Посадка патрона в16 что значит: Какие обозначения имеют посадочные размеры у патронов для сверлильных станков? Также, чем отличаются серии MK и B?

Содержание

Патроны для дрелей и перфораторов

Сортировать по:

Популярности Цене Акциям Новинкам

Выводить по:

30 60 90

Наличие:

Все В наличии

Купить патроны для дрелей и перфораторов

В нашем интернет-магазине вы можете приобрести профессиональный и бытовой инструмент, оборудование ведущих мировых производителей. Наша компания имеет несколько филиалов по городу и позволяет вам получить свой заказ в шаговой доступности. Также мы доставляем продукцию транспортными компаниями и курьерскими службами в пределах города, в ближайшие города Екатеринбурга: Асбест, Верхняя Пышма, Ревда, Первоуральск и другие регионы России.

Где заказать?

Заказать патроны для дрелей и перфораторов онлайн – это возможность сэкономить свое драгоценное время, быстро оформив заявку на нашем сайте. Благодаря убдобному каталогу, гибким фильтрам и обширному выбору, вы сможете найти подходящие вам товары, как по цене, так и по техническим характеристикам. Если у вас возникнут вопросы по ассортименту или оформлению заказа, то вы можете обратиться к специалистам нашей компании за консультацией. Телефоны специализированных отделов вы сможете найти на странице контактов. патроны для дрелей и перфораторов в инструмент-центре Корвет – это отличная возможность купить товар по низкой цене, а также получить высококлассное сервисное обслуживание.

Разновидности патронов для дрели. Как снять патрон, как правильно выбрать

Быстрозажимные и с ключом

Любой мастер, который имеет в своём хозяйстве электрическую дрель, может столкнуться с такой ситуацией, что патрон у дрели начинает бить (теряется центр) и сверло ходит из стороны в сторону, вследствие чего нормальной работы не получится. Либо просто кулачки у патрона износились, что может случится со временем.
В этом случае патрон следует заменить на новый. Как же правильно его подобрать?

Есть несколько видов патронов для дрели. Есть на резьбе, есть на конусе, которые просто насаживаются, а не закручиваются. Рассмотрим их более детально, чтобы не ошибиться при выборе.

Резьбовой патрон.

На резьбе

Надевается на дрель путём накручивания его на штырь с резьбой, который располагается на дрели.
Есть две основные разновидности резьбового патрона. Они отличаются типами резьбы.

Имеют маркировку (1,5-13 М12*1.25) и (1,5-13 1/2 — 20 UNF)

Маркировки на патронах

Цифры 1,5-13 означают максимальный и минимальный диаметр хвостовика сверла, который можно зажать в патрон. Минимальный 1,5мм, максимальный – 13мм, входит и 13,5, проверял лично. На некоторых патронах минимальный зажимаемый диаметр 2мм.
М12 – означает, что отверстие снизу 12мм.
1.25 или 1/2 — 20 UNF – это разные виды резьбы, первая метрическая, вторая дюймовая.

Подбирайте правильно, патроны не взаимозаменяемые, если идёт маркировка на патроне М12*1,25, то такой и берите. Если М12*1/2 – 20 UNF – то только такой. Если надпись стерлась, придётся снять патрон с дрели, взять его с собой в магазин.

Как его снять?
Для этого следует скрутить патрон против часовой стрелки. Иногда патрон дополнительно крепится винтом, который располагается в нём по центру,

Внутри патрона левый винт

этот винт имеет левую резьбу, т.е. откручивается по часовой стрелке, а не как обычно — против часовой.

Сначала раскрутите патрон (раздвиньте кулачки), потом скрутите винт простой крестовой отверткой №2. После этого можно скручивать сам патрон против часовой стрелки, резьба у него стандартная. Бывает, что это очень сложно сделать, так как со временем он очень сильно затянулся. Для съёма можно воспользоваться трубным ключом, чтобы крепко обхватить, к примеру, взять номер второй. Можно воспользоваться помощью товарища, один держит шейку дрели одним ключом, второй скручивает сам патрон другим ключом. Особенно, если дрель старая, без помощника сложновато.

Патрон на конусе.

Патроны на конусе, без резьбы

Они надеваются путём простого насаживания. Также есть несколько разновидностей: В10, В12, В16, В18. Если присутствует буква «В» в маркировке на патроне – знайте, что он на конусе, резьба снизу отсутствует.
Цифра в маркировке патрона означает диаметр отверстия снизу. Чем она больше, тем больше отверстие. В патроны В10, В12 вы сможете зажать сверло с хвостовиком максимум 13мм.

А В16, В18 позволяют уже зажать сверла с хвостовиком до 16мм.
Снимать такой патрон следует путём выбивания его с дрели, просто и нехитро с помощью молотка.
Насаживается он на специальный штырь – державку, располагающуюся на дрели.

Схема

Патроны есть с ключом, есть быстрозажимные (на первом фото).
К плюсам быстрого зажима можно отнести то, что удобно по быстрому менять сверла, насадки шуруповёрта. К минусам – то, что иногда сверла могут проворачиваться, особенно если хвостовик цилиндрический (круглый), а не шестигранный, особенно когда сверло по металлу большого диаметра. Нагрузка велика, а рукой сильно не затянешь, что не скажешь о патронах «классических», которые заворачиваются при помощи ключа. На мой взгляд, это намного надежнее. Единственный минус – можно потерять ключ, для этого логично его прикрутить на кабель дрели изолентой, чтобы всегда был на своём месте.

Бывают патроны с шестигранным хвостовиком 1/4 дюйма, способные зажимать сверла от 0,6мм.

Посадка подшипников | Главный механик

Выбор правильной посадки, обеспечение требуемой чистоты и значения допусков размеров поверхностей под подшипники является ключевым фактором, обеспечивающим долговечность, надежность механизмов.

Правильная посадка – важнейшее условие работоспособности подшипников.

Исходя из особенностей работы подшипника, кольцо, которое вращается должно закрепляться на опорной поверхности неподвижно, с натягом, а неподвижное кольцо садиться в отверстие с минимальным зазором, относительно свободно.

Установка с натягом вращающегося кольца не дает ему проворачиваться, что могло бы привести к износу опорной поверхности, контактной коррозии, разбалансировке подшипников, развальцовке опоры, чрезмерному нагреву. Так, в основном, выполняется посадка подшипника на вал, который работает под нагрузкой.

Для неподвижного кольца небольшой зазор даже полезен, а возможность проворота не чаще одного раза за сутки делает износ опорной поверхности более равномерным, минимизирует его.

Основные термины

Рассмотрим подробнее основные термины и понятия, определяющие посадки подшипников. Современное машиностроение основано на принципе взаимозаменяемости. Любая деталь, изготовленная по одному чертежу должна устанавливаться в механизм, выполнять свои функции, быть взаимозаменяемой.

Для этого чертеж определяет не только размеры, но и максимальные, минимальные отклонения от них, то есть допуски. Значения допусков стандартизованы единой системой для допусков, посадок ЕСДП, разбиты по степеням точности (квалитетам), приводятся в таблицах.

Их также можно найти в первом томе Справочника конструктора-машиностроителя Анурьева, и ГОСТах 25346-89, а также 25347-82 или 25348-82.

–

Согласно ГОСТ 25346-89 определены 20 квалитетов точности, но в машиностроении обычно используются с 6 по16. Причем, чем ниже номер квалитета, тем выше точность. Для посадок шарико и роликоподшипников актуальны 6,7, реже 8 квалитеты.

В пределах одного квалитета размер допуска одинаков. Но верхнее и нижнее отклонение размера от номинала расположены по-разному и их сочетания на валах и отверстиях образуют различные посадки.

Существуют посадки обеспечивающие гарантию зазора, натяга и переходные, реализующие как минимальный зазор, так и минимальный натяг. Посадки обозначают латинскими строчными буквами для валов, большими для отверстий и цифрой, указывающей на квалитет, то есть степень точности. Обозначения посадок:

с зазором a, b, c, d, e, f, g, h;
переходных js, k, m, n;
с натягом p, r, s, t, u, x, z.

По системе отверстия для всех квалитетов оно имеет допуск H, а характер посадки определяется допуском вала. Такое решение позволяет уменьшить количество необходимых контрольных калибров, инструмента режущего и является приоритетным. Но в отдельных случая используется система вала, в которой валы имеют допуск h, а посадка достигается обработкой отверстия. И именно таким случаем является вращение наружного кольца шарикоподшипника. Примером подобной конструкции могут служить ролики или барабаны натяжные конвейеров ленточных.

Выбор посадки подшипников качения

Среди основных параметров определяющих посадки подшипников:

характер, направление, величина нагрузки, воздействующей на подшипник;
точность подшипника;
скорость вращения;
вращение или неподвижность соответствующего кольца.

Ключевое условие, определяющее посадку – неподвижность либо вращение кольца. Для неподвижного кольца подбирается посадка с малым зазором и постепенное медленное проворачивание считается положительным фактором, уменьшающим общий износ, препятствующим местному износу. Вращающееся кольцо обязательно сажают с надежным натягом, исключающим проворот по отношению к посадочной поверхности.

Следующим важным фактором, которому должна соответствовать посадка под подшипник на валу или в отверстии, является вид нагружения. Различают три ключевых типа нагружения:

циркуляционное при вращении кольца относительно постоянно действующей в одном направлении радиальной нагрузки;
местное для неподвижного кольца относительно радиального нагружения;
колебательное при радиальной нагрузке колеблющейся относительно положения кольца.

Согласно ГОСТ 520 степени точности подшипников в порядке их увеличения соответствуют пяти классам 0,6,5,4,2. Для машиностроения при нагрузках невысокой и средней величины, например для редукторов, обычным является класс 0, который не указывается в обозначении подшипников. При более высоких требованиях к точности используется шестой класс. На повышенных скоростях 5,4 и только в исключительных случаях второй. Пример обозначения подшипника шестого класса 6-205.

В процессе реального проектирования машин посадка подшипника на вал и в корпус выбирается в соответствие с условиями работы по специальным таблицам. Они приведены в томе втором Справочника конструктора-машиностроителя Василия Ивановича Анурьева.

Для местного типа нагрузки таблица предлагает следующие посадки.

При условиях циркуляционного нагружения, когда радиальное усилие воздействует на всю дорожку качения, учитывают интенсивность нагружения:

Pr=(k1xk2xk3xFr)/B, где:
k1 – коэффициент перегрузки динамической;
k2 – коэффициент ослабления для полого вала или корпуса тонкостенного;
k3 – коэффициент, определяемый воздействием осевых усилий;
Fr – усилие радиальное.

