов были отнесены к категории «латерализованных», что означает, что все начальные области были четко латерализованы в одном полушарии, но без согласованной локализации.Одиннадцать пациентов были классифицированы как «локализованные», что означает, что начальная область локализовалась одновременно в одних и тех же долях с обеих сторон или последовательно изменялась от одной доли в одном полушарии к той же доле в противоположном полушарии. У 15 пациентов не удалось определить начальную область, и они были отнесены к категории «не определено». Ни один пациент, которому было выполнено семь или более иктальных записей, не был отнесен к категории дискретных. Однако, если ограничиться только теми пациентами, у которых более 75% иктальных записей показали одну и ту же область начала, наблюдалась высокая корреляция между эпилептогенными поражениями, обнаруженными с помощью иктальной ЭЭГ, и теми, которые были обнаружены методами нейровизуализации.

Выводы: Результаты настоящего исследования показывают, что записи иктальной ЭЭГ полезны для определения эпилептогенной области при эпилепсии со сложными парциальными припадками, при условии, что более 75% записей иктальной ЭЭГ показывают одну и ту же область начала иктальной эпилепсии.

Вызванное мутацией возмущение специальной пары P840 в центре гомодимерной реакции у зеленых серных бактерий

  • Heathcote, P., Файф, П. К. и Джонс, М. Р. Реакционные центры: структура и эволюция биологической солнечной энергии. Trends Biochem. Sci. 27, 79–87 (2002).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Хоманн-Марриотт М.Ф. и Бланкеншип Р.Э. Эволюция фотосинтеза. Анну. Преподобный завод. Биол. 62, 515–548 (2011).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Хауска, Г., Шёдл, Т., Ремиджи, Х. и Циотис, Г. Реакционный центр зеленых серных бактерий. Биохим. Биофиз. Acta 1507, 260–277 (2001).

    CAS PubMed Google Scholar

  • О-ока, Х. Реакционный центр 1-го типа фотосинтетических гелиобактерий. Photochem. Photobiol. 2007. Т. 83. С. 177–186.

    CAS PubMed Google Scholar

  • Heinnickel, M. & Golbeck, J.H. Гелиобактериальный фотосинтез. Фотосинт. Res. 92, 35–53 (2007).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Цукатани Ю., Ромбергер С. П., Голбек Дж. Х. и Брайант Д. А. Выделение и характеристика гомодимерного комплекса реакционного центра I типа из Candidatus Chloracidobacterium thermophilum, аэробного хлорофотрофа. J. Biol. Chem. 287. С. 5720–5732 (2012).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Брайант, Д.А. и Фригаард, Н. Ю. Прокариотический фотосинтез и фототрофия в свете. Trends Microbiol. 14. С. 488–496 (2006).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Deisenhofer, J., Epp, O., Miki, K. & Michel, H. Структура белковых субъединиц в центре фотосинтетической реакции Rhodopseudomonas viridis при разрешении 3Å. Nature 318, 618–626 (1985).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Иордания, П.и другие. Трехмерная структура фотосистемы I цианобактерий с разрешением 2,5 Å. Nature 411, 909–917 (2001).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • Цинь, X., Шуга, М., Куанг, Т. и Шен, Дж. Р. Фотосинтез. Структурные основы путей передачи энергии в суперкомплексе PSI-LHCI растений. Science 348, 989–995 (2015).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • Феррейра, К.Н., Айверсон, Т. М., Маглауи, К., Барбер, Дж. И Ивата, С. Архитектура фотосинтетического центра выделения кислорода. Science 303, 1831–1838 (2004).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Гуськов А. и др. Фотосистема II цианобактерий с разрешением 2,9 Å и роль хинонов, липидов, каналов и хлоридов. Nat. Struct. Мол. Биол. 16, 334–342 (2009).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Умена, Ю., Каваками К., Шен Дж. Р. и Камия Н. Кристаллическая структура выделяющей кислород фотосистемы II при разрешении 1,9 Å. Nature 473, 55–60 (2011).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • Аллен, Дж. Ф. Гипотеза окислительно-восстановительного переключателя для происхождения двух световых реакций в фотосинтезе. FEBS Lett. 579. С. 963–968 (2005).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Олсон, Дж.М. и Бланкеншип Р. Э. Размышления об эволюции фотосинтеза. Фотосинт. Res. 80. С. 373–386 (2004).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Azai, C. et al. Гетерогенное прикрепление метки к белку ядра гомодимерного фотосинтетического реакционного центра 1 типа у зеленой серной бактерии Chlorobaculum tepidum . Биохим. Биофиз. Acta 1807, 803–812 (2011).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Кондо, Т., Ито, С., Мацуока, М., Азаи, С. и О-ока, Х. Менахинон как вторичный акцептор электронов в гомодимерном фотосинтетическом реакционном центре I типа Heliobacterium modesticaldum . J. Phys. Chem. В 119, 8480–8489 (2015).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Садекар С., Раймонд Дж. И Бланкеншип Р. Е. Сохранение отдаленно связанных мембранных белков: центры фотосинтетических реакций имеют общее структурное ядро.Мол. Биол. Evol. 23, 2001–2007 (2006).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Ишикита, Х., Сэнгер, В., Биесядка, Дж., Лолл, Б. и Кнапп, Э. У. Как центры фотосинтетической реакции контролируют окислительную способность пар хлорофилла P680, P700 и P870. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 103, 9855–9860 (2006).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Такахаши, Р., Hasegawa, K. & Noguchi, T. Влияние распределения заряда по димеру хлорофилла на окислительно-восстановительный потенциал P680 в фотосистеме II, как было исследовано расчетами теории функционала плотности. Биохимия 47, 6289–6291 (2008).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Ногучи, Т. Фурье-спектроскопия в инфракрасной области спектра специальных парных бактериохлорофиллов в гомодимерных реакционных центрах гелиобактерий и зеленых серных бактерий.Фотосинт. Res. 2010. Т. 104. С. 321–331.

    CAS PubMed Google Scholar

  • Бретон, Дж. Инфракрасная спектроскопия с преобразованием Фурье первичных доноров электронов в реакционных центрах фотосинтеза типа I. Биохим. Биофиз. Acta 1507, 180–193 (2001).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Mezzetti, A., Seo, D., Leibl, W., Sakurai, H. & Breton, J. Исследование FTIR ступенчатого сканирования с временным разрешением на первичном доноре реакционного центра из зеленой серной бактерии Хлоробиум тепидум .Фотосинт. Res. 75, 161–169 (2003).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Набедрик Э., Лейбл В. и Бретон Дж. ИК-Фурье спектроскопия фотоокисления первичных доноров в Фотосистеме I, Heliobacillus mobilis и Chlorobium limicola . Сравнение с пурпурными бактериями. Фотосинт. Res. 48, 301–308 (1996).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Ногучи, Т., Fukami, Y., Oh-oka, H. & Inoue, Y. Инфракрасное исследование с преобразованием Фурье на первичном доноре P798 из Heliobacterium modesticaldum : цистеин S-H, связанный с P798, и молекулярные взаимодействия карбонильных групп. Biochemistry 36, 12329–12336 (1997).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Noguchi, T., Kusumoto, N., Inoue, Y. & Sakurai, H. Электронная и колебательная структура катион-радикала P840 в предполагаемом гомодимерном реакционном центре из Chlorobium tepidum по данным FTIR-спектроскопии.Biochemistry 35, 15428–15435 (1996).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Li, Y. et al. Мутация предполагаемого донора водородной связи в P700 фотосистемы I. Биохимия 43, 12634–12647 (2004).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Witt, H. et al. Водородная связь с P700: сайт-направленный мутагенез треонина A739 фотосистемы I в Chlamydomonas reinhardtii .Биохимия 41, 8557–8569 (2002).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Фейлер, У., Албуи, Д., Роберт, Б. и Маттиоли, Т. А. Симметричные структурные особенности и сайт связывания первичного донора электронов в реакционном центре Хлоробий . Биохимия 34, 11099–11105 (1995).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Азаи, К., Харада, Дж.& О-ока, Х. Система экспрессии генов у зеленых серных бактерий путем конъюгативного переноса плазмиды. PLoS One 8, e82345 (2013).

    ADS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • Фейлер, У. и Хауска, Г. В аноксигенных фотосинтетических бактериях (редакторы Р. Э. Бланкеншип, М. Т. Мэдиган и К. Э. Бауэр) 665–685 (Kluwer Academic Publishers, 1995).

  • Jordanides, X.J., Scholes, G.D., Shapley, W.А., младший, Р. и Флеминг, Г. Р. Электронные связи и динамика переноса энергии в окисленном первичном доноре электронов бактериального реакционного центра. J. Phys. Chem. В 108, 1753–1765 (2004).

    CAS Google Scholar

  • Реймерс, Дж. Р. и Хаш, Н. С. Природа электронного поглощения в ближней инфракрасной области на длине волны 1250 нм в спектрах катион-радикалов особых пар в центрах фотосинтетических реакций Rhodobacter sphaeroides и Rhodopseudomonas viridis .Варенье. Chem. Soc. 117, 1302–1308 (1995).

    CAS Google Scholar

  • Реймерс, Дж. Р., Хаттер, М. К. и Хаш, Н. С. Спектроскопия низколежащих полос катион-радикалов специальной пары фотосинтетических реакционных центров. Фотосинт. Res. 55, 163–171 (1998).

    CAS Google Scholar

  • Фаулер, К.Ф., Ньюджент, Н.А. и Фуллер, Р.С. Выделение и характеристика фотохимически активного комплекса из Chloropseudomonas ethylica .Proc. Natl. Акад. Sci. USA 68, 2278–2282 (1971).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Kjaer, B. & Scheller, H. V. Изолированный комплекс реакционного центра из зеленой серной бактерии Chlorobium vibrioforme может восстанавливать ферредоксин с высокой скоростью. Фотосинт. Res. 47, 33–39 (1996).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Окумура, Н., Шимада, К. и Мацуура, К. Фотоокисление мембраносвязанного и растворимого цитохрома c в зеленой серной бактерии Chlorobium tepidum . Фотосинт. Res. 41, 125–134 (1994).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Бретон, Дж., Набедрик, Э. и Парсон, У. В. Новый инфракрасный электронный переход окисленного первичного донора электронов в бактериальных реакционных центрах: способ оценки резонансных взаимодействий между бактериохлорофиллами.Biochemistry 31, 7503–7510 (1992).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Reimers, J. R. & Hush, N. S. Единое описание электрохимических, зарядовых и спектроскопических свойств катион-радикала специальной пары в бактериальном фотосинтезе. Варенье. Chem. Soc. 126, 4132–4144 (2004).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Фригаард, Н.У. и Брайант, Д. А. Инактивация хромосомных генов зеленой серной бактерии Chlorobium tepidum путем естественной трансформации. Прил. Environ. Microbiol. 67, 2538–2544 (2001).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • Tsukatani, Y., Miyamoto, R., Itoh, S. & Oh-oka, H. Функция субъединицы PscD в комплексе гомодимерного реакционного центра фотосинтетической зеленой серной бактерии Chlorobium tepidum изучалась путем инактивации инсерционного гена.Регулирование передачи энергии и опосредованное ферредоксином восстановление NADP + на цитоплазматической стороне. J. Biol. Chem. 279. С. 51122–51130 (2004).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Мозер, К. К., Кеске, Дж. М., Варнке, К., Фарид, Р. С. и Даттон, П. Л. Природа биологического переноса электронов. Nature 355, 796–802 (1992).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Пейдж, К.К., Мозер, К. С., Чен, X. и Даттон, П. Л. Принципы естественной инженерии туннелирования электронов при биологическом окислении-восстановлении. Nature 402, 47–52 (1999).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Бреттель К. и Лейбл У. Перенос электронов в фотосистеме I. Biochim. Биофиз. Acta. 1507, 100–114 (2001).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Окубо, Т., Tomo, T., Sugiura, M. & Noguchi, T. Нарушение структуры P680 и распределения заряда на его катион-радикале в изолированных комплексах реакционного центра фотосистемы II, что выявлено с помощью инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье. Биохимия 46, 4390–4397 (2007).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Мантеле, В. Г., Волленвебер, А. М., Набедрик, Э. и Бретон, Дж. Инфракрасная спектроэлектрохимия бактериохлорофиллов и бактериофеофитинов: влияние фотосинтезирующих бактерий на связывание пигментов в реакционном центре.Proc. Natl. Акад. Sci. USA 85, 8468–8472 (1988).