Значение коэффициента k1 при перегрузках менее, чем в полтора раза, небольшой вибрации и толчках принимают равным 1, а при возможной перегрузке от полутора до трех раз, сильных вибрациях, ударах k1=1,8.

Значения k2 и k3 подбираются по таблице. Причем для k3 учитывают соотношение осевой нагрузки к радиальной, выраженное параметром Fc/Fr x ctgβ.

Соответствующие коэффициентам и параметру интенсивности нагружения посадки подшипников приведены в таблице.

Обработка посадочных мест и обозначение посадок под подшипники на чертежах.

Посадочное место под подшипник на валу и в корпусе должно иметь заходные фаски. Шероховатость посадочного места составляет:

для шейки вала диаметром до 80 мм под подшипник класса 0 Ra=1,25, а при диаметре 80…500 мм Ra=2,5;
для шейки вала диаметром до 80 мм под подшипник класса 6,5 Ra=0,63 а при диаметре 80…500 мм Ra=1,25;
для отверстия в корпусе диаметром до 80 мм под подшипник класса 0 Ra=1,25, а при диаметре 80…500 мм Ra=2,5;
для отверстия в корпусе диаметром до 80 мм под подшипник класса 6,5,4 Ra=0,63, а при диаметре 80…500 мм Ra=1,25.

На чертеже также указывают отклонение формы места посадки подшипников, торцовое биение заплечиков для их упора.

Пример чертежа, в котором указана посадка подшипника на валу Ф 50 к6 и отклонения формы.

Значения отклонений формы принимаются по таблице в зависимости от диаметра, который имеет посадка подшипника на валу либо в корпусе, точности подшипника.

На чертежах указывают диаметр вала и корпуса под посадку, например, Ф20к6, Ф52Н7. На сборочных чертежах можно просто указывать размер с допуском в буквенном обозначении, но на чертежах деталей желательно кроме буквенного обозначения допуска приводить и его численное выражение для удобства рабочих. Размеры на чертежах указываются в миллиметрах, а величина допуска в микрометрах.

Внимание покупателей подшипников

Уважаемые покупатели, отправляйте ваши вопросы и заявки по приобретению подшипников и комплектующих на почту или звоните сейчас:

+7(499)403 39 91

Доставка подшипников по РФ и зарубежью.

Каталог подшипников на сайте themechanic.ru

Внимание покупателей подшипников

Уважаемые покупатели, отправляйте ваши вопросы и заявки по приобретению подшипников и комплектующих на почту или звоните сейчас:
tel:+7 (495) 646 00 12
[email protected]
Доставка подшипников по РФ и зарубежью.
Каталог подшипников на сайте

Внимание покупателей подшипников

Разница между картриджем для перьевой ручки и конвертером для перьевой ручки

Перьевые ручки можно заполнить чернилами несколькими способами. Два из наиболее распространенных – с чернильным картриджем или с конвертером чернил. Здесь мы объясним оба этих метода, а также преимущества и недостатки каждого из них.

Картриджи для перьевой ручки

Картридж для перьевой ручки – это небольшая одноразовая капсула, заполненная чернилами для перьевой ручки. Этот чернильный картридж прикрепляется к задней части устройства подачи перьевой ручки и снабжает перо чернилами.Когда в картридже заканчиваются чернила, вы просто извлекаете пустой картридж, выбрасываете его и вставляете новый.

Преимущества картриджей для перьевых ручек

Удобство Картриджи с чернилами удобны. Их легко носить с собой и легко использовать.
Беспорядок Чернила перьевой ручки могут быть грязными, а чернильные картриджи относительно свободны. Наполнение пера не требует погружения пера в бутылку с чернилами.

Недостатки чернильных картриджей для перьевых ручек

Selection Чернильные картриджи имеют меньшее количество цветов и вариантов чернил, чем чернила в бутылках.Также перьевые ручки подходят только к определенным типам чернильных картриджей, поэтому вы ограничены определенными брендами, которые подойдут к вашей ручке.
Количество чернил Картриджи с чернилами для перьевых ручек обычно меньше по размеру и вмещают меньше чернил, чем перьевые ручки-конвертеры или поршневые ручки.

Конвертеры чернил перьевой ручки

Конвертеры чернил перьевой ручки представляют собой съемные приводы, которые используются для удержания чернил перьевой ручки. Конвертер присоединяется так же, как и картридж с чернилами, но имеет небольшой поршень или поршень, который проходит внутри и втягивает чернила в перьевую ручку.Чтобы заполнить картридж перьевой ручки, вам нужно окунуть перо в бутылку с чернилами для перьевой ручки, протянуть чернила через перо и подать.

Преимущества преобразователей чернил для перьевых ручек

Выбор В отличие от картриджей с чернилами, преобразователи позволяют использовать почти бесконечный запас чернил цветов, типов и марок. Поскольку вы можете наполнить перьевая ручку чернилами из бутылки, вы можете выбрать свои любимые чернила.

Недостатки картриджей с чернилами для перьевых ручек

Не удобны для путешествий Картриджи с чернилами позволяют брать чернила на замену с собой в дорогу.Носить бутылку с чернилами не так просто.
Может быть грязно Использование чернил в бутылках требует погружения кончика пера в чернила, и чернила могут испачкаться, если вы не будете осторожны.

Запасные части для перьевых ручек Глоссарий – RefillFinder

Большинство современных перьевых ручек рассчитаны на использование либо одноразового картриджа с чернилами , либо конвертера чернил . Они называются перьими ручками с картриджем / конвертером (сокращенно c / c). Картриджи с чернилами обычно предлагаются двух размеров – длинные и короткие (международный размер).Чаще всего совместимы чернильные картриджи международного размера, которые можно использовать для 90% всех перьевых ручек, использующих картриджи. Сами картриджи прозрачны, что позволяет писателю видеть цвет в картридже и то, сколько его осталось после записи. Международные картриджи имеют меньшую емкость чернил и служат от нескольких дней до недели на картридж, в зависимости от того, сколько вы пишете. Картриджи большего размера могут отличаться по форме и длине от производителя к производителю.Они могут удерживать больше чернил примерно на 1-2 недели использования.

Преобразователь чернил для перьевой ручки выглядит как пустой чернильный картридж с поворотной ручкой (или винтом) на задней стороне. Установка преобразователя в переднюю часть перьевой ручки позволяет всасывать чернила из бутылки через наконечник, поворачивая ручку, толкая поршень вверх и вниз, как медицинский шприц. Преобразователи, если их часто очищать после заливки чернил, можно использовать повторно в течение многих лет, и их не нужно часто менять.

Плюсы: Пользователи перьевой ручки могут выбирать между двумя вариантами наполнения роскошью и удобством. Картриджи проще и менее склонны к беспорядку, в то время как конвертеры более экономичны и вызывают чувство ностальгии у старомодных пользователей пера. Минусы: Одноразовые картриджи с чернилами необходимо заменять чаще, и они менее рентабельны, чем бутылка с чернилами. Заполнение с помощью конвертера и бутылки с чернилами может быть неудобным для начинающего пользователя перьевой ручки и требует более тщательной очистки и обслуживания.

Заправка картриджей международного размера

Меньший по размеру картридж с чернилами международного размера подходит для большинства перьевых ручек с картриджами или конвертерами. На слегка заостренном конце картриджа есть воротник и небольшой пузырек, который прокалывается, когда картридж вставляется в переднюю часть перьевой ручки. Противоположный конец обычно белый или непрозрачный. Обычно картриджи этого размера помещают в корпус ручки, чтобы обеспечить правильную посадку и легкодоступную замену.«Объединение» картриджа включает в себя вставку одного картриджа для записи и размещение другого картриджа в нижней части корпуса ручки в качестве резерва и для надежного удержания активного картриджа с чернилами на месте.

Марки ручки, подходящие для заправки картриджей международного размера: Aldo Domani, ACME, Aurora, Bexley, Brossert & Erhard, Caran d’Ache, Colibri, Conklin, Conway Stewart, Delta, Diplomat, Edison, Elysee, Faber Castell, Foray Focus , Hauser, Inoxcrom, Itoya, Jac Zagoory, Jean Pierre Lepine, Krone, Libelle, Marlen, Metropolitan Museum of Art Pens, Montegrappa, Monteverde, Nettuno, OMAS, ONLINE, Pelikan, Porsche Design, Retro 51, Rotring, Schmidt, Schneider, Sensa, Taccia, Visconti, Waterford, Waterman, Yafa, Yard-O-Led.

Заправочные картриджи для перьевых ручек International: ACME, Caran d’Ache, Diamine, Monteverde, Parker, Pelikan, Waterman, Schmidt, Visconti

Стандартный (международный) преобразователь чернил Шмидта

Этот преобразователь размера чаще всего подходит для полноразмерных перьевых ручек. Стандартный преобразователь выглядит как пустой чернильный картридж с поворотным механизмом на одном конце. Вращение ручки поднимает и опускает поршень для всасывания / вытеснения чернил из конвертера. Единственная проблема совместимости, которая может привести к несовпадению (и чернильным рукам), – это воротник, который подходит к переднему концу перьевой ручки.