    ADS CAS PubMed Google Scholar

  • Ригби, С. Э., Эванс, М. К. и Хиткот, П. Спектроскопия электронного ядерного двойного резонанса (ДЭЯР) радикалов в фотосистеме I и связанных с ней фотосинтетических реакционных центрах 1 типа. Биохим. Биофиз. Acta 1507, 247–259 (2001).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Ригби, С.Э., Тапар Р., Эванс М. С. и Хиткот П. Электронная структура P840 + . Первичный донор Chlorobium limicola f. sp. thiosulphatophilum фотосинтетический реакционный центр. FEBS Lett. 350, 24–28 (1994).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Бретон, Дж., Бибикова, М., Оестерхелт, Д. и Набедрик, Э. Конформационная гетерогенность ГА акцептора электронов бактериофеофитина в реакционных центрах из Rhodopseudomonas viridis , выявленная с помощью инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье и сайт-направленного мутагенеза .Biochemistry 38, 11541–11552 (1999).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Уэбб Б. и Сали А. Сравнительное моделирование структуры белков с помощью MODELLER. Curr. Protoc. Биоинформатика 47, 5.6.1–5.6.32 (2014).

    Google Scholar

  • Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

    Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

    Электроформирование гигантских однослойных везикул с использованием встречно-штыревых электродов ITO

    Электроформирование гигантских однослойных пузырьков с использованием встречно-штыревых электродов ITO

    Копланарный встречно-штыревой электрод был использован в качестве новой электродной системы для образования гигантских однослойных пузырьков (GUV).Формирование GUV с использованием встречно-штыревых электродов было подробно исследовано в отношении различных параметров, включая высоту раствора, ширину электрода, амплитуду и частоту полей переменного тока и температуру. Встречно-штыревые электроды меньшей ширины при тех же условиях генерировали более крупные GUV. Согласно результатам как экспериментального, так и трехмерного моделирования, высота раствора более 600 мкм не влияет на формирование GUV. ГУВ получены в широком диапазоне частот от 1 Гц до 10 4 Гц и амплитуды поля от 1 В до 10 В.Диаметр GUV уменьшался с увеличением частоты при постоянной амплитуде и увеличивался с увеличением амплитуды от 1 В до 5 В, а затем уменьшался с 5 В до 10 В при 10 Гц. Экспериментально получена фазовая диаграмма, основанная на изменении частоты и амплитуды переменного тока, которая может быть использована для прогнозирования гальванопластики GUV.

    У вас есть доступ к этой статье

    Подождите, пока мы загрузим ваш контент... Что-то пошло не так. Попробуй еще раз?

    Множественные временные шкалы, наблюдаемые в спонтанно эволюционировавших нейронах на матрице электродов КМОП высокой плотности

    Недавние исследования подчеркнули важность мультиплексных сетей - взаимозависимых сетей с общими узлами и различными типами соединений - в системах, прежде всего не связанных с нейробиологией.Хотя мультиплексные свойства сетей часто не учитываются, большинство сетей на самом деле являются мультиплексными сетями, и особенности мультиплексирования сетей могут сильно влиять на поведение сети (например, отказоустойчивость). Таким образом, изучение нейронных сетей потенциально может быть значительно улучшено с помощью мультиплексной перспективы. Учитывая широкий спектр зависимых от времени ритмов и явлений, присутствующих в нейронных системах, мы решили изучить мультиплексные сети отдельных нейронов с зависимыми от времени связями.Для изучения этих сетей мы использовали энтропию переноса - теоретико-информационную величину, которую можно использовать для измерения линейных и нелинейных взаимодействий - для систематического измерения связи между отдельными нейронами в разных временных масштабах в культурах кортикальных и гиппокампальных срезов. Мы зарегистрировали импульсную активность почти 12000 нейронов в 60 образцах ткани, используя массив из 512 электродов с межэлектродным расстоянием 60 микрометров и временным разрешением 50 микросекунд. Насколько нам известно, этот метод подготовки и записи представляет собой превосходное сочетание количества записанных нейронов и временного и пространственного разрешения записи по сравнению с любой доступной в настоящее время системой in vivo.Мы обнаружили, что нейроны с высокой степенью связи («концентраторы») были локализованы в определенных временных масштабах, что, как мы предполагаем, увеличивает отказоустойчивость сети. Напротив, большая часть нейронов, не являющихся хабом, не была локализована в определенных временных масштабах. Кроме того, мы обнаружили, что связь в долгосрочном и краткосрочном масштабе не коррелировала. Наконец, мы обнаружили, что сети с большим временным масштабом были значительно менее модульными и более дезассортативными, чем сети с коротким временным масштабом в обоих типах тканей. Насколько нам известно, этот анализ представляет собой первое систематическое исследование временно зависимых мультиплексных сетей между отдельными нейронами.

    Эпителиальный Ca2 + -сенсорный белок является альтернативой кальмодулину для создания функциональных каналов KCNQ1 - FullText - Cellular Physiology and Biochemistry 2015, Vol. 36, № 5

    Абстрактные

    Предпосылки / цели: Каналы KCNQ транспортируют ионы K + и участвуют в различных клеточных функциях. Каналы непосредственно собираются с вспомогательными белками, такими как повсеместно распространенный белок-сенсор Ca 2+ , кальмодулин (CaM), для настройки физиологических свойств тканеспецифичным образом.Хотя многие CaM-подобные Ca 2+ -сенсорные белки были идентифицированы у эукариот, то, как каналы KCNQ избирательно взаимодействуют с CaM и как гомологи модулируют функциональность каналов, остается неясным. Методы: Мы разработали протоколы для оценки взаимодействия между С-концом KCNQ1 (KCNQ1cL), меченным зеленым флуоресцентным белком, и датчиками Ca 2+ путем обнаружения его флуоресценции с помощью эксклюзионной хроматографии и электрофорезированных гелей.Влияние белков-сенсоров Ca 2+ на активность KCNQ1 измеряли с помощью метода фиксации напряжения двумя электродами ооцитов Xenopus . Результаты: При совместной экспрессии CaM и KCNQ1cL они собираются в стехиометрии 4: 4, образуя гетерооктамер. Среди девяти протестированных гомологов CaM было обнаружено, что Calml3 образует гетерооктамер с KCNQ1cL и ассоциируется с полноразмерным KCNQ1 конкурентным образом с CaM. При совместной экспрессии в ооцитах Calml3 придавал каналам KCNQ1 устойчивость к потенциалозависимому истощению фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата с помощью чувствительной к напряжению фосфатазы. Заключение: Поскольку Calml3 тесно связан с CaM и заметно экспрессируется в эпителиальных клетках, Calml3 может быть составной частью эпителиальных каналов KCNQ1 и подчеркивает молекулярное разнообразие эндогенных каналов KCNQ1.

    © 2015 S. Karger AG, Базель


    Введение

    KCNQ1 представляет собой порообразующую субъединицу потенциалозависимых каналов K + . Унаследованные мутации в KCNQ1 изменяют продолжительность сердечного потенциала действия, приводя в худших случаях к опасным для жизни аритмиям [1,2].Каналы KCNQ1 также экспрессируются во множестве типов эпителия и функционируют в рециклинге K + и поддержании мембранных потенциалов покоя [3,4,5,6,7,8,9]. Эти функции каналов вносят вклад в интимные эпителиальные функции экскреции ионов и поддерживают активность управляемых Na + электрогенных переносчиков [10]. Подобно другим встроенным в мембрану ионным каналам, каналы KCNQ1 собираются с различными вспомогательными субъединицами, чтобы стать функциональными [11,12,13,14]. Непорообразующие, одиночные охватывающие мембраны субъединицы KCNE модулируют электрофизиологические свойства и субклеточные локализации каналов KCNQ1 [15,16,17].В цитоплазматическом домене каналов белки, закрепляющие А-киназу, связывают и связывают связанные с фосфорилированием ферменты, такие как протеинкиназа А и фосфатаза, которые улучшают регуляцию вегетативных нервов в сердце и мозге [18,19,20,21,22 ]. Следовательно, образование макромолекулярного комплекса необходимо для физиологической функции KCNQ1.

    KCNQ1 связывается с прототипным Ca 2+ -сенсором CaM в своем цитоплазматическом домене [23,24,25,26,27,28]. Связывание CaM, по-видимому, способствует правильной укладке цитоплазматического домена и придает чувствительность Ca 2+ к KCNQ1 [24,25].И Ca 2+ -связанный, и Ca 2+ -несвязанный CaM могут взаимодействовать с KCNQ1 [29,30,31]. Таким образом, CaM является составной частью функциональных каналов KCNQ1. У эукариот несколько генов кодируют CaM-подобные Ca 2+ -сенсоры [32,33,34], и эти CaM-подобные белки по-разному модулируют активность ферментов и ионных каналов путем прямого связывания [35,36]. Однако селективность взаимодействий KCNQ1 с датчиками Ca 2+ и различия в свойствах каналов в результате различных сборок требовали уточнения.

    Чтобы ответить на эти вопросы, мы разработали биохимический подход для оценки взаимодействий между KCNQ1 и Ca 2+ -сенсорами путем мониторинга GFP-меченного цитоплазматического С-конца KCNQ1. Системы обнаружения, основанные на флуоресценции GFP, позволили нам определить, что Calml3 может заменять CaM, чтобы облегчить укладку цитоплазматического домена KCNQ1 [37,38]. Поскольку Calml3 изобилует множеством типов эпителиальных клеток, включая клетки молочной железы [39,40] и желудочно-кишечного тракта [41], он может действовать как партнер по связыванию для KCNQ1, поддерживая эпителиальный транспорт K + .

    Материалы и методы

    Молекулярная биология

    Для создания слитых белков GFP мы использовали GFPuv (Clontech, Mountain View, CA) в качестве родительского. Сайты Nco, I, Bam, HI и Xho, I были удалены, а аланин в положении 206 был заменен лизином для предотвращения образования димера. Мутант GFP (аминокислоты 2-237) был помечен окта-гистидином на N-конце, связанным с цитоплазматическим доменом (аминокислоты: 354-676) человеческого KCNQ1 (KCNQ1cL) [42] через вирус травления табака. сайт расщепления протеазой и субклонировали в вектор pET28a (Novagen / Merck Millipore, Гармштадт, Германия).KCNQ1 и канонический канал внутреннего выпрямителя K + , Kir2.3 [43], были субклонированы в вектор pGEM (Promega, Madison, WI). ПЦР-фрагменты белков-сенсоров Ca 2+ CaM (номер доступа в GenBank: M19380.1), Calml3 (NM_027416.3), Calml4a (NM_138304.2), Calml4b (NM_001102468.1), NCS-1 (AF020184. 1), NCALD (NM_134094.4), Hpca (NM_001130419.2), VILIP-1 (NM_012038.4), KChIP2a (AB044570.1) и Calp (AF305071.1) были амплифицированы из кДНК переднего мозга мыши и клонированы в pCDFDuet. -1 с использованием стандартных процедур клонирования.Для экспрессии в клетках 293T (HEK) почек человека, KCNQ1, CaM и Calml3 были субклонированы в векторы pcDNA3 (Life Technologies, CA), pEGFP-N1 (Clontech) и pCMV-Myc-N (Clontech) соответственно. Конструкции проверяли секвенированием ДНК. Выравнивание последовательностей проводили с помощью программы «T-Coffee» [44]. Мутантный белок дикого типа и дефектный по ферментам (C363S) Ciona Кишечник потенциал-чувствительной фосфатазы (Ci-VSP) был любезно предоставлен доктором Ясуси Окамура [45].

    Экспрессия белка

    Клетки E. coli Rosetta 2 (DE3) (Novagen) использовали в качестве штамма-хозяина для экспрессии белка. В культуральную среду (бульон Terrific) добавляли три антибиотика (хлорамфеникол, стрептомицин и канамицин) для селективного роста трансформированных клеток. Для индукции добавляли изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид до конечной концентрации 0,1 мМ и клетки инкубировали при 18 ° C в течение ночи.

    Колонка для эксклюзионной хроматографии с определением размера флуоресценции (FSEC)

    Осадок клеток, собранный из 0.5 мл ночных культур E.coli разрушали 0,4 мл лизирующего буфера с использованием ультразвукового аппарата UD-100 (TOMY, Токио, Япония). Буфер для лизиса содержал 40 мМ HEPES-NaOH (pH 8,0), 500 мМ NaCl, 2 мМ 2-меркаптоэтанол и 1 мМ фенилметилсульфонилфторид (PMSF) с добавлением полного коктейля ингибиторов протеаз, не содержащих ЭДТА (Roche, Mannheim, Germany). Лизат осветляли центрифугированием и аликвоту (10 мкл) подвергали гель-фильтрации на колонках Superdex 200 5/150 GL (GE Healthcare, Питтсбург, США), уравновешенных буфером, содержащим 10 мМ HEPES-NaOH (pH 7.0) и 500 мМ NaCl. Хроматография контролировалась системой ÄKTA UNICORN (GE Healthcare), а путь потока, исходящий из колонки SEC, был напрямую подключен к флуорометру RF-20A (Shimazu, Киото, Япония). Сбор данных контролировался и сохранялся в управляющем программном обеспечении UNICORN.

    Обнаружение флуоресценции в геле

    Лизат клеток E. coli (100 мкл), приготовленный, как описано выше, инкубировали при различных температурах в течение 10 минут, а затем центрифугировали при 50 000 x g в течение 20 минут.Небольшую аликвоту супернатанта (1,25 мкл) разбавляли буфером для лизиса, смешивали со стандартным буфером для образцов Лэммли и подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE). Флуоресцентную визуализацию выполняли с использованием сканера Typhoon 9410 (GE Healthcare), где GFP возбуждали 488-нм лазером, а изображения подвергали денситометрическому анализу с использованием программного обеспечения ImageJ 1.40g [46].

    Анализ иммунопреципитации

    Клетки HEK трансфицировали плазмидами, несущими KCNQ1, CaM или Calml3, с использованием реагента для трансфекции ДНК X-tremeGENE 9 (Roche, Mannheim, Germany).Через два дня после трансфекции клетки промывали и собирали в ледяной забуференный фосфатом физиологический раствор. Клетки обрабатывали ультразвуком в 500 мкл буфера для приготовления мембран (20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 12,5 мМ KCl, 0,5 мМ ЭДТА, 1 мМ PMSF с добавлением полной смеси ингибиторов протеаз). Мембранные фракции собирали ультрацентрифугированием и хранили при -80 ° C. Мембранные белки солюбилизировали 2% (об. / Об.) Triton X-100 в буфере для приготовления мембран. После предварительно абсорбированного неспецифического связывания с неиммунным IgG и протеином G-сефарозой (GE Healthcare) либо кроличьи анти-KCNQ1 (APC-022; Alomone), либо мышиные анти-c-Myc антитела (Clontech) смешивали с экстрактом. для выделения белковых комплексов.Иммунные комплексы разделяли с помощью SDS-PAGE. Перед переносом протеинов, подвергнутых электрофорезу, на мембраны из поливинилидендифторида, гели были вырезаны ниже 60 кДа для обнаружения KCNQ1 и выше 25 кДа для обнаружения Calml3.

    Электрофизиологическая запись и анализ данных

    Лечение лягушек ( Xenopus laevis ) проводилось в соответствии с Руководством по использованию лабораторных животных Медицинской школы Университета Осаки. Ооциты были удалены хирургическим путем у лягушек, анестезированных 0.35% метансульфоната трикаина (Sigma-Aldrich, Миссури) и дефолликулировали в растворе коллагеназы типа I с концентрацией 1 мг / мл (Life Technologies). Все клоны были транскрибированы in vitro с помощью наборов mMESSAGE mMACHINE Transcription Kit (Life Technologies). КРНК KCNQ1 (0,5 нг) вводили в ооциты в различных комбинациях с кРНК кРНК CaM или Calml3 (10 нг) и кРНК Ci-VSP (1-5 нг). Мембранные токи регистрировали с использованием обычного метода фиксации напряжения с двумя микроэлектродами с усилителем GeneClamp 500 (Molecular Devices, Калифорния) через 3-5 дней после инъекции кРНК в ооциты.Все эксперименты проводились при температуре окружающей среды (20-24 ° C). Стеклянные электроды имели сопротивление 0,4-1,2 МОм при заполнении 3 М KCl. Раствор ванны для регистрации KCNQ1 содержал 2 мМ KCl, 96 мМ NaCl, 2 мМ CaCl 2 , 1 мМ MgCl 2 , 5 мМ HEPES и 150 мкМ нифлуминовую кислоту (pH 7,35 с КОН). Для записи Kir2.3 концентрации KCl и NaCl были изменены до 40 мМ и 58 мМ соответственно. Протоколы фиксации напряжения описаны в легенде каждого рисунка. Вычитание утечки производилось путем вычитания линейной омической функции, рассчитанной из разницы амплитуд тока при -100 мВ и -90 мВ.Исследуемые ооциты были приготовлены как минимум из пяти разных лягушек. Сбор данных и подгонка выполнялись с использованием программного обеспечения Clampfit (Molecular Devices) и SigmaPlot (Systat Software, Чикаго, Иллинойс). Данные представлены в виде среднего значения ± S.E.M. (n = количество наблюдений).

    Результаты

    Поскольку эукариотические клетки, но не прокариотические клетки, экспрессируют CaM-подобные Ca 2+ -сенсорные белки [32,33,34], мы выбрали E. coli в качестве штамма-хозяина для изучения взаимодействия между KCNQ1 и CaM.Однако бактерии не являются идеальной системой экспрессии для мембранных белков млекопитающих для сохранения нормальной функции. Таким образом, мы экспрессировали цитоплазматический C-конец KCNQ1 (KCNQ1cL) с CaM для восстановления белкового комплекса в клетках (рис. 1A). Нам удалось очистить большое количество гетерооктамера со стехиометрией 4: 4, как сообщалось ранее (рис. 1B) [24,25]; однако масштаб культивирования и процедура очистки препятствовали нашей способности эффективно и количественно оценить биохимические свойства комплекса.

    Рис. 1

    Детектирование комплекса KCNQ1-CaM на основе флуоресценции, разделенное с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC). A. Схематическое изображение KCNQ1. Канал KCNQ1 представляет собой порообразующую субъединицу, состоящую из 6 трансмембранных спиралей и 4 цитоплазматических спиралей (от спирали A до спирали D). Цитоплазматический C-конец KCNQ1 (KCNQ1cL) может быть экспрессирован в растворимой фракции в присутствии CaM. KCNQ1cL вмещает гекса-метку His и / или GFP на N-конце, не нарушая взаимодействия CaM.Б. Окрашивание очищенного комплекса KCNQ1cL -CaM в геле. Гомогенно очищенный комплекс His-меченного KCNQ1cL и CaM подвергали SDS-PAGE и окрашивали CBB R-250. C. Флуоресцентно-детекторный SEC (FSEC). Лизаты из клеток, экспрессирующих GFP-меченный KCNQ1cL в присутствии (вверху) или в отсутствие (внизу) CaM, подвергали колонке SEC. Флуорометр был подключен к выходу колонки и использовался для отслеживания флуоресценции GFP в элюате. На вставке на верхней панели показано положение элюирования стандартных белков: димера бычьего сывороточного альбумина (132 кДа; незаштрихованный кружок), мономера (66 кДа; открытый треугольник) и GFP (27 кДа; незакрашенный квадрат).

    Разработка методов обнаружения на основе флуоресценции для комплекса KCNQ1-CaM

    Затем мы экспрессировали конструкцию KCNQ1cL, помеченную GFP на ее N-конце (рис. 1A). Клеточный лизат был разделен на колонке для эксклюзионной хроматографии (SEC), которая подключена последовательно к флуоресцентному монитору для обнаружения флуоресценции GFP в элюате (FSEC) (рис. 1C) [47]. В отсутствие CaM наблюдаются два пика флуоресценции: первый был собран в пустом объеме, который предположительно отражает загрязненные агрегаты, а второй был собран в объеме элюирования, близком к молекулярной массе GFP, что указывает на продукты разложения.Однако в присутствии CaM пик флуоресценции отчетливо наблюдался во фракциях, соответствующих молекулярной массе приблизительно 360 кДа, что позволяет предположить, что комплекс KCNQ1cL-CaM существует в виде гетерооктамера со стехиометрией 4: 4 (330 кДа, включая 4 Теги GFP). Флуоресцентный зонд обеспечивает высокочувствительное обнаружение белка. Благодаря комбинации предварительно набитой колонки SEC и небольшого объема слоя, протокол FSEC позволил нам уменьшить шкалу индукции до менее 1 мл, а продолжительность анализа примерно до 15 минут на образец.

    Термическая стабильность - одна из биохимических характеристик белкового комплекса. Для оценки термостабильности комплекса KCNQ1cL-CaM аликвоты из того же лизата клеток E. coli , описанного выше, инкубировали при различных температурах в течение 10 мин, осветляли центрифугированием и затем подвергали FSEC (рис. 2A). Высота пика флуоресценции, соответствующего гетерооктамеру, уменьшалась за счет повышения температуры инкубации. С другой стороны, пик флуоресценции, восстановившийся в пустом объеме, исчез после низкой термообработки (45 ° C), но пик флуоресценции, соответствующий GFP, был стабильным при температурах до 65 ° C.

    Рис. 2

    Термическая стабильность комплекса KCN-Q1cL-CaM. A. Влияние термической обработки на профиль элюирования флуоресценции GFP. Клеточный лизат, экспрессирующий как KCNQ1cL, так и CaM с меткой GFP, инкубировали при разных температурах в течение 10 мин с последующим центрифугированием. Прозрачные супернатанты анализировали с помощью FSEC. Пик флуоресценции гетерооктамера снижался при повышении температуры, в то время как пик, соответствующий размеру деградированного GFP, был устойчивым к изменению в диапазоне тестируемых температур.B. Влияние термической обработки на профиль миграции флуоресценции GFP. Термообработанные клеточные лизаты подвергали SDS-PAGE и контролировали флуоресценцию GFP с помощью флуорометрического сканера. Стрелка указывает на полноразмерный GFP-тег KCNQ1cL. C. Резюме термической стабильности комплекса KCNQ1cL-CaM. Высоты пиков флуоресценции гетерооктамера, полученные с помощью FSEC (светлые кружки) (n = 4), и плотность флуоресценции GFP-меченного KCNQ1cL в гелях (темные кружки) (n = 3) были нормализованы по отношению к значениям для образцов. приготовлено при 4 ° C.Плотность флуоресценции только GFP также анализировали путем сканирования гелей (открытые треугольники) (n = 4).