Бренды ручек, подходящие для конвертера Schmidt: ACME, Conway Stewart, Delta, Edison, Laban, Libelle, Metropolitan Museum of Art, Monteverde, ONLINE, Pelikan, Retro 51, Sensa, Taccia, Waterford

Преобразователь стандартной перьевой ручки: Schmidt, Parker, Pelikan, Visconti

Картриджи и преобразователи для перьевых ручек от других производителей

Картридж для перьевой ручки Lamy LT10

Картридж для перьевой ручки Cross Standard

Картридж для перьевой ручки Waterman

Картридж для перьевой ручки Sheaffer

Картридж с чернилами для перьевой ручки Parker (также совместим с ручками Aurora)

Картридж для перьевой ручки Pilot / Namiki

Преобразователь чернил для перьевой ручки Cross Standard

Конвертер чернил для перьевых ручек Cross Townsend для перьевых ручек Townsend

Конвертер чернил для перьевой ручки Pilot (для моделей с точкой исчезновения и других моделей)

Конвертер чернил для перьевой ручки Waterman

Конвертер чернил для перьевой ручки Sheaffer

Конвертер чернил для перьевой ручки Lamy LZ24 для Safari и AL-Star

Конвертер чернил для перьевой ручки Lamy LZ26 Studio

% PDF-1. 6 % 237 0 объект > эндобдж xref 237 189 0000000016 00000 н. 0000005247 00000 н. 0000005385 00000 п. 0000005696 00000 п. 0000005748 00000 н. 0000005783 00000 н. 0000005833 00000 н. 0000005883 00000 н. 0000006012 00000 н. 0000006045 00000 н. 0000006234 00000 н. 0000006425 00000 н. 0000006616 00000 н. 0000006806 00000 н. 0000006998 00000 н. 0000007187 00000 н. 0000007533 00000 н. 0000007568 00000 н. 0000008408 00000 п. 0000008755 00000 н. 0000009103 00000 п. 0000009219 00000 п. 0000009674 00000 н. 0000010295 00000 п. 0000010545 00000 п. 0000010789 00000 п. 0000010834 00000 п. 0000010912 00000 п. 0000011791 00000 п. 0000012457 00000 п. 0000013114 00000 п. 0000013954 00000 п. 0000014773 00000 п. 0000015618 00000 п. 0000016091 00000 п. 0000016128 00000 п. 0000016391 00000 п. 0000017084 00000 п. 0000017587 00000 п. 0000020281 00000 п. 0000020307 00000 п. 0000020379 00000 п. 0000020489 00000 н. 0000020581 00000 п. 0000020622 00000 п. 0000020725 00000 п. 0000020766 00000 п. 0000020902 00000 п. 0000020990 00000 н. 0000021031 00000 п. 0000021168 00000 п. 0000021326 00000 п. 0000021433 00000 п. 0000021474 00000 п. 0000021611 00000 п. 0000021745 00000 п. 0000021847 00000 п. 0000021888 00000 п. 0000021991 00000 п. 0000022032 00000 н. 0000022150 00000 п. 0000022191 00000 п. 0000022296 00000 п. 0000022337 00000 п. 0000022387 00000 п. 0000022438 00000 п. 0000022488 00000 п. 0000022538 00000 п. 0000022579 00000 п. 0000022630 00000 н. 0000022671 00000 п. 0000022785 00000 п. 0000022826 00000 п. 0000022966 00000 п. 0000023007 00000 п. 0000023120 00000 п. 0000023161 00000 п. 0000023274 00000 п. 0000023315 00000 п. 0000023439 00000 п. 0000023480 00000 п. 0000023611 00000 п. 0000023652 00000 п. 0000023785 00000 п. 0000023826 00000 п. 0000023928 00000 п. 0000023969 00000 п. 0000024075 00000 п. 0000024116 00000 п. 0000024210 00000 п. 0000024251 00000 п. 0000024358 00000 п. 0000024399 00000 п. 0000024516 00000 п. 0000024557 00000 п. 0000024663 00000 п. 0000024704 00000 п. 0000024834 00000 п. 0000024875 00000 п. 0000024984 00000 п. 0000025025 00000 п. 0000025156 00000 п. 0000025197 00000 п. 0000025297 00000 п. 0000025338 00000 п. 0000025388 00000 п. 0000025438 00000 п. 0000025488 00000 п. 0000025539 00000 п. 0000025589 00000 н. 0000025639 00000 п. 0000025689 00000 п. 0000025739 00000 п. 0000025790 00000 н. 0000025842 00000 п. 0000025893 00000 п. 0000025944 00000 п. 0000025995 00000 п. 0000026046 00000 п. 0000026097 00000 п. 0000026148 00000 п. 0000026199 00000 п. 0000026250 00000 п. 0000026300 00000 п. 0000026341 00000 п. 0000026391 00000 п. 0000026432 00000 н. 0000026544 00000 п. 0000026585 00000 п. 0000026725 00000 п. 0000026766 00000 п. 0000026891 00000 п. 0000026932 00000 п. 0000027045 00000 п. 0000027086 00000 п. 0000027209 00000 н. 0000027250 00000 п. 0000027407 00000 п. 0000027448 00000 н. 0000027580 00000 п. 0000027621 00000 п. 0000027723 00000 п. 0000027764 00000 н. 0000027869 00000 п. 0000027910 00000 н. 0000028014 00000 п. 0000028055 00000 п. 0000028165 00000 п. 0000028206 00000 п. 0000028326 00000 п. 0000028367 00000 п. 0000028499 00000 н. 0000028540 00000 п. 0000028697 00000 п. 0000028738 00000 п. 0000028867 00000 п. 0000028908 00000 п. 0000029039 00000 п. 0000029080 00000 н. 0000029192 00000 п. 0000029233 00000 п. 0000029369 00000 п. 0000029410 00000 п. 0000029459 00000 п. 0000029510 00000 п. 0000029563 00000 п. 0000029614 00000 п. 0000029665 00000 п. 0000029714 00000 п. 0000029763 00000 п. 0000029812 00000 п. 0000029861 00000 п. 0000029911 00000 н. 0000029961 00000 н. 0000030011 00000 п. 0000030061 00000 п. 0000030111 00000 п. 0000030161 00000 п. 0000030211 00000 п. 0000030261 00000 п. 0000030311 00000 п. 0000030362 00000 п. 0000030427 00000 п. 0000030468 00000 п. 0000030517 00000 п. 0000030570 00000 п. 0000030621 00000 п. 0000030662 00000 п. 0000004162 00000 п. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 425 0 объект > поток & я> о * & 3g. [IS (L&X ‘CmAme> F ۼ f f? 8jˊ = 3s + f3e + .k2 fw’t ~ (W3b? -PC; L> 6 g ~> ܓ Ș6? j @ F ٕ L @; -Q3wYnS “z = GpNs E + 11 |) N2? [ } | iDOzȏ