    GFP устойчив к низким концентрациям SDS, и флуоресценцию можно обнаружить в гелях SDS-PAGE, даже если он слит с другими белками [48]. Учитывая термостабильность комплекса GFP-KCNQ1cL-CaM в FSEC и извлечение большей части полноразмерного продукта во фракциях гетерооктамеров, мы были заинтересованы в изучении его термостабильности с использованием этого метода обнаружения флуоресценции в геле. .Лизаты клеток, экспрессирующие как KCNQ1cL, так и CaM, инкубировали при различных температурах в течение 10 минут, осветляли центрифугированием, разделяли на полиакриламидных гелях и затем сканировали для обнаружения GFP-флуоресценции внутри гелей. Была обнаружена единственная основная полоса, соответствующая размеру полноразмерного GFP-KCNQ1cL, и полосы, соответствующие второстепенным продуктам деградации (рис. 2В). При повышении температуры полоса, соответствующая всей длине продукта, исчезла, а нижние полосы остались.Интенсивность флуоресценции полноразмерных полос в оцифрованных гелях количественно определяли денситометрически и сравнивали с высотой пика флуоресценции, соответствующего гетерооктамеру в FSEC (фиг. 2C). Профиль термической денатурации предполагает, что денатурация происходит при температурах от 45 ° C до 65 ° C, со средней точкой около 55,9 ± 0,1 ° C по FSEC (n = 4) и 57,1 ± 0,2 ° C по анализу в геле (n = 4). Полноразмерный продукт элюировали во фракциях пустого объема и во фракциях, содержащих гетерооктамер (рис.2А). Поскольку в этих фракциях около 90% флуоресценции соответствовало гетерооктамеру, профили денатурации, измеренные этими двумя разными протоколами, были сопоставимы.

    Эти количественные оценки основаны на измерении интенсивности флуоресценции GFP. Следовательно, если GFP нестабилен при более низких температурах, чем средняя точка денатурации комплекса KCNQ1cL-CaM, эти количественные оценки неадекватны для оценки термической стабильности комплекса. Чтобы ответить на этот вопрос, мы количественно оценили термическую денатурацию только GFP с помощью анализа в геле (рис.2С). Интенсивность флуоресценции была стабильной до 70 ° C и падала при температуре от 75 ° C до 90 ° C [49]. Средняя точка кривой составила 81,5 ± 0,2 ° C (n = 4). Следовательно, кривые денатурации, полученные при измерении флуоресценции GFP-слитого KCNQ1cL, можно объяснить, главным образом, термостабильностью комплекса KCNQ1cL-CaM. Поскольку гель-анализ позволяет нам увеличивать количество образцов, анализируемых за раз, этот метод обеспечивает эффективные и количественные средства для анализа биохимических и биофизических свойств комплекса.

    Сборка селективных сенсоров Ca

    2+ -сенсоров с KCNQ1

    Используя биохимические методы, мы попытались оценить способность белков-сенсоров Ca 2+ способствовать сворачиванию цитоплазматического домена KCNQ1. Морские белки-сенсоры Ca 2+ (Calml3, Calml4a, Calml4b, NCS-1, NCALD, Hpca, VILIP-1, KChIP2a и Calp) экспрессировались в клетках с GFP-KCNQ1cL. Среди гомологов CaM, Calml3 очень похож, а Calml4a слабо похож на CaM (93% и 53% аминокислотного сходства соответственно), в то время как другие члены семейства нейрональных датчиков Ca 2+ (NCS) имеют относительно низкое аминокислотное сходство ( 8-12%) (рис.3А). Экспрессия белка двух гомологов CaM (Calml3 и Calml4a) и трех членов семейства NCS (NCS-1, NCALD и NCS-1) была подтверждена окрашиванием Кумасси лизатов клеток, нагруженных гелями SDS-PAGE (фиг. 3B). Экспрессия гомологов, по-видимому, не нарушала общий уровень экспрессии белка GFP-KCNQ1cL (фиг. 3C). После осветления каждого лизата центрифугированием супернатант анализировали с помощью FSEC (рис. 3D). Замечательный пик флуоресценции в положении гетерооктамера наблюдался только в клеточных лизатах, коэкспрессирующих GFP-KCNQ1cL и либо Calml3, либо CaM.

    Рис. 3

    Анализ взаимодействия KCNQ1 с белками-сенсорами Ca 2+ . А. Филогенное дерево белков-сенсоров Ca 2+ . Сравнение аминокислотных последовательностей шести различных белков-сенсоров Ca 2+ , полученных с помощью программы T-Coffee [44]. B. Окрашивание клеточного лизата CBB. KCNQ1cL, меченный GFP, экспрессировался в бактериях с белками-сенсорами Ca 2+ или без них, как указано под панелью. Звездочки показывают перенесенные положения белков-сенсоров Ca 2+ .Цифры слева представляют собой молекулярные массы маркеров. C. Мониторинг флуоресценции в геле SDS-PAGE. Флуоресценцию сырых лизатов детектировали с помощью флуорометрического сканера. Стрелка соответствует полной длине KCNQ1cL, помеченной GFP. D. Анализ FSEC профиля элюции GFP-меченного KCNQ1cL. Лизаты клеток обрабатывали колонкой SEC в точках, указанных стрелками. Контролируют элюирующий профиль флуоресценции. Пик флуоресценции гетерооктамера наблюдался только в клеточных лизатах, экспрессирующих либо CaM, либо Calml3.E. Термическая стабильность комплекса KCNQ1cL-Calml3. Термическую стабильность комплекса KCNQ1cL-Calml3 анализировали в гелях и сравнивали с таковой комплекса KCNQ1cL-CaM (n = 4). F. Выравнивание аминокислотных последовательностей CaM и Calml3. Аминокислоты обозначаются однобуквенным кодом. Два белка-сенсора Ca 2+ обнаруживают 87% идентичности последовательностей. Идентичные остатки представлены белым цветом на красных квадратах, консервативные замены окрашены в черный цвет, а неконсервативные остатки - в синий цвет.

    Количество аминокислот в Calml3 равно количеству в СаМ (рис.3F). Calml3 имеет гантелевидную кристаллическую структуру с CaM, но структуры двух белков обнаруживают смещение центральной спирали, соединяющей два глобулярных домена [50,51]. Более того, Calml3 имеет сродство к Ca 2+ в 8 раз ниже, но претерпевает большие структурные изменения при связывании с металлом [52]. Эти наблюдения предполагают, что два датчика Ca 2+ могут отчетливо влиять на KCNQ1cL. Профиль термической денатурации комплекса KCNQ1cL-Calml3, измеренный с помощью анализа в геле, показывает, что средняя точка денатурации составляла 49.4 ± 0,2 ° C (n = 4) (рис. 3E). Небольшая разница в термостабильности между двумя сборками датчика KCNQ1cL и Ca 2+ означает, что, хотя Calml3 образует комплекс с KCNQ1cL аналогично CaM, два датчика Ca 2+ обладают уникальными свойствами. на каналах KCNQ1.

    Взаимодействие KCNQ1 и Calml3

    Затем мы проверили, взаимодействует ли Calml3 с полноразмерным KCNQ1 (рис. 4). KCNQ1 экспрессировался в клетках HEK с или без либо GFP-меченного CaM, либо c-Myc-tagged Calml3.После солюбилизации с помощью Triton X-100, KCNQ1 выделяли с помощью специфического антитела, а затем анализировали с помощью иммуноблоттинга или анализа флуоресценции GFP в геле. Поскольку CaM образовывал комплекс с KCNQ1 (фиг. 4A), Calml3 был обнаружен в иммунопреципитатах с KCNQ1 (фиг. 4B). Кроме того, KCNQ1 также подвергался иммунопреципитации с помощью Calm13 при использовании антитела против c-Myc. Следовательно, Calml3, по-видимому, связывается с KCNQ1. Чтобы обратиться к способу связывания Calml3, мы исследовали влияние сверхэкспрессии CaM на взаимодействие KCNQ1 и Calml3 (рис.4С). Сверхэкспрессия CaM снижает количество Calml3 на 45,2 ± 8,5% (n = 8), извлеченного в иммунопреципитате с KCNQ1, тогда как сверхэкспрессия Calml3 снижает количество на 29,2 ± 9,3% (n = 5) (фиг. 4D). Эти результаты показывают, что Calml3 связывается с KCNQ1 конкурентно с CaM, тем самым предполагая, что Calml3 является альтернативой CaM.

    Рис. 4

    Конкурентное взаимодействие Calml3 и CaM с KCNQ1. А. Б. Связывание CaM или Calml3 с KCNQ1. Клетки HEK трансфецировали плазмидами, кодирующими KCNQ1, Calml3 с меткой c-Myc (Myc-Calml3) и CaM с меткой GFP (CaM-GFP) в различных комбинациях, как указано в верхней части панелей.Мембранные белки солюбилизировали Triton X-100 (ввод), а затем инкубировали с антителом, как указано выше в наборе панелей. Выделенные иммунопреципитаты выявляли с использованием антител против KCNQ1 или против c-Myc. Для оценки CaM-GFP гели SDS-PAGE сканировали на GFP-флуоресценцию. C. Конкурентное связывание Calml3 и CaM с KCNQ1. Пятикратное количество плазмиды Myc-Calml3 или CaM-GFP (++) трансфицировали таковыми из KCNQ1 и конкурентного сенсорного белка Ca 2+ (+). Цифры слева от панелей указывают положение стандартных маркеров в килодальтонах.D. Количественная оценка конкурентного связывания двух сенсоров Ca 2+ с KCNQ1. Полосы, соответствующие Myc-меченным Calml3 и CaM-GFP, были количественно определены денситометрически.

    Влияние Calml3 на активность канала KCNQ1

    Поскольку известно, что Calml3 и CaM по-разному регулируют активность целевых ферментов [37,53], мы затем протестировали их влияние на активность KCNQ1. КРНК KCNQ1 инъецировали в ооциты Xenopus с кРНК CaM или Calml3 или без них, и токи K + измеряли с использованием метода фиксации напряжения с двумя электродами.На фиг. 5А показаны типичные кривые тока одного KCNQ1 и KCNQ1, коэкспрессированного с CaM или Calml3, полученные с шагом деполяризующего напряжения от -100 мВ с шагом 10 мВ в растворе, содержащем 2 мМ K + . KCNQ1 быстро активировался деполяризующими ступенчатыми импульсами. Амплитуда тока в конце тестовых импульсов увеличивалась в зависимости от напряжения (рис. 5B). Коэкспрессия обоих Ca 2+ -сенсоров не модулировала текущий уровень экспрессии или зависимость KCNQ1 от напряжения.Следовательно, вполне вероятно, что комплекс KCNQ1-Calml3 функционально сопоставим с комплексом KCNQ1-CaM.

    Рис. 5

    Влияние белков-сенсоров Ca 2+ на токи KCNQ1. A. Репрезентативные токи из ооцитов, экспрессирующих KCNQ1. КРНК KCNQ1 инъецировали в ооциты Xenopus с кРНК CaM или Calml3. Ток KCNQ1 регистрировался с помощью двухэлектродных фиксаторов напряжения. Импульсный протокол представлен в верхней части текущих наборов семейств. Удерживающий потенциал составлял -90 мВ, а мембранный потенциал изменялся от -100 мВ до +10 мВ с приращениями по 10 мВ в течение 2 секунд каждое, а затем 0.4 секунды при -30 мВ. Кривые тока при тестовых импульсах +60 мВ и +100 мВ окрашены в синий и красный цвет соответственно. Пунктирными линиями обозначен уровень при нулевом токе. B. Вольт-амперная зависимость только KCNQ1 (светлые кружки), KCNQ1 плюс Calml3 (светлые треугольники) и KCNQ1 плюс CaM (закрашенные треугольники). Токи в конце тестовых импульсов нормируются на значение, полученное при +10 мВ. C. Влияние истощения PIP 2 Ci-VSP на токи KCNQ1. Показаны репрезентативные токи от ооцитов, экспрессирующих KCNQ1 в комбинации с CaM, Calml3, потенциал-чувствительной фосфатазой (Ci-VSP / WT) или мутантом Ci-VSP с мертвой фосфатазой (Ci-VSP / C363S).Импульсный протокол такой же, как указано в A. D. Соотношение "ток-напряжение" каналов KCNQ1. Токи в конце тестовых импульсов нормализуются к значению, полученному при +10 мВ, как в B. Точки данных в B и D представляют собой средние значения ± S.E.M. 10 - 27 индивидуальных измерений.

    PIP 2 играет ключевую роль в активации KCNQ1 [54,55]. Аминокислотные остатки, ответственные за PIP 2 -зависимую активацию каналов KCNQ1, были картированы в проксимальной половине С-конца, зажатой между предполагаемыми сайтами связывания СаМ [56,57,58,59].Основываясь на этом результате, мы предположили, что связанные белки-сенсоры Ca 2+ влияют на сродство KCNQ1 к PIP 2 . Чувствительная к напряжению фосфатаза (Ci-VSP) гидролизует PIP 2 во внутренней створке клеточных мембран в зависимости от напряжения [45]. Он очень активен при деполяризации, но менее активен при гиперполяризации. Таким образом, Ci-VSP может истощить PIP 2 за счет увеличения мембранного потенциала или продолжительности деполяризации мембранного потенциала. Сверхэкспрессия Ci-VSP / WT не модулирует амплитуду тока при низких мембранных потенциалах (рис.5С). Однако амплитуда тока KCNQ1 снижалась при мембранных потенциалах выше +20 мВ, достигала максимума при +40 мВ и уменьшалась на 47 ± 4% при +100 мВ (n = 16) по сравнению с амплитудой тока, зарегистрированной при +10 мВ. (Рис. 5C и D). Следовательно, в присутствии Ci-VSP / WT вольт-амперная характеристика KCNQ1 представляла собой очевидную колоколообразную кривую. Белки-сенсоры Ca 2+ не изменяли тенденцию зависимого от напряжения эффекта Ci-VSP. Однако в присутствии Calml3, но не CaM, колоколообразная кривая зависимости от напряжения KCNQ1 становилась высокой, а ее пик смещался вправо примерно на 10 мВ.Кроме того, амплитуда тока уменьшилась только на 21 ± 5% при +100 мВ (n = 27). С другой стороны, зависимая от напряжения модуляция тока KCNQ1 не происходила в присутствии мертвого по фосфатазе мутанта Ci-VSP (C363S), даже несмотря на то, что стробирующие токи были обнаружены при изменении мембранных потенциалов. Эти данные показывают, что экспрессия Calml3 снижает ответ KCNQ1 на зависимое от напряжения истощение PIP 2 с помощью Ci-VSP.

    Оставалась возможность, что влияние Ca 2+ -сенсоров на сродство канала KCNQ1 к PIP 2 было основано на модуляции фосфатазной активности Ci-VSP.Чтобы обратиться к этой возможности, мы экспрессировали сенсорные белки для измерения зависимой от напряжения модификации канонического канала внутреннего выпрямителя K + , Kir2.3, который требует PIP 2 для активации с помощью Ci-VSP (рис. 6A). . Выражение Ci-VSP уменьшало амплитуду тока Kir2.3 на одну треть, не влияя на соотношение тока и напряжения (рис. 6A). Мембранный потенциал был увеличен до +20 мВ от удерживающего потенциала -20 мВ, а затем гиперполяризован до -120 мВ для измерения амплитуды входящего тока, проходящего через Kir2.3. Длительность деполяризующего мембранного потенциала варьировалась путем увеличения продолжительности с шагом 100 мсек. Без Ci-VSP деполяризующий мембранный потенциал не влиял на профиль тока Kir2.3. Однако в присутствии Ci-VSP амплитуда тока была значительно снижена за счет увеличения длины деполяризующего мембранного потенциала (рис. 6B). Постоянная времени составляла 0,56 ± 0,05 с (n = 9) (фиг. 6C). Совместная экспрессия CaM и Calml3 не нарушала снижение общей амплитуды тока Kir2.3 пользователя Си-ВСП. Кроме того, зависимость Ci-VSP от напряжения в присутствии CaM и Calml3 (0,55 ± 0,04 с, n = 11) и 0,56 ± 0,03 с, n = 7, соответственно) соответствовала таковой в отсутствие Ca 2. + -датчики. Следовательно, ни CaM, ни Calml3, по-видимому, не изменяют фосфатазную активность Ci-VSP, тем самым предполагая, что прямая ассоциация белков-сенсоров Ca 2+ с KCNQ1 влияет на PIP 2 -чувствительность каналов.

    Фиг. 6

    Сенсорные белки Ca 2+ не нарушали активность Ci-VSP.A. Типичные токи от ооцитов, экспрессирующие канонический канал внутреннего выпрямителя K + , Kir2.3, в комбинации с Ci-VSP, CaM и Calml3. Мембранный потенциал был увеличен до +20 мВ, а затем до -120 мВ от удерживающего потенциала -20 мВ. Раствор ванны содержит 40 мМ K + , а равновесный потенциал K + оценивается как -20 мВ. Длительность импульсов деполяризующего потенциала изменялась от 0 до 1,4 с с шагом 100 мс. Блокатор каналов Кир, Ba 2+ (1 мМ), был добавлен к раствору ванны для измерения уровня тока утечки.Стрелки указывают уровень при нулевом токе. Б. Зависимая от напряжения кинетика выбега Kir2.3. Нормированная амплитуда тока, чувствительного к Ba 2+ , в конце гиперполяризующих импульсов была нанесена на график в зависимости от длительности деполяризующих импульсов. Средние значения постоянных времени для подбора графиков из разных ячеек. Постоянные времени были получены путем подгонки к одной экспоненциальной функции. Цифры в скобках указывают количество записанных ячеек.

    Обсуждение

    В этом исследовании мы разработали систему оценки для анализа ассоциации между KCNQ1 и Ca 2+ -сенсорными белками.Настройка состоит из двух шагов. Первым шагом является совместная экспрессия GFP-слитого цитоплазматического домена KCNQ1 с CaM в E. coli , в котором отсутствуют эндогенные CaM-подобные Ca 2+ -сенсорные белки (рис. 1). Второй этап - это измерение флуоресценции GFP в меченом комплексе KCNQ1-CaM с использованием FSEC и систем обнаружения в геле (рис. 1 и 2). Поскольку эти подходы позволили нам идентифицировать Calml3 как альтернативу CaM для образования функциональных каналов KCNQ1 (рис. 3), эти биохимические методы, по-видимому, точно определяют взаимодействие между KCNQ1 и Ca 2+ -сенсорными белками.

    Calml3 и CaM конкурентно связываются с каналом KCNQ1 (рис. 4), а электрофизиологические свойства KCNQ1 в комплексе с Calml3 были эквивалентны таковым в комплексе с CaM (рис. 5). Эти результаты предполагают, что роли Calml3 в сворачивании KCNQ1 и формировании каналов сравнимы с ролью CaM. Однако два комплекса показали небольшие различия в термостабильности (фиг. 3) и сродстве к каналу для PIP 2 (фиг. 5). Эти результаты согласуются с наблюдениями, что Calml3 и CaM обладают разными способностями контролировать целевые ферменты [37,53].Структурные особенности двух датчиков Ca 2+ , такие как ориентация доменов и электростатический поверхностный потенциал, могут лежать в основе различий в их способности управлять мишенями [51].

    Для выявления эффектов Calml3 на взаимодействие KCNQ1-PIP 2 нам потребовалось ввести его кРНК в максимальной дозе (рис. 5). Это мешало оценке функциональной конкуренции между Calml3 и CaM путем инъекции различных соотношений двух кРНК сенсора Ca 2+ в ооциты.Сообщается, что СаМ в большом количестве присутствует в большинстве клеток (примерно 25 мкМ) [32,33,34,35]. Следовательно, потребность в высокой экспрессии Calml3 может быть в основном объяснена присутствием эндогенного конкурента CaM. В случае потенциалзависимого канала Ca 2+ L-типа было обнаружено, что конкурентное взаимодействие между CaBP1 и CaM модулирует зависимую от Ca 2+ инактивацию [60]. В то время как функциональная единица канала Ca 2+ содержит единственный белок-сенсор Ca 2+ в своем домене IQ, тетрамерный канал KCNQ1 ассоциируется с четырьмя датчиками Ca 2+ .Это означает, что количество молекул, связывающихся с KCNQ1, также участвует в контроле чувствительности к PIP 2 . С другой стороны, становится очевидным, что связывание цитоплазматических вспомогательных белков влияет на ворота на фильтре селективности потенциал-управляемых каналов K + [12,61]. Следовательно, хотя отсутствие количественного функционального анализа затрудняет любую строгую оценку того, как Ca 2+ -сенсоры по-разному модулируют сродство KCNQ1 к PIP 2 , это может быть связано с общей ролью цитоплазматических белков в прямой и косвенной модуляциях. сворачивания белка, субклеточной локализации и блокировки ионных каналов.

    Многие CaM-подобные Ca 2+ -сенсорные белки связываются непосредственно с различными типами ионных каналов, включая рецепторы IP 3 [62,63,64], потенциал-зависимые Ca 2+ каналов [65,66 , 67], потенциал-управляемые каналы Na + [68,69] и каналы транзиентного рецепторного потенциала (TRPC) [70,71]. Эти белки-сенсоры Ca 2+ имеют менее 15% аминокислотного сходства с CaM, что свидетельствует о широкой специфичности связывания с этими ионными каналами. Напротив, KCNQ1 связывается только с Ca 2+ -сенсорами CaM и Calml3, которые имеют сильное аминокислотное сходство [38].Таким образом, кажется вероятным, что связывание Ca 2+ -сенсора с KCNQ1 в значительной степени избирательно.

    C-конец KCNQ1 содержит два предполагаемых сайта связывания CaM. Между этими сайтами в положении 445 находится остаток цистеина, нацеленный на S-нитрозилирование [72]. CaM, по-видимому, переключает режим связывания Ca 2+ -зависимым образом [30,31,73], что влияет на редокс-зависимую модуляцию канала. Более того, связывание фосфатидилинозитолов и СаМ регулирует TRPC6 интегративным образом [74].Следовательно, Ca 2+ -сенсоры могут динамически регулировать активность канала KCNQ1 и вносить вклад в молекулярные механизмы, лежащие в основе дивергенции в модуляции активности канала.

    Calml3 в изобилии присутствует в нескольких типах эпителиальных клеток, в том числе в тканях груди [39], почек, кишечника и кожи [41]. С другой стороны, каналы KCNQ1 играют важную роль в реполяризации сердечного потенциала действия и вносят вклад в функции эпителиальных клеток; например, секреция желудочного сока париетальными клетками [3,4,5,6], биосинтез тироидных гормонов [7,9] и секреция спинномозговой жидкости [8].Их перекрывающееся распределение в эпителиальных тканях убедительно указывает на то, что KCNQ1 и Calml3 собираются с образованием функциональных каналов. Однако в эпителиальных клетках СаМ также в большом количестве экспрессируется. Это привело нас к предположению, что функциональные единицы эпителиальных каналов KCNQ1 содержат оба белка-сенсора Ca 2+ . Хотя мы пытались выделить эти комплексы из нативных тканей с помощью иммунопреципитации, коммерчески доступные антитела, специфичные к Calml3 и CaM, не работали в этом исследовании.Это явное ограничение данного исследования, направленного на определение того, как белки-сенсоры Ca 2+ участвуют в формировании функциональных каналов KCNQ1 в эпителии. Тем не менее, поскольку различные клеточные сигналы модулируют метаболизм PIP 2 , вызываемое Calml3 увеличение сродства к PIP 2 может поддерживать активность KCNQ1 для поддержки интимных функций эпителия.

    Благодарности

    Авторы благодарят г-жу Котоми Асо за ее техническую помощь.Мы благодарны доктору Ясуси Окамуре из Университета Осаки за предоставление кДНК Ci-VSP WT и MT. Мы также благодарим доктора Куниаки Исии из Университета Ямагата за внимательное и критическое прочтение нашей статьи. YK был поддержан грантом на научные исследования в инновационных областях 22136002 Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии.

    Заявление о раскрытии информации

    Авторам нечего раскрывать. Нет никаких конкурирующих интересов.