% PDF-1.5 % 7637 0 obj> эндобдж xref 7637 1192 0000000016 00000 н. 0000032171 00000 п. 0000032342 00000 п. 0000032474 00000 п. 0000032647 00000 п. 0000032781 00000 п. 0000033140 00000 п. 0000034446 00000 п. 0000035192 00000 п. 0003827008 00000 н. 0003832857 00000 п. 0003833039 00000 п. 0003847769 00000 п. 0003847956 00000 п. 0003848019 00000 п. 0003848093 00000 п. 0003848194 00000 п. 0003848295 00000 п. 0003848357 00000 п. 0003848564 00000 п. 0003848680 00000 п. 0003848742 00000 п. 0003848917 00000 п. 0003849047 00000 п. 0003849109 00000 п. 0003849215 00000 п. 0003849393 00000 п. 0003849486 00000 п. 0003849548 00000 н. 0003849692 00000 п. 0003849881 00000 п. 0003849974 00000 н. 0003850036 00000 н. 0003850165 00000 п. 0003850365 00000 пн 0003850458 00000 п. 0003850520 00000 н. 0003850672 00000 п. 0003850869 00000 п. 0003850962 00000 п. 0003851024 00000 п. 0003851130 00000 п. 0003851307 00000 п. 0003851386 00000 п. 0003851448 00000 п. 0003851627 00000 п. 0003851704 00000 п. 0003851766 00000 п. 0003851840 00000 п. 0003852031 00000 н. 0003852130 00000 п. 0003852192 00000 п. 0003852287 00000 п. 0003852476 00000 п. 0003852575 00000 п. 0003852637 00000 п. 0003852732 00000 н. 0003852930 00000 п. 0003853029 00000 п. 0003853091 00000 п. 0003853203 00000 п. 0003853381 00000 п. 0003853480 00000 п. 0003853542 00000 п. 0003853644 00000 п. 0003853812 00000 п. 0003853911 00000 п. 0003853973 00000 п. 0003854068 00000 п. 0003854243 00000 п. 0003854342 00000 п. 0003854404 00000 п. 0003854499 00000 н. 0003854683 00000 п. 0003854782 00000 п. 0003854844 00000 п. 0003854964 00000 п. 0003855154 00000 п. 0003855253 00000 п. 0003855315 00000 п. 0003855427 00000 п. 0003855601 00000 п. 0003855700 00000 п. 0003855762 00000 п. 0003855863 00000 п. 0003856036 00000 п. 0003856135 00000 п. 0003856197 00000 п. 0003856292 00000 п. 0003856484 00000 п. 0003856583 00000 п. 0003856645 00000 п. 0003856755 00000 п. 0003856938 00000 п. 0003857037 00000 п. 0003857099 00000 п. 0003857230 00000 п. 0003857404 00000 п. 0003857503 00000 п. 0003857565 00000 п. 0003857673 00000 п. 0003857850 00000 п. 0003857949 00000 п. 0003858011 00000 п. 0003858106 00000 п. 0003858280 00000 п. 0003858379 00000 п. 0003858441 00000 п. 0003858573 00000 п. 0003858749 00000 п. 0003858848 00000 н. 0003858910 00000 п. 0003859016 00000 п. 0003859183 00000 п. 0003859282 00000 п. 0003859344 00000 п. 0003859460 00000 п. 0003859657 00000 п. 0003859756 00000 п. 0003859818 00000 п. 0003859975 00000 п. 0003860159 00000 п. 0003860258 00000 п. 0003860320 00000 п. 0003860471 00000 п. 0003860661 00000 п. 0003860760 00000 п. 0003860822 00000 п. 0003860940 00000 п. 0003861133 00000 п. 0003861232 00000 п. 0003861294 00000 п. 0003861449 00000 п. 0003861638 00000 п. 0003861737 00000 п. 0003861799 00000 н. 0003861908 00000 п. 0003862118 00000 п. 0003862217 00000 п. 0003862279 00000 п. 0003862412 00000 п. 0003862586 00000 п. 0003862685 00000 п. 0003862747 00000 п. 0003862864 00000 п. 0003863053 00000 п. 0003863152 00000 п. 0003863214 00000 п. 0003863341 00000 п. 0003863538 00000 п. 0003863635 00000 п. 0003863697 00000 п. 0003863833 00000 п. 0003864027 00000 п. 0003864124 00000 п. 0003864186 00000 п. 0003864330 00000 п. 0003864531 00000 п. 0003864628 00000 п. 0003864690 00000 н. 0003864804 00000 п. 0003864985 00000 п. 0003865082 00000 п. 0003865144 00000 п. 0003865247 00000 п. 0003865424 00000 п. 0003865521 00000 п. 0003865583 00000 п. 0003865715 00000 п. 0003865920 00000 н. 0003866017 00000 п. 0003866079 00000 п. 0003866200 00000 п. 0003866395 00000 п. 0003866491 00000 п. 0003866553 00000 п. 0003866699 00000 п. 0003866869 00000 п. 0003866966 00000 п. 0003867028 00000 п. 0003867133 00000 п. 0003867310 00000 п. 0003867407 00000 п. 0003867469 00000 п. 0003867582 00000 п. 0003867756 00000 п. 0003867853 00000 п. 0003867915 00000 н. 0003868040 00000 п. 0003868221 00000 п. 0003868354 00000 п. 0003868416 00000 п. 0003868561 00000 п. 0003868771 00000 п. 0003868867 00000 п. 0003868929 00000 п. 0003869095 00000 п. 0003869286 00000 п. 0003869382 00000 п. 0003869444 00000 п. 0003869595 00000 п. 0003869782 00000 п. 0003869878 00000 п. 0003869940 00000 п. 0003870057 00000 п. 0003870236 00000 п. 0003870332 00000 п. 0003870394 00000 п. 0003870518 00000 п. 0003870711 00000 п. 0003870807 00000 п. 0003870869 00000 п. 0003870985 00000 п. 0003871175 00000 п. 0003871271 00000 п. 0003871333 00000 п. 0003871464 00000 п. 0003871632 00000 п. 0003871728 00000 п. 0003871790 00000 н. 0003871898 00000 п. 0003872070 00000 п. 0003872168 00000 п. 0003872229 00000 п. 0003872348 00000 п. 0003872475 00000 п. 0003872523 00000 п. 0003872640 00000 п. 0003872687 00000 п. 0003872806 00000 п. 0003872853 00000 п. 0003872987 00000 п. 0003873037 00000 п. 0003873134 00000 п. 0003873284 00000 п. 0003873344 00000 п. 0003873494 00000 п. 0003873551 00000 п. 0003873688 00000 п. 0003873744 00000 п. 0003873913 00000 п. 0003873970 00000 п. 0003874105 00000 п. 0003874165 00000 п. 0003874300 00000 п. 0003874360 00000 п. 0003874495 00000 п. 0003874551 00000 п. 0003874697 00000 п. 0003874753 00000 п. 0003874882 00000 п. 0003874938 00000 п. 0003875070 00000 п. 0003875126 00000 п. 0003875272 00000 п. 0003875332 00000 п. 0003875452 00000 п. 0003875512 00000 п. 0003875633 00000 п. 0003875688 00000 п. 0003875803 00000 п. 0003875859 00000 п. 0003875980 00000 п. 0003876036 00000 п. 0003876152 00000 п. 0003876208 00000 п. 0003876324 00000 п. 0003876380 00000 п. 0003876492 00000 п. 0003876549 00000 п. 0003876692 00000 п. 0003876751 00000 п. 0003876916 00000 п. 0003876975 00000 п. 0003877093 00000 п. 0003877150 00000 п. 0003877211 00000 п. 0003877331 00000 п. 0003877388 00000 п. 0003877522 00000 п. 0003877582 00000 п. 0003877720 00000 н. 0003877778 00000 п. 0003877913 00000 п. 0003877974 00000 п. 0003878031 00000 п. 0003878087 00000 п. 0003878144 00000 п. 0003878201 00000 п. 0003878257 00000 п. 0003878375 00000 п. 0003878433 00000 п. 0003878552 00000 п. 0003878610 00000 п. 0003878738 00000 п. 0003878795 00000 п. 0003878913 00000 п. 0003878971 00000 п. 0003879081 00000 п. 0003879138 00000 п. 0003879266 00000 п. 0003879323 00000 п. 0003879437 00000 п. 0003879494 00000 п. 0003879632 00000 п. 0003879690 00000 н. 0003879824 00000 п. 0003879882 00000 п. 0003880001 00000 п. 0003880058 00000 н. 0003880187 00000 п. 0003880245 00000 п. 0003880364 00000 п. 0003880424 00000 п. 0003880538 00000 п. 0003880595 00000 п. 0003880652 00000 п. 0003880709 00000 п. 0003880850 00000 п. 0003880910 00000 п. 0003881033 00000 п. 0003881090 00000 п. 0003881233 00000 п. 0003881290 00000 н. 0003881457 00000 п. 0003881578 00000 п. 0003881636 00000 п. 0003881771 00000 п. 0003881832 00000 п. 0003881964 00000 н. 0003882025 00000 п. 0003882139 00000 п. 0003882199 00000 п. 0003882255 00000 п. 0003882312 00000 п. 0003882370 00000 п. 0003882492 00000 п. 0003882552 00000 п. 0003882685 00000 п. 0003882745 00000 п. 0003882872 00000 н. 0003882932 00000 н. 0003883044 00000 п. 0003883102 00000 п. 0003883228 00000 п. 0003883286 00000 п. 0003883426 00000 п. 0003883484 00000 п. 0003883614 00000 п. 0003883671 00000 п. 0003883785 00000 п. 0003883842 00000 п. 0003883899 00000 н. 0003883956 00000 п. 0003884108 00000 п. 0003884169 00000 п. 0003884308 00000 п. 0003884365 00000 п. 0003884499 00000 н. 0003884556 00000 п. 0003884683 00000 п. 0003884740 00000 п. 0003884883 00000 н. 0003884940 00000 п. 0003885078 00000 п. 0003885136 00000 п. 0003885260 00000 п. 0003885318 00000 п. 0003885432 00000 п. 0003885492 00000 п. 0003885552 00000 п. 0003885657 00000 п. 0003885714 00000 п. 0003885851 00000 п. 0003885907 00000 п. 0003886021 00000 п. 0003886077 00000 п. 0003886135 00000 п. 0003886191 00000 п. 0003886319 00000 п. 0003886380 00000 п. 0003886503 00000 п. 0003886564 00000 п. 0003886688 00000 п. 0003886748 00000 н. 0003886862 00000 п. 0003886920 00000 п. 0003887034 00000 п. 0003887091 00000 п. 0003887149 00000 п. 0003887206 00000 п. 0003887263 00000 п. 0003887376 00000 п. 0003887434 00000 п. 0003887564 00000 п. 0003887621 00000 п. 0003887778 00000 п. 0003887877 00000 п. 0003887938 00000 п. 0003888098 00000 п. 0003888224 00000 п. 0003888284 00000 п. 0003888445 00000 п. 0003888532 00000 п. 0003888593 00000 п. 0003888680 00000 п. 0003888806 00000 п. 0003888864 00000 п. 0003888999 00000 н. 0003889060 00000 п. 0003889227 00000 п. 0003889357 00000 п. 0003889415 00000 п. 0003889581 00000 п. 0003889701 00000 п. 0003889762 00000 п. 0003889912 00000 н. 0003889968 00000 н. 00038 00000 п. 00038