    Список литературы

    1. Nerbonne JM, Kass RS: Молекулярная физиология сердечной реполяризации.Physiol Rev 2005; 85: 1205-1253.
    2. Sanguinetti MC, Tristani-Firouzi M: калиевые каналы hERG и сердечная аритмия. Природа 2006; 440: 463-469.
    3. Дедек К., Вальдеггер С. Колокализация субъединиц канала KCNQ1 / KCNE в желудочно-кишечном тракте мышей.Pflugers Arch 2001; 442: 896-902.
    4. Demolombe S, Franco D, de Boer P, Kuperschmidt S, Roden D, Pereon Y, Jarry A, Moorman AF, Escande D. Дифференциальная экспрессия KvLQT1 и его регулятора IsK в эпителии мыши. Am J Physiol Cell Physiol 2001; 280: C359-372.
    5. Grahammer F, Herling AW, Lang HJ, Schmitt-Graff A, Wittekindt OH, Nitschke R, Bleich M, Barhanin J, Warth R: Сердечный K + канал KCNQ1 необходим для секреции желудочной кислоты.Гастроэнтерология 2001; 120: 1363-1371.
    6. Ли М.П., ​​Равенель Д.Д., Ху Р.Дж., Люстиг Л.Р., Томаселли Дж., Бергер Р.Д., Бранденбург С.А., Литзи Т.Дж., Бантон Т.Е., Лимб С., Фрэнсис Х., Гореликов М., Гу Х., Вашингтон К., Аргани П., Голденринг-младший, Коффи Р.Дж. , Файнберг А.П.: Целенаправленное нарушение гена Kvlqt1 вызывает глухоту и гиперплазию желудка у мышей.Дж. Клин Инвест 2000; 106: 1447-1455.
    7. Purtell K, Paroder-Belenitsky M, Reyna-Neyra A, Nicola JP, Koba W, Fine E, Carrasco N, Abbott GW: Канал KCNQ1-KCNE2 K + необходим для адекватного поглощения тироидным I-. FASEB J 2012; 26: 3252-3259.
    8. Roepke TK, Kanda VA, Purtell K, King EC, Lerner DJ, Abbott GW: KCNE2 образует калиевые каналы с KCNA3 и KCNQ1 в эпителии сосудистого сплетения.FASEB J 2011; 25: 4264-4273.
    9. Roepke TK, King EC, Reyna-Neyra A, Paroder M, Purtell K, Koba W, Fine E, Lerner DJ, Carrasco N, Abbott GW: делеция Kcne2 раскрывает ее решающую роль в биосинтезе гормонов щитовидной железы. Нат Мед 2009; 15: 1186-1194.
    10. Джесперсен Т., Граннет М., Олесен С.П .: Калиевый канал KCNQ1: от гена к физиологической функции.Физиология (Bethesda) 2005; 20: 408-416.
    11. Дай С., Холл Д.Д., Хелл Дж. В.: Супрамолекулярные сборки и локальное регулирование потенциалзависимых ионных каналов. Physiol Rev 2009; 89: 411-452.
    12. Haitin Y, Attali B: C-конец каналов Kv7: многофункциональный модуль.J. Physiol 2008; 586: 1803-1810.
    13. Pongs O, Schwarz JR: Вспомогательные субъединицы, связанные с зависимыми от напряжения K + каналами. Physiol Rev 2010; 90: 755-796.
    14. Purtell K, Roepke TK, Abbott GW: Сердечная аритмия и дисфункция щитовидной железы: новая генетическая связь.Int J Biochem Cell Biol 2010; 42: 1767-1770.
    15. Barhanin J, Lesage F, Guillemare E, Fink M, Lazdunski M, Romey G: белки KVLQT1 и lsK (minK) связываются с образованием сердечного калиевого тока IKs. Nature 1996; 384: 78-80.
    16. Sanguinetti MC, Curran ME, Zou A, Shen J, Spector PS, Atkinson DL, Keating MT: Совместная сборка белков KVLQT1 и minK (IsK) с образованием калиевого канала IKs сердца.Nature 1996; 384: 80-83.
    17. Schroeder BC, Waldegger S, Fehr S, Bleich M, Warth R, Greger R, Jentsch TJ: конститутивно открытый калиевый канал, образованный KCNQ1 и KCNE3. Природа 2000; 403: 196-199.
    18. Chen L, Kass RS: Двойная роль белка Yotiao, закрепляющего киназу A, в модуляции сердечного калиевого канала: пассивный адаптер по сравнению с активным регулятором.Eur J Cell Biol 2006; 85: 623-626.
    19. Hoshi N, Zhang JS, Omaki M, Takeuchi T, Yokoyama S, Wanaverbecq N, Langeberg LK, Yoneda Y, Scott JD, Brown DA, Higashida H: сигнальный комплекс AKAP150 способствует подавлению М-тока агонистами мускаринов. Nat Neurosci 2003; 6: 564-571.
    20. Li Y, Chen L, Kass RS, Dessauer CW: белок Yotiao, закрепляющий А-киназу, способствует образованию комплекса между аденилатциклазой типа 9 и калиевым каналом IKs в сердце. J Biol Chem 2012; 287: 29815-29824.
    21. Marx SO, Kurokawa J, Reiken S, Motoike H, D'Armiento J, Marks AR, Kass RS: Требование макромолекулярного сигнального комплекса для модуляции бета-адренергическим рецептором калиевого канала KCNQ1-KCNE1.Наука 2002; 295: 496-499.
    22. Terrenoire C, Houslay MD, Baillie GS, Kass RS: Макромолекулярный комплекс калиевого канала IKs сердца включает фосфодиэстеразу PDE4D3. J Biol Chem 2009; 284: 9140-9146.
    23. Гампер Н., Шапиро М.С.: Кальмодулин опосредует Ca2 + -зависимую модуляцию K + каналов M-типа.J Gen Physiol 2003; 122: 17-31.
    24. Ghosh S, Nunziato DA, Pitt GS: Сборка и функция KCNQ1 блокируются мутациями синдрома удлиненного QT, которые нарушают взаимодействие с кальмодулином. Circ Res 2006; 98: 1048-1054.
    25. Shamgar L, Ma L, Schmitt N, Haitin Y, Peretz A, Wiener R, Hirsch J, Pongs O, Attali B: Кальмодулин необходим для стробирования и сборки сердечных IKS-каналов: нарушение функции при мутациях длинного QT.Circ Res 2006; 98: 1055-1063.
    26. Вен Х, Левитан И.Б .: Кальмодулин является вспомогательной субъединицей калиевых каналов KCNQ2 / 3. J. Neurosci 2002; 22: 7991-8001.
    27. Винер Р., Хайтин Ю., Шамгар Л., Фернандес-Алонсо М.К., Мартос А., Хомски-Хехт О., Ривас Г., Аттали Б., Хирш Ю.А.: KCNQ1 (Kv7.1) COOH-конец, многоуровневый каркас для сборки субъединиц и взаимодействия белков. J Biol Chem 2008; 283: 5815-5830.
    28. Юс-Наджера Э., Сантана-Кастро I, Вильярроэль А: Идентификация и характеристика непостоянного сайта связывания кальмодулина в неинактивирующих потенциал-зависимых калиевых каналах KCNQ.J Biol Chem 2002; 277: 28545-28553.
    29. Gamper N, Li Y, Shapiro MS: Структурные требования для дифференциальной чувствительности KCNQ K + каналов к модуляции Ca2 + / кальмодулином. Mol Biol Cell 2005; 16: 3538-3551.
    30. Бал М., Заика О., Мартин П., Шапиро М.С.: связывание кальмодулина с K + -каналами M-типа, анализируемое с помощью TIRF / FRET в живых клетках.J. Physiol 2008; 586: 2307-2320.
    31. Xu Q, Chang A, Tolia A, Minor DL ​​Jr: Структура комплекса B-спирали Ca2 + / CaM: Kv7.4 (KCNQ4) дает представление о модуляции тока M. Журнал Мол. Биол, 2013; 425: 378-394.
    32. Hoeflich KP, Ikura M: Кальмодулин в действии: разнообразие механизмов распознавания и активации мишеней.Cell 2002; 108: 739-742.
    33. Михайлова М., Градский Дж., Крейц М.Р .: Между беспорядочными половыми связями и специфичностью: новые роли кальциевых сенсоров EF-hand в нейрональной передаче сигналов Ca2 +. Журнал Neurochem 2011; 118: 695-713.
    34. Яп К.Л., Ким Дж., Чыонг К., Шерман М., Юань Т., Икура М.: Целевая база данных кальмодулина.J Struct Funct Genomics 2000; 1: 8-14.
    35. Сайми Y, Кунг C: Кальмодулин как субъединица ионного канала. Анну Рев Physiol 2002; 64: 289-311.
    36. Ковалевская Н.В., ван де Ватербемд М., Боховчук Ф.М., Бейт Н., Биндельс Р.Дж., Хендероп Дж. Г., Вуйстер Г.В.: Структурный анализ связывания кальмодулина с ионными каналами демонстрирует роль его пластичности в регуляции.Арка Пфлюгерса 2013; 465: 1507-1519.
    37. Эдман К.Ф., Шульман H: Идентификация и характеристика дельта-B-CaM-киназы и дельта-C-CaM-киназы из сердца крысы, двух новых многофункциональных изоформ Ca2 + / кальмодулин-зависимой протеинкиназы. Biochim Biophys Acta 1994; 1221: 89-101.
    38. Koller M, Strehler EE: Характеристика безинтронного человеческого кальмодулиноподобного псевдогена.FEBS Lett 1988; 239: 121-128.
    39. Rogers MS, Foley MA, Crotty TB, Hartmann LC, Ingle JN, Roche PC, Strehler EE: потеря иммунореактивности в отношении человеческого кальмодулиноподобного белка является ранним событием в развитии рака груди. Неоплазия 1999; 1: 220-225.
    40. Yaswen P, Smoll A, Hosoda J, Parry G, Stampfer MR: Белковый продукт безинтронного кальмодулиноподобного гена человека демонстрирует тканеспецифичную экспрессию и пониженное содержание в трансформированных клетках.Разница в росте клеток 1992; 3: 335-345.
    41. Роджерс М.С., Кобаяши Т., Питтелькоу М.Р., Стрелер Е.Е.: Человеческий кальмодулиноподобный белок - это специфический для эпителия белок, регулируемый во время дифференцировки кератиноцитов. Exp Cell Res 2001; 267: 216-224.
    42. Sanguinetti MC, Jiang C, Curran ME, Keating MT: Механистическая связь между наследственной и приобретенной сердечной аритмией: HERG кодирует калиевый канал IKr.Cell 1995; 81: 299-307.
    43. Моришиге К., Такахаши Н., Джахангир А., Ямада М., Кояма Х, Занелли Дж. С., Курачи Ю.: Молекулярное клонирование и функциональное выражение нового специфичного для мозга внутреннего канала калия выпрямителя. FEBS Lett 1994; 346: 251-256.
    44. Notredame C, Higgins DG, Heringa J: T-Coffee: новый метод быстрого и точного совмещения множественных последовательностей.Дж. Мол Биол, 2000; 302: 205-217.
    45. Мурата Ю., Ивасаки Х., Сасаки М., Инаба К., Окамура Y: активность фосфоинозитид-фосфатазы в сочетании с внутренним датчиком напряжения. Природа 2005; 435: 1239-1243.
    46. Schneider CA, Rasband WS, Eliceiri KW: NIH Image to ImageJ: 25 лет анализа изображений.Нат Методы 2012; 9: 671-675.
    47. Kawate T, Gouaux E: эксклюзионная хроматография с обнаружением флуоресценции для предкристаллизационного скрининга интегральных мембранных белков. Структура 2006; 14: 673-681.
    48. Geertsma ER, Groeneveld M, Slotboom DJ, Poolman B: Контроль качества сверхэкспрессированных мембранных белков.Proc Natl Acad Sci U S A 2008; 105: 5722-5727.
    49. Penna TC, Ishii M, Junior AP, Cholewa O: Термическая стабильность рекомбинантного зеленого флуоресцентного белка (GFPuv) при различных значениях pH. Appl Biochem Biotechnol 2004; 113-116: 469-483.
    50. Chattopadhyaya R, Meador WE, Means AR, Quiocho FA: структура кальмодулина уточнена до 1.7 Разрешение. J Mol Biol 1992; 228: 1177-1192.
    51. Han BG, Han M, Sui H, Yaswen P, Walian PJ, Jap BK: Кристаллическая структура человеческого кальмодулиноподобного белка: понимание его функциональной роли. FEBS Lett 2002; 521: 24-30.
    52. Durussel I, Rhyner JA, Strehler EE, Cox JA: Связывание катионов и конформация человеческого кальмодулиноподобного белка.Биохимия 1993; 32: 6089-6094.
    53. Эдман К.Ф., Джордж С.Е., Средин А.Р., Шульман Х., Ясвен П.: Селективная активация и ингибирование кальмодулин-зависимых ферментов кальмодулин-подобным белком, обнаруженным в эпителиальных клетках человека. Eur J Biochem 1994; 226: 725-730.
    54. Falkenburger BH, Jensen JB, Dickson EJ, Suh BC, Hille B: Фосфоинозитиды: липидные регуляторы мембранных белков.J. Physiol 2010; 588: 3179-3185.
    55. Park KH, Piron J, Dahimene S, Merot J, Baro I, Escande D, Loussouarn G: Нарушение взаимодействия KCNQ1-KCNE1 и фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата лежит в основе синдрома удлиненного интервала QT. Цирк Res 2005; 96: 730-739.
    56. Hernandez CC, Zaika O, Shapiro MS: Карбоксиконцевой межспиральный линкер как сайт действия фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата на Kv7 (M-тип) K + -каналы.J. Gen Physiol 2008; 132: 361-381.
    57. Loussouarn G, Park KH, Bellocq C, Baro I, Charpentier F, Escande D: Фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат, PIP2, контролирует KCNQ1 / KCNE1 потенциалзависимые калиевые каналы: функциональная гомология между управляющими по напряжению и K + каналами внутреннего выпрямителя .EMBO J 2003; 22: 5412-5421.
    58. Розенхаус-Данцкер А., Логотетис Д.Е.: Молекулярные характеристики связывания фосфоинозитидов. Арка Пфлюгерса 2007; 455: 45-53.
    59. Zhang H, Craciun LC, Mirshahi T, Rohacs T, Lopes CM, Jin T, Logothetis DE: PIP2 активирует каналы KCNQ, и его гидролиз лежит в основе опосредованного рецепторами ингибирования М-токов.Нейрон 2003; 37: 963-975.
    60. Findeisen F, Rumpf CH, Minor DL, Jr .: Апо-состояния кальмодулина и CaBP1 контролируют функцию потенциалзависимого кальциевого канала CaV1 посредством прямой конкуренции за домен IQ. Журнал Мол. Биол, 2013; 425: 3217-3234.
    61. Strutz-Seebohm N, Henrion U, Schmitt N, Schulze-Bahr E, Seebohm G: общий структурный компонент для опосредованной бета-субъединицей модуляции медленной инактивации в различных KV-каналах.Cell Physiol Biochem 2013; 31: 968-980.
    62. Мичикава Т., Хирота Дж., Кавано С., Хираока М., Ямада М., Фуруичи Т., Микошиба К.: Кальмодулин опосредует кальций-зависимую инактивацию инозитол-1,4,5-трифосфатного рецептора 1-го типа мозжечка. Нейрон 1999; 23: 799-808.
    63. Schlecker C, Boehmerle W., Jeromin A, DeGray B, Varshney A, Sharma Y, Szigeti-Buck K, Ehrlich BE: Повышение активности рецептора InsP3 нейрональным сенсором кальция-1 ингибируется терапевтическими уровнями лития.Дж. Клин Инвест 2006; 116: 1668-1674.
    64. Ян Дж., Макбрайд С., Мак Д.О., Варди Н., Пальцевски К., Хезелер Ф., Фоскетт Дж. К. Идентификация семейства кальциевых сенсоров в качестве белковых лигандов каналов высвобождения Са2 + рецептора инозитол-трифосфата. Proc Natl Acad Sci U S. A 2002; 99: 7711-7716.
    65. Leal K, Mochida S, Scheuer T, Catterall WA: Тонкая настройка синаптической пластичности путем модуляции каналов CaV2.1 с помощью сенсорных белков Ca2 +. Proc Natl Acad Sci U S A 2012; 109: 17069-17074.
    66. Lee A, Wong ST, Gallagher D, Li B, Storm DR, Scheuer T, Catterall WA: Ca2 + / кальмодулин связывается с кальциевыми каналами P / Q-типа и модулирует их.Природа 1999; 399: 155-159.
    67. Zuhlke RD, Pitt GS, Deisseroth K, Tsien RW, Reuter H: Кальмодулин поддерживает как инактивацию, так и облегчение кальциевых каналов L-типа. Природа 1999; 399: 159-162.
    68. Biswas S, DiSilvestre D, Tian Y, Halperin VL, Tomaselli GF: двухрежимная регуляция стробирования сердечных натриевых каналов, опосредованная кальцием.Circ Res 2009; 104: 870-878.
    69. Tan HL, Kupershmidt S, Zhang R, Stepanovic S, Roden DM, Wilde AA, Anderson ME, Balser JR: Датчик кальция в натриевом канале модулирует возбудимость сердца. Nature 2002; 415: 442-447.
    70. Киношита-Кавада М., Тан Дж., Сяо Р., Канеко С., Фоскетт Дж. К., Чжу МХ: Ингибирование каналов TRPC5 Са2 + -связывающим белком 1 в ооцитах Xenopus.Арка Пфлюгерс 2005; 450: 345-354.
    71. Zhang Z, Tang J, Tikunova S, Johnson JD, Chen Z, Qin N, Dietrich A, Stefani E, Birnbaumer L, Zhu MX: активация Trp3 рецепторами инозитол-1,4,5-трифосфата посредством вытеснения ингибирующего кальмодулина из общий связывающий домен.Proc Natl Acad Sci U S. A 2001; 98: 3168-3173.
    72. Асада К., Курокава Дж., Фурукава Т.: Редокс- и кальмодулин-зависимое S-нитрозилирование канала KCNQ1. J Biol Chem 2009; 284: 6014-6020.
    73. Алаймо А., Альберди А., Гомис-Перес С., Фернандес-Орт Дж., Бернардо-Сейсдедос Г., Мало С., Милле О, Аресо П., Вильярроэль А. Переключение между долями кальмодулина, вызванное кальцием в Kv7.2 / комплекс кальмодулина. PLoS One 2014; 9: e86711.
    74. Квон Ю., Хофманн Т., Монтелл С. Интеграция опосредованной фосфоинозитидом и кальмодулином регуляции TRPC6. Mol Cell 2007; 25: 491-503.

    Автор Контакты

    Ацуши Инанобе или Ёсихиса Курачи,

    Отделение молекулярной и клеточной фармакологии, Отдел фармакологии, Высшая школа медицины

    , Университет Осаки, 2-2 Ямада-Ока, Суита, Осака 565-0871, (Япония)

    E -Почта inanobe @ pharma2.med.osaka-u.ac.jp или электронная почта [email protected]


    Подробности статьи / публикации

    Предварительный просмотр первой страницы

    Одобрена: 24 апреля 2015 г.
    Опубликована онлайн: 13 июля 2015 г.
    Дата выпуска: июль 2015 г.

    Количество страниц для печати: 15
    Количество рисунков: 6
    Количество столов: 0

    ISSN: 1015-8987 (печатный)
    eISSN: 1421-9778 (онлайн)

    Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/CPB


    Лицензия открытого доступа / Дозировка лекарства / Заявление об ограничении ответственности

    Лицензия открытого доступа: это статья в открытом доступе под лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial 3.0 Unported (CC BY-NC) (www.karger.com/OA-license), применимой к онлайн-версии только статья. Распространение разрешено только в некоммерческих целях.
    Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новый и / или редко применяемый препарат.
    Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

    Вклад астроцитов в нервно-сосудистую связь в спинном мозге крысы | Журнал физиологических наук

  • 1.

    Alkayed NJ, Birks EK, Narayanan J, Petrie KA, Kohler-Cabot AE, Harder DR (1997) Роль эпоксигеназы арахидоновой кислоты P-450 в ответе церебрального кровотока на глутамат у крыс. Ход 28 (5): 1066–1072

    CAS Статья Google Scholar

  • 2.

    Attwell D, Buchan AM, Charpak S, Lauritzen M, MacVicar BA, Newman EA (2010) Глиальный и нейрональный контроль мозгового кровотока. Nature 468 (7321): 232–243. https://doi.org/10.1038 / nature09613

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 3.

    Bekar LK, He W., Nedergaard M (2008) Locus coeruleus α-адренергическая активация кортикальных астроцитов in vivo. Cereb Cortex 18 (12): 2789–2795. https://doi.org/10.1093/cercor/bhn040

    Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 4.

    Cauli B, Hamel E (2018) Перфузия мозга и астроциты.Trends Neurosci 41 (7): 409–413. https://doi.org/10.1016/j.tins.2018.04.010

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 5.

    Drew PJ (2019) Сосудистая и нервная основа BOLD-сигнала. Curr Opin Neurobiol 58: 61–69. https://doi.org/10.1016/j.conb.2019.06.004

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 6.

    Fonnum F, Johnsen A, Hassel B (1997) Использование фторцитрата и фторацетата в изучении метаболизма мозга.Глия 21 (1): 106–113. https://doi.org/10.1002/(SICI)1098-1136(199709)21:1%3c106::AID-GLIA12%3e3.0.CO;2-W

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 7.

    Gu X, Chen W, Volkow ND, Koretsky AP, Du C, Pan Y (2018) Синхронизированные астроцитарные ответы Ca (2+) в нервно-сосудистом соединении во время соматосенсорной стимуляции и для состояния покоя. Cell Rep 23 (13): 3878–3890. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2018.05.091

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 8.

    Harder DR, Zhang C, Gebremedhin D (2002) Функция астроцитов согласовывает кровоток с метаболической активностью. Физиология 17 (1): 27–31. https://doi.org/10.1152/physiologyonline.2002.17.1.27

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Hassel B, Paulsen RE, Johnsen A, Fonnum F (1992) Селективное ингибирование метаболизма глиальных клеток in vivo фторцитратом. Brain Res 576 (1): 120–124

    CAS Статья Google Scholar

  • 10.

    Hirbec H, Déglon N, Foo LC, Goshen I, Grutzendler J, Hangen E, Kreisel T, Linck N, Muffat J, Regio S, Rion S, Escartin C (2020) Новые технологии для изучения глиальных клеток. Glia 68 (9): 1692–1728. https://doi.org/10.1002/glia.23780

    Статья PubMed Google Scholar

  • 11.

    Jeffrey-Gauthier R, Guillemot JP, Piche M (2013) Нейроваскулярная связь во время ноцицептивной обработки в первичной соматосенсорной коре крысы.Боль 154 (8): 1434–1441. https://doi.org/10.1016/j.pain.2013.04.042

    Статья PubMed Google Scholar

  • 12.

    Ким К.Дж., Иддингс Дж. А., Стерн Дж. Э., Бланко В. М., Крум Д., Киров С. А., Филоса Дж. А. (2015) Вклад астроцитов в вызванную потоком / давлением вазоконстрикцию паренхимной артериолы. J Neurosci 35 (21): 8245–8257. https://doi.org/10.1523/jneurosci.4486-14.2015

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 13.

    Koehler RC, Roman RJ, Harder DR (2009) Астроциты и регуляция мозгового кровотока. Trends Neurosci 32 (3): 160–169. https://doi.org/10.1016/j.tins.2008.11.005

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 14.