00000 п. 00038^{00000 п.
00038 00000 п.
00038 00000 п.
0003890623 00000 п.
0003890683 00000 п.
0003890741 00000 п.
0003890798 00000 н.
0003890943 00000 п.
0003891000 00000 н.
0003891061 00000 п.
0003891121 00000 п.
0003891222 00000 п.
0003891280 00000 п.
0003891381 00000 п.
0003891439 00000 п.
0003891540 00000 п.
0003891598 00000 п.
0003891699 00000 н.
0003891759 00000 п.
0003891860 00000 п.
0003891920 00000 н.
0003891980 00000 п.
0003892038 00000 п.
0003892096 00000 п.
0003892211 00000 п.
0003892271 00000 п.
0003892328 00000 п.
0003892385 00000 п.
0003892564 00000 н.
0003892669 00000 п.
0003892726 00000 п.
0003892878 00000 п.
0003893013 00000 п.
0003893071 00000 п.
0003893224 00000 п.
0003893354 00000 п.
0003893410 00000 п.
0003893538 00000 п.
0003893660 00000 п.
0003893717 00000 п.
0003893858 00000 п.
0003893918 00000 п.
0003894042 00000 п.
0003894100 00000 п.
0003894224 00000 п.
0003894280 00000 п.
0003894412 00000 п.
0003894469 00000 п.
0003894644 00000 п.
0003894769 00000 п. 0003894830 00000 н.
0003894937 00000 п.
0003895050 00000 п.
0003895108 00000 п.
0003895262 00000 п.
0003895363 00000 п.
0003895423 00000 п.
0003895595 00000 п.
0003895693 00000 п.
0003895751 00000 п.
0003895925 00000 п.
0003896026 00000 п.
0003896086 00000 п.
0003896205 00000 п.
0003896263 00000 п.
0003896377 00000 п.
0003896433 00000 п.
0003896551 00000 п.
0003896608 00000 п.
0003896721 00000 п.
0003896777 00000 п.
0003896908 00000 н.
0003896968 00000 п.
0003897140 00000 п.
0003897235 00000 н.
0003897295 00000 п.
0003897429 00000 п.
0003897486 00000 п.
0003897659 00000 п.
0003897761 00000 п.
0003897821 00000 п.
0003897941 00000 п.
0003898001 00000 п.
0003898159 00000 п.
0003898273 00000 п.
0003898334 00000 п.
0003898465 00000 п.
0003898526 00000 п.
0003898645 00000 п.
0003898705 00000 п.
0003898765 00000 п.
0003898823 00000 п.
0003898883 00000 н.
0003898941 00000 п.
0003898998 00000 п.
0003899056 00000 п.
0003899116 00000 п.
0003899177 00000 п. 0003899234 00000 п.
0003899292 00000 н.
0003899349 00000 п.
0003899406 00000 п.
0003899466 00000 п.
0003899523 00000 п.
0003899643 00000 н.
0003899701 00000 п.
0003899832 00000 н.
0003899889 00000 н.
00033 00000 н.
00034 00000 н.
00037 00000 п.
00037 00000 п.
00032 00000 п.
00032 00000 п.
00032 00000 п.
00030 00000 п.
00034 00000 п.
00034 00000 п.
00032 00000 п.
00030 00000 н.
00036 00000 п.
0003
6 00000 п.
00030 00000 н.
00031 00000 п.
0003^{0 00000 п.
0003^{0 00000 н.
00035 00000 п.
00035 00000 н.
00035 00000 п.
00034 00000 п.
00032 00000 п.
0003^{6 00000 п.
0003^{4 00000 н.
0003}}
8 00000 п.
00035 00000 п.
00033 00000 п.
00030 00000 п.
0003^{8 00000 п.
0003}
1 00000 п.
0003^{9 00000 н.
0003}0 00000 н.
0003}8 00000 н.
0003^{8 00000 п.
0003^{5 00000 п.
0003}9 00000 п.
00036 00000 п. 00032 00000 н.
0003^{9 00000 н.
0003^{8 00000 п.
0003^{9 00000 п.
0003}}}
7 00000 п.
0003}8 00000 н.
00032 00000 п.
0003^{3 00000 п.
0003^{8 00000 н.
00035 00000 п.
0003_{8 00000 н.
0003^{5 00000 п.
00034 00000 п.
00031 00000 п.
00038 00000 п.
0003
6 00000 п.
00034 00000 п.
00032 00000 п.
00033 00000 п.
0003
0 00000 п.
00035 00000 п.
00032 00000 п.
00039 00000 п.
00036 00000 п.
0003
0 00000 п.
00037 00000 п.
00035 00000 п.
0003
3 00000 п.
00030 00000 н.
00038 00000 п.
00036 00000 п.
00033 00000 п.
0003906160 00000 п.
0003906217 00000 н.
0003906339 00000 н.
0003906399 00000 н.
0003906518 00000 п.
0003906579 00000 н.
0003906707 00000 н.
0003906765 00000 н.
0003906880 00000 п.
0003906937 00000 п.
0003906994 00000 н.
0003907052 00000 н.
0003907175 00000 п.
0003907233 00000 н.
0003907354 00000 п.
0003907412 00000 п.
0003907535 00000 п. 0003907592 00000 п.
0003907708 00000 н.
0003907765 00000 п.
0003907880 00000 п.
0003907937 00000 п.
0003907994 00000 н.
0003908054 00000 п.
0003908169 00000 п.
0003908229 00000 п.
0003908289 00000 н.
0003908404 00000 п.
0003908464 00000 н.
0003908612 00000 п.
0003908780 00000 п.
0003908841 00000 н.
0003908936 00000 н.
0003909065 00000 н.
0003909123 00000 п.
0003909238 00000 п.
0003909295 00000 п.
0003909353 00000 п.
0003909410 00000 н.
0003909467 00000 н.
0003909524 00000 н.
0003909581 00000 п.
0003909822 00000 п.
0003909880 00000 п.
0003910085 00000 п.
0003910143 00000 п.
0003910264 00000 п.
0003910324 00000 п.
0003910468 00000 п.
0003910528 00000 п.
0003910647 00000 п.
0003910707 00000 п.
0003910831 00000 п.
0003910888 00000 п.
0003911003 00000 п.
0003911060 00000 п.
0003911117 00000 п.
0003911174 00000 п.
0003911310 00000 п.
0003911367 00000 п.
0003911487 00000 п.
0003911545 00000 п.
0003911676 00000 п.
0003911734 00000 п.
0003911858 00000 п. 0003911915 00000 п.
0003912056 00000 п.
0003912117 00000 п.
0003912242 00000 п.
0003912298 00000 п.
0003912415 00000 п.
0003912471 00000 п.
0003912527 00000 п.
0003912584 00000 п.
0003912705 00000 п.
0003912762 00000 п.
0003912878 00000 п.
0003912935 00000 п.
0003913052 00000 п.
0003913109 00000 п.
0003913223 00000 п.
0003913280 00000 п.
0003913397 00000 п.
0003913454 00000 п.
0003913511 00000 п.
0003913568 00000 п.
0003913688 00000 п.
0003913745 00000 п.
0003913890 00000 н.
0003913947 00000 п.
0003914146 00000 п.
0003914337 00000 п.
0003914395 00000 п.
0003914552 00000 п.
0003914750 00000 п.
0003914878 00000 п.
0003914934 00000 п.
0003915096 00000 п.
0003915153 00000 п.
0003915361 00000 п.
0003915489 00000 п.
0003915549 00000 п.
0003915679 00000 п.
0003915736 00000 п.
0003915863 00000 п.
0003915920 00000 н.
0003916056 00000 п.
0003916113 00000 п.
0003916230 00000 п.
0003916288 00000 п.
0003916349 00000 п.
0003916405 00000 п.
0003916463 00000 п. 0003916668 00000 п.
0003916726 00000 п.
0003916784 00000 п.
0003916841 00000 п.
0003916902 00000 н.
0003917025 00000 п.
0003917086 00000 п.
0003917241 00000 п.
0003917350 00000 п.
0003917410 00000 п.
0003917545 00000 п.
0003917605 00000 п.
0003917796 00000 п.
0003917920 00000 н.
0003917978 00000 п.
0003918112 00000 п.
0003918169 00000 п.
0003918314 00000 п.
0003918371 00000 п.
0003918538 00000 п.
0003918634 00000 п.
0003918691 00000 п.
0003918808 00000 п.
0003918866 00000 п.
0003918924 00000 п.
0003918982 00000 п.
0003919043 00000 п.
0003919103 00000 п.
0003919161 00000 п.
0003919353 00000 п.
0003919543 00000 п.
0003919603 00000 п.
0003919720 00000 п.
0003919780 00000 п.
0003919841 00000 п.
0003919901 00000 п.
0003919959 00000 п.
0003920080 00000 н.
0003920138 00000 н.
0003920251 00000 п.
0003920308 00000 п.
0003920436 00000 п.
0003920493 00000 п.
0003920614 00000 н.
0003920672 00000 н.
0003920802 00000 п.
0003920860 00000 п.
0003920981 00000 п. 0003921038 00000 п.
0003921155 00000 п.
0003921212 00000 п.
0003921269 00000 п.
0003921330 00000 п.
0003921456 00000 п.
0003921517 00000 п.
0003921646 00000 п.
0003921707 00000 п.
0003921834 00000 п.
0003921891 00000 п.
0003922020 00000 н.
0003922077 00000 н.
0003922207 00000 п.
0003922264 00000 п.
0003922390 00000 п.
0003922451 00000 п.
0003922567 00000 п.
0003922624 00000 п.
0003922681 00000 п.
0003922831 00000 п.
0003922892 00000 п.
0003923042 00000 п.
0003923194 00000 п.
0003923250 00000 п.
0003923413 00000 п.
0003923602 00000 п.
0003923663 00000 п.
0003923910 00000 п.
0003924027 00000 п.
0003924085 00000 п.
0003924146 00000 п.
0003924284 00000 п.
0003924342 00000 п.
0003924469 00000 п.
0003924527 00000 п.
0003924754 00000 п.
0003924811 00000 п.
0003925039 00000 п.
0003925096 00000 п.
0003925298 00000 п.
0003925355 00000 п.
0003925412 00000 п.
0003925470 00000 п.
0003925528 00000 п.
0003925585 00000 п.
0003925642 00000 п.
0003925799 00000 н. 0003925961 00000 п.
0003926017 00000 п.
0003926206 00000 н.
0003926364 00000 п.
0003926511 00000 п.
0003926568 00000 п.
0003926745 00000 п.
0003926920 00000 н.
0003926981 00000 п.
0003927143 00000 п.
0003927320 00000 н.
0003927426 00000 п.
0003927487 00000 н.
0003927604 00000 п.
0003927661 00000 п.
0003927722 00000 н.
0003927779 00000 п.
0003927967 00000 н.
0003928025 00000 п.
0003928209 00000 п.
0003928266 00000 п.
0003928323 00000 п.
0003928379 00000 п.
0003928436 00000 п.
0003928492 00000 п.
0003928549 00000 п.
0003928606 00000 п.
0003928731 00000 п.
0003928792 00000 п.
0003928917 00000 п.
0003928977 00000 н.
0003929094 00000 н.
0003929154 00000 п.
0003929214 00000 п.
0003929271 00000 п.
0003929396 00000 п.
0003929454 00000 п.
0003929596 00000 п.
0003929656 00000 п.
0003929789 00000 н.
0003929847 00000 н.
0003929973 00000 п.
0003930034 00000 п.
0003930150 00000 п.
0003930210 00000 п.
0003930267 00000 п.
0003930325 00000 п.
0003930438 00000 п. 0003930496 00000 п.
0003930622 00000 п.
0003930679 00000 п.
0003930796 00000 п.
0003930853 00000 п.
0003930910 00000 п.
0003930967 00000 п.
0003931080 00000 п.
0003931140 00000 п.
0003931303 00000 п.
0003931448 00000 п.
0003931506 00000 п.
0003931649 00000 п.
0003931766 00000 п.
0003931826 00000 п.
0003931884 00000 п.
0003931941 00000 п.
0003932001 00000 п.
0003932059 00000 н.
0003932190 00000 п.
0003932247 00000 н.
0003932370 00000 п.
0003932428 00000 п.
0003932579 00000 н.
0003932639 00000 п.
0003932763 00000 н.
0003932821 00000 н.
0003932944 00000 н.
0003933001 00000 п.
0003933144 00000 п.
0003933201 00000 п.
0003933346 00000 п.
0003933404 00000 п.
0003933555 00000 п.
0003933612 00000 п.
0003933803 00000 п.
0003933860 00000 п.
0003934012 00000 п.
0003934069 00000 п.
0003934233 00000 п.
0003934289 00000 п.
0003934413 00000 п.
0003934470 00000 п.
0003934615 00000 п.
0003934672 00000 п.
0003934802 00000 п.
0003934860 00000 п.
0003934986 00000 п.
0003935043 00000 п.
0003935198 00000 п.
0003935259 00000 п.
0003935404 00000 п.
0003935464 00000 п.
0003935597 00000 п.
0003935657 00000 п.
0003935783 00000 п.
0003935844 00000 п.
0003935958 00000 п.
0003936019 00000 п.
0003936146 00000 п.
0003936203 00000 п.
0003936428 00000 п.
0003936650 00000 п.
0003936708 00000 п.
0003936891 00000 п.
0003937117 00000 п.
0003937178 00000 п.
0003937340 00000 п.
0003937474 00000 п.
0003937535 00000 п.
0003937652 00000 п.
0003937709 00000 п.
0003937767 00000 п.
0003937968 00000 п.
0003938026 00000 п.
0003938263 00000 п.
0003938321 00000 п.
0003938470 00000 п.
0003938528 00000 п.
0003938589 00000 п.
0003938646 00000 п.
0003938706 00000 п.
0003938763 00000 п.
0003938942 00000 п.
0003939082 00000 п.
0003939140 00000 п.
0003939339 00000 н.
0003939490 00000 н.
0003939697 00000 п.
0003939758 00000 п.
0003939901 00000 н.
0003940064 00000 н.
0003940176 00000 п.
0003940234 00000 п.
0003940351 00000 п.
0003940412 00000 п.
0003940468 00000 п.
0003940526 00000 п.
0003940777 00000 п.
0003940835 00000 п.
0003941064 00000 п.
0003941121 00000 п.
0003941348 00000 н.
0003941405 00000 п.
0003941683 00000 п.
0003941740 00000 п.
0003941963 00000 н.
0003942020 00000 н.
0003942205 00000 п.
0003942263 00000 п.
0003942468 00000 н.
0003942526 00000 п.
0003942673 00000 п.
0003942731 00000 н.
0003942792 00000 н.
0003942849 00000 п.
0003943004 00000 п.
0003943062 00000 п.
0003943120 00000 н.
0003943180 00000 п.
0003943241 00000 п.
0003943391 00000 п.
0003943530 00000 п.
0003943590 00000 п.
0003943716 00000 п.
0003943776 00000 п.
0003943893 00000 п.
0003943953 00000 п.
0003944014 00000 п.
0003944071 00000 п.
0003944129 00000 п.
0003944238 00000 п.
0003944296 00000 н.
0003944409 00000 п.
0003944466 00000 п.
0003944592 00000 п.
0003944649 00000 п.
0003944766 00000 н.
0003944823 00000 п.
0003944880 00000 п.
0003944938 00000 н.
0003945120 00000 п.
0003945246 00000 п.
0003945306 00000 п.
0003945453 00000 п.
0003945509 00000 п.
0003945626 00000 п.
0003945683 00000 п.
0003945741 00000 п.
0003945798 00000 п.
0003945858 00000 п.
0003945984 00000 п.
0003946044 00000 п.
0003946175 00000 п.
0003946236 00000 п.
0003946439 00000 п.
0003946585 00000 п.
0003946641 00000 п.
0003946762 00000 п.
0003946818 00000 п.
0003946954 00000 п.
0003947012 00000 п.
0003947144 00000 п.
0003947202 00000 н.
0003947332 00000 п.
0003947390 00000 н.
0003947555 00000 п.
0003947656 00000 п.
0003947713 00000 п.
0003947844 00000 п.
0003947901 00000 п.
0003948018 00000 п.
0003948075 00000 п.
0003948132 00000 н.
0003948192 00000 н.
0003948249 00000 п.
0003948310 00000 п.
0003948460 00000 п.
0003948646 00000 н.
0003948704 00000 п.
0003948820 00000 н.
0003948946 00000 н.
0003949003 00000 п.
0003949120 00000 н.
0003949176 00000 п.
0003949237 00000 п.
0003949298 00000 п.
0003949354 00000 п.
0003949412 00000 п.
0003949562 00000 п.
0003949747 00000 п.
0003949804 00000 п.
0003949931 00000 н.
0003950057 00000 н.
0003950118 00000 п.
0003950235 00000 п.
0003950292 00000 п.
0003950349 00000 п.
0003950502 00000 п.
0003950560 00000 п.
0003950717 00000 п.
0003950775 00000 п.
0003950932 00000 н.
0003950988 00000 п.
0003951169 00000 п.
0003951225 00000 п.
0003951283 00000 п.
0003951340 00000 п.
0003951396 00000 п.
0003951505 00000 н.
0003951562 00000 п.
0003951712 00000 п.
0003951839 00000 п.
0003951896 00000 п.
0003952022 00000 н.
0003952079 00000 п.
0003952196 00000 п.
0003952253 00000 п.
0003952311 00000 п.
0003952368 00000 п.
0003952428 00000 п.
0003952554 00000 п.
0003952614 00000 п.
0003952731 00000 н.
0003952791 00000 п.
0003952851 00000 п.
0003952912 00000 п.
0003953025 00000 п.
0003953082 00000 п.
0003953208 00000 п.
0003953266 00000 п.
0003953383 00000 п.
0003953443 00000 п.
0003953503 00000 п.
0003953560 00000 п.
0003953673 00000 п.
0003953730 00000 п.
0003953856 00000 п.
0003953913 00000 п.
0003954030 00000 п.
0003954087 00000 п.
0003954144 00000 п.
0003954201 00000 п.
0003954288 00000 п.
0003954345 00000 п.
0003954434 00000 п.
0003954491 00000 п.
0003954580 00000 п.
0003954637 00000 п.
0003954726 00000 п.
0003954783 00000 п.
0003954871 00000 н.
0003954928 00000 п.
0003955017 00000 п.
0003955074 00000 п.
0003955163 00000 п.
0003955220 00000 п.
0003955308 00000 п.
0003955365 00000 н.
0003955453 00000 п.
0003955510 00000 п.
0003955599 00000 п.
0003955656 00000 п.
0003955744 00000 п.
0003955801 00000 п.
0003955889 00000 п.
0003955946 00000 п.
0003956035 00000 п.
0003956092 00000 п.
0003956181 00000 п.
0003956238 00000 п.
0003956327 00000 п.
0003956384 00000 п.
0003956472 00000 н.
0003956529 00000 п.
0003956618 00000 п.
0003956675 00000 п.
0003956732 00000 п.
0003956792 00000 п.
0003956853 00000 п.
0003957026 00000 п.
0003957158 00000 п.
0003957219 00000 п.
0003957345 00000 п.
0003957402 00000 п.
0003957515 00000 п.
0003957572 00000 п.
0003957683 00000 п.
0003957740 00000 п.
0003957801 00000 п.
0003957858 00000 п.
0003957970 00000 п.
0003958028 00000 п.
0003958167 00000 п.
0003958225 00000 п.
0003958348 00000 п.
0003958408 00000 п.
0003958516 00000 п.
0003958576 00000 п.
0003958634 00000 п.
0003958694 00000 п.
0003958755 00000 п.
0003958895 00000 п.
0003958956 00000 п.
0003959090 00000 н.
0003959151 00000 п.
0003959289 00000 п.
0003959346 00000 п.
0003959505 00000 п.
0003959644 00000 п.
0003959701 00000 п.
0003959803 00000 п.
0003959918 00000 п.
0003959975 00000 п.
0003960031 00000 п.
0003960178 00000 п.
0003960236 00000 п.
0003960294 00000 п.
0003960351 00000 п.
0003960438 00000 п.
0003960496 00000 п.
0003960606 00000 п.
0003960723 00000 п.
0003960779 00000 п.
0003960839 00000 п.
0003960940 00000 п.
0003961001 00000 п.
0003961058 00000 п.
0003961114 00000 п.
0003961174 00000 п.
0003961329 00000 п.
0003961389 00000 п.
0003961447 00000 п.
0003961578 00000 п.
0003961638 00000 п.
0003961696 00000 п.
0000024136 00000 п.
трейлер
] >>
startxref
0
%% EOF
8828 0 obj> поток
x | m`SUIN,! i6C0XC̜iE5-
& PB
Разработанные эритроциты в качестве готового аллогенного противоопухолевого терапевтического средства
Клеточные линии и мыши
Клеточная линия мышиной меланомы B16-F10 (CRL-6475 ^™), клеточная линия мышиной лимфомы EL4 ( TIB-39 ^™) и EG7.OVA (CRL-2113 ^™) и линия клеток лейкемии человека K562 (CCL-243 ^™) были получены из Американской коллекции типовых культур (ATCC ^®) и культивированы в соответствии с рекомендациями ATCC. Линия эмбриональных клеток почек человека Lenti-X ^™ 293T (Кат. № 632180) была получена от Takara Bio USA, Inc. (Калифорния, США) и культивирована в соответствии с рекомендациями поставщика. Линия клеток эмбриональной почки человека Expi293F ^™ (каталожный номер A14527) была получена от Thermo Fisher Scientific ™ (Массачусетс, США) и культивирована в соответствии с инструкциями производителя.
Женский C57BL / 6J, Pep Boy (B6.SJL-Ptprca Pepcb / BoyJ), OT-1 [C57BL / 6 Tg (TcraTcrb) 1100Mjb / J] и pmel-1 [B6.Cg-Thy1a / Cy Tg (TcraTcrb )] мышей были получены из The Jackson Laboratory (ME, США). Мышей содержали в определенных условиях, свободных от патогенов, в учреждении, аккредитованном Ассоциацией по оценке и аккредитации Международной организации по уходу за лабораторными животными (AAALAC). Протоколы исследования были рассмотрены и одобрены Лабораторией Чарльза (CRL; Массачусетс, США) Комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) или доклинической службой Avastus (Массачусетс, США) IACUC.В обоих учреждениях мышей содержали при цикле 12 часов света / 12 часов темноты. Комнатная температура поддерживалась в диапазоне 73 ° F + / -2 ° F (CRL) или от 70 ° F до 75 ° F (Avastus). Уровни влажности поддерживались между 30–70% (CRL) или 35–55% (Avastus).
Конструирование продукции и определение экспрессии RBC
Ген, кодирующий интересующий белок, клонировали в сайт множественного клонирования лентивирусного вектора под контролем промоторной последовательности вируса стволовых клеток мыши.Лентивирус продуцировали в клетках Lenti-X 293T, а титр определяли в клетках K562. Гемопоэтические клетки-предшественники CD34 ⁺ человека, полученные от нормальных человеческих доноров, собранные с одобрения и информированного согласия Advarra Institutional Review Board (IRB), были приобретены в замороженном виде у HemaCare ^® Inc. (Калифорния, США). Гемопоэтические клетки-предшественники CD34 ⁺ человека первоначально культивировали в среде для роста стволовых клеток (CellGenix ^® Inc., NH, США) с добавлением StemSpan ™ CC100 (STEMCELL Technologies, Inc., Британская Колумбия, Канада). Затем клетки культивировали в среде Дульбекко, модифицированной Исков (IMDM, Thermo Fisher Scientific), включая 10 мкг / мл рекомбинантного человеческого инсулина (Sigma-Aldrich ^®, Inc., Миссури, США), 200 мкг / мл голо-человеческого трансферрина. (BBI Solutions, ME, США), 1 нг / мл рекомбинантного человеческого ИЛ-3 (PeproTech, Inc., Нью-Джерси, США), 100 нг / мл фактора стволовых клеток (PeproTech, Inc.) и 50 нг / мл эритропоэтина ( PeproTech, Inc.). Затем клетки культивировали в IMDM, включая 10 мкг / мл рекомбинантного человеческого инсулина, 200 мкг / мл голо-человеческого трансферрина, 10 нг / мл фактора стволовых клеток и 16.7 нг / мл эритропоэтина. Наконец, клетки культивировали в IMDM, включая 10 мкг / мл рекомбинантного человеческого инсулина, 1 мг / мл голо-человеческого трансферрина и 50 нг / мл эритропоэтина. Клетки культивировали при 37 ° C в присутствии 5% CO ₂. Клетки-предшественники эритроидов трансдуцировали лентивирусными векторами для экспрессии представляющих интерес генов. Следующие антитела были использованы для определения экспрессии на поверхности сконструированных эритроцитов: анти-H-2K ^b -OVA (1: 100, 25-D1.16, BioLegend ^®, Калифорния, США), антимышиное 4 -1BBL (1: 100, TKS-1, BioLegend), антимышиный IL-15Ra (1:50, DNT15Ra, Thermo Fisher Scientific), анти-Flag метка (1: 100, L5, BioLegend) для мышиного IL-7 и IL-12, античеловеческий β2M (1:50, 2M2, BioLegend), античеловеческий 4-1BBL (1: 100, 5F4, BioLegend) и античеловеческий IL-12 p40 / p70 (1:50, C11.5, BD Biosciences, Калифорния, США). Клетки промывали и анализировали на проточном цитометре NovoCyte ^® 3000 (Acea Biosciences ^™, Inc., Калифорния, США). Данные проточной цитометрии анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo ^™ (BD Biosciences). Все запросы на материалы будут незамедлительно рассмотрены Rubius Therapeutics, чтобы убедиться, что запрос является предметом каких-либо обязательств в отношении интеллектуальной собственности или конфиденциальности. После проверки материалы могут быть переданы в соответствии с соглашением о передаче материалов.
Препарат суррогатного mRBC-aAPC мыши
Производство mRBC-H-2K ^b -SIINFEKL (OVA) -4-1BBL, mRBC-OVA-4-1BBL-IL-7, mRBC-OVA-4-1BBL- IL-12 и mRBC-OVA-4-1BBL-IL-15 были основаны на методе, разработанном с использованием принципов биоконъюгации, обычно называемом клик-химией ²⁴. В этом методе используется специфическая реакция между азидной группой, обеспечиваемой сульфо-NHS эфиром 6-азидогексановой кислоты (Азидо, Click Chemistry Tools, LLC, Аризона, США) и фрагментом группы дибензоциклооктина (DBCO) (Click Chemistry Tools, LLC) или метилтетразин (MTZ, Click Chemistry Tools, LLC) и фрагмент транс-циклооктеновой (TCO) группы (Click Chemistry Tools, LLC) для создания мЭРК, конъюгированных с рекомбинантными белками.Рекомбинантный H-2K ^b -SIINFEKL (OVA), мышиный 4-1BBL (4-1BBL), Fc-мышиный IL-7 (Fc-mIL-7), Fc-мышиный IL-12 (Fc-mIL-12) , и слияние Fc-человеческого IL-15 / IL15Rα (Fc-hIL-15) были продуцированы в клетках Expi293F и очищены из супернатанта клеточной культуры с помощью быстрой жидкостной хроматографии белков и аффинной хроматографии с иммобилизованными ионами металлов с использованием ÄKTA ^™ Pure 25 или ÄKTA Хроматографическая система ^™ Avant 150 (Cytiva, Массачусетс, США) и смола Ni-Sepharose ^® Excel (Cytiva) или аффинная очистка с протеином A (смола для очистки антител MabSelect SuRe ^™, Cytiva).Были определены чистота и профиль агрегации, и белки были дополнительно очищены с использованием HiLoad ^® 26/600 Superdex ^® 200 смолы для приготовления препарата (Cytiva), если необходимо. Уровни эндотоксина в белковых препаратах определяли с помощью анализа лизата амебоцитов Limulus (картриджи Charles River Endosafe ^®, Charles River Laboratories) и были низкими (<10 EU / мг). После получения и очистки OVA, m4-1BBL, Fc-mIL-7 и Fc-mIL-12 конъюгировали с фрагментом группы DBCO, который реагирует с группой азидо в реакции щелчка.Fc-hIL-15 конъюгировали с остатком группы TCO, который реагирует с группой MTZ в реакции щелчка. Избыток реагента для мечения удаляли с помощью смолы для тонкой гель-фильтрации Sephadex ^™ G-25 (Cytiva). Все запросы на материалы будут незамедлительно рассмотрены Rubius Therapeutics, чтобы убедиться, что запрос является предметом каких-либо обязательств в отношении интеллектуальной собственности или конфиденциальности. После проверки материалы могут быть переданы в соответствии с соглашением о передаче материалов.
Кровь собирали с помощью терминальной сердечной пункции у мышей и фильтровали через шприцевые фильтры для белых кровяных клеток Acrodisc ^® PSF 25 мм (Pall Corporation, Нью-Йорк, США) для удаления лейкоцитов.Затем клетки подсчитывали и метили азидо или азидо вместе с MTZ. Химическая конъюгация белков с клетками была достигнута во время инкубации в течение ночи. Конъюгированные клетки тщательно промывали перед составлением и окрашивали следующими антителами для оценки эффективности конъюгации: анти-H-2K ^b -OVA (1: 100, 25-D1.16, BioLegend), антимышиное 4-1BBL (1 : 100, TKS-1, BioLegend) или антимышиный IgG2a (1: 100, RMG2a-62, BioLegend) для обнаружения мутантной метки Fc на IL-7, IL-12 или IL-15.
Для создания mRBC-H-2D ^b -gp100-4-1BBL-IL-12 азидомеченные mRBC инкубировали с DBCO-IL-12 и DBCO-4-1BBL в течение ночи с последующей инкубацией с водорастворимым биотином. DBCO (Click Chemistry Tools, LLC). Число копий биотина определяли с использованием гранул против IgG мыши Quantum ^™ Simply Cellular ^® после окрашивания антибиотином (1: 100, BK-1/39, Thermo Fisher Scientific). Белок NeutrAvidin ^™ (Thermo Fisher Scientific) инкубировали с mRBC-4-1BBL-IL-12-биотином при молярном соотношении белка NeutrAvidin и биотина 1: 1.Затем добавляли мономер биотин-H-2D ^b -gp100 (MBL International Corporation, Массачусетс, США) для связывания с белком NeutrAvidin в молярном соотношении 1: 1. Эффективность конъюгации определяли после обширных промывок и окрашивания антителом против H-2K ^b / H-2D ^b (1: 100, 28-8-6, BioLegend).
In vitro CD8
⁺ Анализ увеличения и активации Т-клеток CD8 ⁺ Т-клетки были выделены из селезенки и лимфатических узлов трансгенных мышей OT-1 или pmel-1 с использованием набора Mouse CD8 + T Cell Isolation Kit (Miltenyi Biotec, Inc., Бергиш-Гладбах, Германия). Выделенные CD8 ⁺ Т-клетки метили 1 мкМ фиолетового красителя CellTrace ^™ (Thermo Fisher Scientific) при 37 ° C в течение 6 минут. После гашения ледяной фетальной бычьей сывороткой (FBS, Thermo Fisher Scientific) и обширной промывки меченые клетки OT-1 или pmel-1 ресуспендировали в аналитической среде и помещали в каждую лунку 96-луночного планшета (Corning, PA. , СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Среда для анализа была приготовлена с использованием среды Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 с 10% FBS, 100 ед. / Мл пенициллина (Thermo Fisher Scientific), 100 мкг / мл стрептомицина (Thermo Fisher Scientific), 100 мкМ заменимых аминокислот (Thermo Fisher Scientific), 1 мМ MEM пируват натрия (Thermo Fisher Scientific), 10 мМ 4- (2-гидроксиэтил) -1-пиперазинэтансульфоновая кислота (HEPES, Thermo Fisher Scientific) и 0.05 мМ β-меркаптоэтанол (Sigma-Aldrich, Inc.).
Клетки RCT-CTRL, mRBC-CTRL, RCT-OVA-4-1BBL, RCT-OVA-4-1BBL-IL-12 и mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12 подсчитывали, промывали, ресуспендировали в буфер для анализа и высевают в лунки, содержащие клетки ОТ-1 или клетки pmel-1. Гранулы CD3 / CD28 мышиного T-Activator Dynabeads ^® (Thermo Fisher Scientific) промывали, ресуспендировали в буфере для анализа и инкубировали с клетками pmel-1 в качестве контроля. Планшеты помещали в увлажненный инкубатор при 37 ° C. Через 4 дня собирали супернатант клеточной культуры и измеряли уровень секретируемого IFNγ с использованием набора гранул цитокинов LEGENDplex ^™ MU Th2 / Th3 Panel (8-plex) (BioLegend) в соответствии с инструкциями производителя.Клетки обрабатывали для проточной цитометрии через 3-4 дня совместного культивирования.
Анализ уничтожения опухолей
Для анализа уничтожения опухолей клетки OT-1 культивировали 1:10 с RCT-OVA-4-1BBL, RCT-OVA-4-1BBL-IL-7, RCT-OVA-4-1BBL -IL-12 или RCT-OVA-4-1BBL-IL-15 в течение 3 дней. Затем клетки ОТ-1 собирали и обрабатывали лизирующим буфером хлорида аммония и калия (ACK) (Thermo Fisher Scientific). Приблизительно 1 × 10 ⁴ CellTrace Far Red, меченный красителем (Thermo Fisher Scientific) EL4 (контрольная мишень) или EG7.Затем клетки OVA (мишени) инкубировали с размноженными клетками OT-1 (эффекторными клетками) при соотношении эффекторных клеток к мишеням 5: 1, 2: 1, 1: 1, 0,5: 1 или 0: 1. После 22-часового инкубационного периода клетки окрашивали фиксируемым красителем аква-мертвых клеток LIVE / DEAD ^™ (Thermo Fisher Scientific) и фиксировали 2% параформальдегидом (Thermo Fisher Scientific) для подсчета живых клеток-мишеней (краситель CellTrace Far Red ^{). +}) в каждую скважину.
Адоптивный перенос Т-клеток мышам
Набор для выделения CD8 + T-клеток мыши использовали для выделения Т-клеток CD8 ⁺ из селезенки и лимфатических узлов трансгенных мышей OT-1 или pmel-1 CD8.Затем выделенные CD8 ⁺ Т-клетки метили 1 мкМ красителя CellTrace Violet при 37 ° C в течение 10 мин. Для исследования биораспределения изолированные клетки ОТ-1 метили 5 мкМ красителя CellTrace Yellow при 37 ° C в течение 8 мин. После гашения ледяной FBS и обширной промывки от 1 × 10 ⁶ до 2 × 10 ⁶ меченых Т-клеток вводили внутривенно мышам за несколько часов до первой дозы mRBC-aAPC. Антиген-специфические донорские Т-клетки отслеживали у мышей-реципиентов с использованием различных конгенных маркеров (CD45.2 для OT-1 у получателей Pep Boy CD45.1; CD90.1 для pmel-1 у реципиентов C57BL / 6J CD90.2).
Модель подкожной опухоли EG7.OVA и EL4
Мышам Pep Boy (CD45.1 B6) вводили подкожно в бок 2 × 10 ⁶ EG7.OVA в соотношении 1: 1 в среде RPMI 1640 и Matrigel ^{. ® Матрица} (Corning). Рост опухоли измеряли каждые 2–3 дня. Объем опухоли определяли как длина (мм) × ширина (² мм) × 0,5. Мышей, несущих опухоль, были рандомизированы, когда средний объем опухоли достигал 150–230 мм ³, и всем группам вводили наивные клетки CD8 ⁺ OT-1 не позднее, чем через 1 день после рандомизации путем инъекции в хвостовую вену.Через несколько часов после инъекции Т-клеток мышам внутривенно вводили PBS (Thermo Fisher Scientific), mRBC-CTRL или mRBC-aAPC в 200 мкл PBS каждые 3-4 дня. Для сравнения с терапевтическими вакцинами группа мышей получала 40 нМ OVA _241-270 ⁵⁸ (AnaSpec ^®, Inc., Калифорния, США), эмульгированного в IFA (Sigma-Aldrich). В исследованиях без переноса ОТ-1 лечение mRBC-CTRL или mRBC-aAPC начинали через 1 день после подкожной инъекции 2 × 10 ⁶ клеток EG7.OVA мышам C57BL / 6.Для эксперимента по повторному заражению опухолью вылеченным мышам вводили подкожно в альтернативный бок 2 × 10 ⁶ клеток EG7.OVA в соотношении 1: 1 в среде RPMI 1640 и матриксе Matrigel. Мышам, излеченным после повторного заражения опухолью EG7.OVA, затем вводили подкожно в плечо 1 × 10 ⁵ EL4 в соотношении 1: 1 в среде RPMI 1640 и матриксе Matrigel. Мышей умерщвляли после достижения объема опухоли более 2000 мм ³.
Модель метастазов в легкие B16-F10
Мышам C57BL / 6J внутривенно вводили 1 × 10 ⁵ B16-F10 в 200 мкл среды RPMI 1640 в день 0.На следующий день всем группам внутривенно вводили 2 × 10 ⁶ клеток pmel-1 с последующим внутривенным введением mRBC-CTRL или mRBC-gp100-4-1BBL-IL-12 на 1, 4 и 8 дни. группа мышей получала 100 мкг анти-PD-1 ( InVivo Mab ™ антимышиный клон PD-1 RMP1-14, Bio X Cell, Inc., Нью-Хэмпшир, США) внутрибрюшинно на 1, 4 и 8 дни дополнительно к лечению mRBC-CTRL. На 14-й день животных умерщвляли. Легкие перфузировали ледяным PBS через правое предсердие и удаляли, а доли отделяли маленькими щипцами в чашке Петри.Левая доля была немедленно обработана для фенотипирования иммунных клеток. Остальные четыре доли фиксировали в 10% забуференном формалине (VWR International, LLC, PA, USA) на 24 часа. Метастазы визуализировались и количественно оценивались под микроскопом оператором, не знающим о лечении. Все мыши, нуждающиеся в эвтаназии или найденные мертвыми по причинам, отличным от опухолевой нагрузки, были исключены из анализа.
Иммунопрофилирование мышей и проточная цитометрия
Суспензии единичных клеток были приготовлены из крови, селезенки, лимфатических узлов, легких и опухолей.Кровь собирали путем поднижнечелюстного кровотечения или сердечной пункции в пробирки для забора крови BD Microtainer ^® с K ₂ EDTA (BD Biosciences), и пробирки хранили на льду до анализа. Для проточной цитометрии 50 мкл крови смешивали с 550 мкл буфера для лизиса эритроцитов Alfa Aesar ^™ для эритроцитов мыши (Thermo Fisher Scientific) в 96-луночном планшете с глубокими лунками (VWR International, LLC) и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин для лизирования эритроцитов. Все клетки переносили в 96-луночный планшет с круглым дном (Corning) после осаждения для окрашивания.Опухоли или легкие переваривали в мягких MACS ^™ C-пробирках (Miltenyi Biotec, Inc.) с использованием набора для диссоциации опухоли мыши или набора для диссоциации легких мыши (Miltenyi Biotec, Inc.), соответственно. Суспензии клеток получали с использованием прибора бережного действия MACS Octo Dissociator with Heaters (Miltenyi Biotec, Inc.) в соответствии с инструкциями производителя. Затем переваренную ткань фильтровали через сетчатый фильтр для клеток 70 мкм, промывали и ресуспендировали в PBS, содержащем 0,1% бычьего сывороточного альбумина (PBSA; Cytiva) для окрашивания.
Для проточной цитометрии клетки ресуспендировали в окрашивающей смеси, содержащей Fc-блок (1: 100 от 1 мг / мл рабочего раствора, антимышиный CD16 / 32, клон 2.4G2, Bio X Cell, Inc.), непосредственно конъюгированные антитела. и LIVE / DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain или краситель Zombie NIR ^™ (BioLegend) в PBSA и окрашивали в течение 30 минут на льду. Для обнаружения эндогенных OVA-специфических Т-клеток путем окрашивания тетрамером клетки инкубировали с тетрамером H-2K ^b -SIINFEKL (1:20, MBL International Corporation) с блоком Fc при комнатной температуре в течение 10 минут перед окрашиванием поверхности.Образцы дважды промывали PBSA и ресуспендировали в PBSA для проточной цитометрии. Для измерения внутриклеточной экспрессии коктейль eBioscience ™ Cell Stimulation Cocktail (Thermo Fisher Scientific), содержащий форбол 12-миристат 13-ацетат (PMA), иономицин, брефельдин A и моненсин, инкубировали с суспензиями одноклеточных опухолей в течение 3–4 часов. при 37 ° С. После инкубации клетки промывали, окрашивали поверхность, фиксировали и повышали проницаемость с использованием набора буферов для окрашивания eBioscience Foxp3 / транскрипционного фактора (Thermo Fisher Scientific) перед окрашиванием на экспрессию внутриклеточных или внутриядерных маркеров в соответствии с инструкциями производителя.
Следующие антитела, конъюгированные с флуорохромом, были приобретены у BioLegend или BD Biosciences: анти-CD44 (1: 200, 1M7), анти-CD62L (1: 200, MEL-14), анти-CD45.2 (1: 200, 104), анти-CD8 (1: 200, 53-6.7), анти-CD122 (1: 100, TM-β1), анти-IFNγ (1: 100, XMG1.2), анти-гранзим B (1: 100 , GB11), анти-CD45.1 (1: 200, A20), анти-CD90.1 (1: 200, OX-7), анти-CD90.2 (1: 200, 53-2.1), анти-Ki67 (1: 200, B56), анти-TNFα (1: 100, MP6-XT22), анти-IL-2 (1: 100, JES6-5h5), анти-NK1.1 (1: 200, PK136), анти-IL-2 (1: 100, JES6-5h5), анти-NK1.1 (1: 200, PK136), -CD3 (1: 200, 145-2C11), анти-CD4 (1: 200, GK1.5), анти-Foxp3 (1: 100, FJK-16s), анти-IA ^b (1: 400, AF6-120.1), анти-CD25 (1: 100, PC61), анти-F4 / 80 (1 : 100, T45-2342), анти-CD11b (1: 200, M1 / 70), анти-Ly6C (1: 200, HK1.4) и анти-Ly6G (1: 200, 1A8). Данные проточной цитометрии были получены на проточном цитометре BD LSRFortessa ^™ (BD Biosciences) с программным обеспечением BD FACSDiva ™ v8.0.2 или на проточном цитометре Novocyte 3000 с NovoExpress 1.4.1 и проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo 10.5.3.
Секвенирование вариабельной бета-цепи TCR
Геномная ДНК (гДНК) была извлечена из 50–60 мкл антикоагулированной крови через 5–10 минут после переноса ОТ-1 (до лечения или перед повторным тестированием) или после лечения / повторного исследования опухоли с использованием DNeasy ^® Набор для крови и тканей (Qiagen ^® Inc., MD, США) согласно инструкциям производителя. Суспензии единичных клеток экстрагировали из целых опухолей, аналогично обработке тканей для проточной цитометрии, описанной выше, и гДНК экстрагировали из одной четверти суспензий одноклеточных опухолей с использованием набора DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen Inc.) в соответствии с инструкции производителя. Иммуносеквенирование участков CDR3 цепей мышиного TCRβ выполняли с использованием анализа иммунного SEQ ^® (Adaptive Biotechnologies Corporation, Сиэтл, Вашингтон).Вкратце, экстрагированная ДНК была амплифицирована с помощью контролируемой смещением мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим высокопроизводительным секвенированием. Затем последовательности были свернуты и отфильтрованы, чтобы идентифицировать и количественно оценить абсолютное содержание каждой уникальной области TCRβ CDR3 для дальнейшего анализа с помощью анализатора Adaptive ImmunoSEQ v3.0 ^59,60,61.
Измерения безопасности
Мышам Pep Boy (CD45.1 B6), которым вводили 1 × 10 ⁶ наивных клеток OT-1 или оставленным без лечения в день 0, вводили 1 × 10 ⁹ mRBC- CTRL или титрование дозы mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12 (1 × 10 ⁹, 3 × 10 ⁸) в дни 0, 4, 7 и 11.Одна мышь, обнаруженная мертвой из-за неопределенного отношения к лечению, была исключена из анализа. Изменения массы тела по сравнению с днем 0 определяли каждый день, кроме выходных. Вес селезенки и вес печени определяли на 12 и 25 дни. Уровни IFNγ, IL-10, TNFα, IL-6 и IL-1β в плазме определяли с использованием мультиплексного анализа LEGENDplex Mouse Inflamssment Panel (13-plex) (BioLegend). Уровни сывороточной АЛТ, аспартаттрансаминазы (AST) и щелочной фосфатазы (ЩФ) на 12 и 25 дни определяли с использованием химического анализатора Beckman Coulter ^™ AU680 (Beckman Coulter, Inc., Калифорния, США). Гематокрит, гемоглобин и уровни тромбоцитов на 12 и 25 день определяли в образцах цельной крови с помощью автоматического гематологического анализатора Sysmex XT-2000iV ™ (Sysmex, Norderstedt, Германия). Для определения воспаления печени и инфильтрации макрофагов фиксированные формалином образцы печени, собранные на 12 и 25 дни, заливали парафином, делали срезы и окрашивали гематоксилином и эозином (H&E) или антителами против мышиных F4 / 80 (1: 100, клон BM8. , Thermo Fisher Scientific). Слайды, окрашенные H & E, оценивались вслепую сертифицированным патологоанатомом