    Кохро Ю., Мацуда Т., Йошихара К., Коно К., Кога К., Кацураги Р., Ока Т., Ташима Р., Мунета С., Ямане Т., Окада С., Момокино К., Фурушо А., Хамасе К., Оти Т. , Sakamoto H, Hayashida K, Kobayashi R, Horii T, Hatada I, Tozaki-Saitoh H, Mikoshiba K, Taylor V, Inoue K, Tsuda M (2020) Спинальные астроциты в поверхностных пластинках ворот мозгового ствола, нисходящие контроль механосенсорной гиперчувствительности.Nat Neurosci 23 (11): 1376–1387. https://doi.org/10.1038/s41593-020-00713-4

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 15.

    Komaki Y, Debacker C, Djemai B, Ciobanu L, Tsurugizawa T., Le Bihan D (2020) Дифференциальные эффекты ингибирования канала аквапорина-4 на BOLD fMRI и диффузные fMRI ответы в зрительной коре головного мозга мышей. PLoS ONE 15 (5): e0228759. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0228759

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 16.

    Largo C, Cuevas P, Somjen G, Martin del Rio R, Herreras O (1996) Эффект подавления глиальной функции в мозгу крысы in situ на ионный гомеостаз, синаптическую передачу и выживание нейронов. J Neurosci 16 (3): 1219–1229. https://doi.org/10.1523/jneurosci.16-03-01219.1996

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 17.

    Lecrux C, Hamel E (2011) Сосудисто-нервная единица функции мозга и болезней.Acta Physiol 203 (1): 47–59. https://doi.org/10.1111/j.1748-1716.2011.02256.x

    CAS Статья Google Scholar

  • 18.

    Lian XY, Stringer JL (2004) Энергетический отказ в астроцитах увеличивает уязвимость нейронов к распространяющейся депрессии. Eur J Neurosci 19 (9): 2446–2454. https://doi.org/10.1111/j.0953-816X.2004.03289.x

    Статья PubMed Google Scholar

  • 19.

    Logothetis NK, Pauls J, Augath M, Trinath T, Oeltermann A (2001) Нейрофизиологическое исследование основы сигнала фМРТ. Nature 412 (6843): 150–157. https://doi.org/10.1038/35084005

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 20.

    Longden TA, Dabertrand F, Koide M, Gonzales AL, Tykocki NR, Brayden JE, Hill-Eubanks D, Nelson MT (2017) Capillary K + -sensing инициирует ретроградную гиперполяризацию для увеличения местного мозгового кровотока .Nat Neurosci 20 (5): 717–726. https://doi.org/10.1038/nn.4533

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 21.

    Масамото К., Фукуда М., Васкес А., Ким С.Г. (2009) Дозозависимый эффект изофлурана на нейрососудистое сцепление в коре головного мозга крыс. Eur J Neurosci 30 (2): 242–250. https://doi.org/10.1111/j.1460-9568.2009.06812.x

    Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 22.

    McKenna MC (2007) Глютамат-глутаминовый цикл не является стехиометрическим: судьба глутамата в головном мозге. Журнал Neurosci Res 85 (15): 3347–3358. https://doi.org/10.1002/jnr.21444

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 23.

    Metea MR, Newman EA (2006) Глиальные клетки расширяют и сужают кровеносные сосуды: механизм нейроваскулярного взаимодействия. J Neurosci 26 (11): 2862–2870. https://doi.org/10.1523/jneurosci.4048-05.2006

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 24.

    Milligan ED, Twining C, Chacur M, Biedenkapp J, O’Connor K, Poole S, Tracey K, Martin D, Maier SF, Watkins LR (2003) Спинальная глия и провоспалительные цитокины опосредуют зеркальную нейропатическую боль у крыс. J Neurosci 23 (3): 1026–1040. https://doi.org/10.1523/jneurosci.23-03-01026.2003

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 25.

    Муойо В., Перссон П.Б., Сендески М.М. (2014) Сосудисто-нервная единица - обзор концепции.Acta Physiol 210 (4): 790–798. https://doi.org/10.1111/apha.12250

    CAS Статья Google Scholar

  • 26.

    Omara F, Sisodia CS (1990) Оценка потенциальных антидотов для фторацетата натрия у мышей. Vet Hum Toxicol 32 (5): 427–431

    CAS PubMed Google Scholar

  • 27.

    Paquette T, Jeffrey-Gauthier R, Leblond H, PichÉ M (2018) Функциональная нейровизуализация ноцицептивной и связанной с болью активности в спинном и головном мозге: выводы из исследований нервно-сосудистой связи.Anat Rec 301 (9): 1585–1595

    Статья Google Scholar

  • 28.

    Paquette T, Leblond H, Piché M (2018) Изофлурановая анестезия не влияет на нервно-сосудистую связь спинного мозга: данные на децеребрированных крысах. J Physiol Sci. https://doi.org/10.1007/s12576-018-0607-7

    Статья PubMed Google Scholar

  • 29.

    Paulsen RE, Contestabile A, Villani L, Fonnum F (1987) Модель in vivo для изучения функции ткани мозга, временно лишенной метаболизма глиальных клеток: использование фторцитрата.J Neurochem 48 (5): 1377–1385

    CAS Статья Google Scholar

  • 30.

    Peppiatt CM, Howarth C, Mobbs P, Attwell D (2006) Двунаправленный контроль диаметра капилляров ЦНС перицитами. Nature 443 (7112): 700–704. https://doi.org/10.1038/nature05193

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 31.

    Петерс Р.А. (1957) Механизм токсичности активного компонента Dichapetalum cymosum и родственных ему соединений.Adv Enzymol Relat Subj Biochem 18: 113–159. https://doi.org/10.1002/9780470122631.ch4

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 32.

    Phatnani H, Maniatis T (2015) Астроциты при нейродегенеративных заболеваниях. Cold Spring Harb Perspect Biol 7 (6): a020628

    Статья Google Scholar

  • 33.

    Piché M, Paquette T, Leblond H (2017) Плотное нервно-сосудистое соединение в спинном мозге во время ноцицептивной стимуляции у интактных и спинномозговых крыс.Неврология 355: 1–8. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2017.04.038

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 34.

    Powers JM, Ioachim G, Stroman PW (2018) Десять ключевых идей использования фМРТ спинного мозга. Brain Sci. https://doi.org/10.3390/brainsci80

    Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 35.

    Schummers J, Yu H, Sur M (2008) Настроенные ответы астроцитов и их влияние на гемодинамические сигналы в зрительной коре.Наука 320 (5883): 1638–1643. https://doi.org/10.1126/science.1156120

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 36.

    Sharma K, Gordon GRJ, Tran CHT (2020) Неоднородность сенсорно-индуцированной динамики астроцитов Ca 2+ во время функциональной гиперемии. Front Physiol. https://doi.org/10.3389/fphys.2020.611884

    Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 37.

    Sotelo-Hitschfeld T, Niemeyer MI, Mächler P, Ruminot I, Lerchundi R, Wyss MT, Stobart J, Fernández-Moncada I, Valdebenito R, Garrido-Gerter P, Contreras-Baeza Yacher, Schneider BL, Aebischer P, Ленг , San Martín A, Le Douce J, Bonvento G, Magistretti PJ, Sepúlveda FV, Weber B, Barros LF (2015) Опосредованное каналом высвобождение лактата с помощью астроцитов, стимулированных K + . J Neurosci 35 (10): 4168–4178. https://doi.org/10.1523/jneurosci.5036-14.2015

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 38.

    Sprenger C, Finsterbusch J, Büchel C (2015) Функциональная связь спинного мозга и среднего мозга связана с воспринимаемой интенсивностью боли: комбинированное исследование спинно-кортикальной фМРТ. J Neurosci 35 (10): 4248–4257. https://doi.org/10.1523/jneurosci.4897-14.2015

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 39.

    Stone EA, Sessler FM, Weimin L (1990) Глиальная локализация связанных с аденилатциклазой β-адренорецепторов в срезах переднего мозга крысы.Brain Res 530 (2): 295–300. https://doi.org/10.1016/0006-8993(90)91298-U

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 40.

    Суини, MD, Ayyadurai S, Zlokovic BV (2016) Перициты сосудисто-нервной единицы: ключевые функции и сигнальные пути. Nat Neurosci 19 (6): 771–783. https://doi.org/10.1038/nn.4288

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 41.

    Takano T, Tian G-F, Peng W, Lou N, Libionka W, Han X, Nedergaard M (2006) Астроцит-опосредованный контроль мозгового кровотока. Nat Neurosci 9 (2): 260

    CAS Статья Google Scholar

  • 42.

    Takata N, Sugiura Y, Yoshida K, Koizumi M, Hiroshi N, Honda K, Yano R, Komaki Y, Matsui K, Suematsu M, Mimura M, Okano H, Tanaka KF (2018) Оптогенетическая активация астроцитов вызывает ЖИВОЙ ответ фМРТ с потреблением кислорода без модуляции активности нейронов.Glia 66 (9): 2013–2023. https://doi.org/10.1002/glia.23454

    Статья PubMed Google Scholar

  • 43.

    Tinnermann A, Büchel C, Cohen-Adad J (2021) Кортико-спинальная визуализация для изучения боли. Нейроизображение 224: 117439. https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2020.117439

    Статья PubMed Google Scholar

  • 44.

    Tran CHT, Peringod G, Gordon GR (2018) Астроциты интегрируют поведенческое состояние и сосудистые сигналы во время функциональной гиперемии.Нейрон 100 (5): 1133-1148.e1133. https://doi.org/10.1016/j.neuron.2018.09.045

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 45.

    Uchida S, Bois S, Guillemot J-P, Leblond H, Piché M (2017) Системное артериальное давление изменяет корковый кровоток и нервно-сосудистую связь во время ноцицептивной обработки в первичной соматосенсорной коре крысы. Неврология 343: 250–259. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2016.12.014

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 46.

    Valtschanoff JG, Weinberg RJ, Rustioni A (1992) НАДФН-диафораза в спинном мозге крыс. J Comp Neurol 321 (2): 209–222. https://doi.org/10.1002/cne.

    0204

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 47.

    Wang M, He Y, Sejnowski TJ, Yu X (2018) Зависимые от состояния мозга астроцитарные сигналы Ca (2+) связаны как с положительными, так и с отрицательными сигналами BOLD-fMRI. Proc Natl Acad Sci U S A 115 (7): E1647-e1656.https://doi.org/10.1073/pnas.1711692115

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 48.

    Wheeler-Kingshott CA, Stroman PW, Schwab JM, Bacon M, Bosma R, Brooks J, Cadotte DW, Carlstedt T, Ciccarelli O, Cohen-Adad J, Curt A, Evangelou N, Fehlings MG, Filippi M, Kelley BJ, Kollias S, Mackay A, Porro CA, Smith S, Strittmatter SM, Summers P, Thompson AJ, Tracey I (2014) Современное состояние визуализации спинного мозга: приложения.Нейроизображение 84: 1082–1093. https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2013.07.014

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 49.

    Уиллоуби Дж.О., Маккензи Л., Броберг М., Торен А.Е., Медведев А., Симс Н.Р., Нильссон М. (2003) Опосредованная фторцитратом астроглиальная дисфункция вызывает судороги. Журнал Neurosci Res 74 (1): 160–166. https://doi.org/10.1002/jnr.10743

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 50.

    Yoshioka K, Nisimaru N, Yanai S, Shimoda H, Yamada K (2000) Характеристики монокарбоксилатов в качестве энергетических субстратов, отличных от глюкозы, в срезах мозга крыс и эффект селективного глиального отравления - исследование ЯМР 31P. Neurosci Res 36 (3): 215–226

    CAS Статья Google Scholar

  • 51.

    Zonta M, Angulo MC, Gobbo S, Rosengarten B, Hossmann KA, Pozzan T, Carmignoto G (2003) Передача сигналов между нейронами и астроцитами занимает центральное место в динамическом контроле микроциркуляции мозга.Nat Neurosci 6 (1): 43–50. https://doi.org/10.1038/nn980

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • .

    Автор: alexxlab

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *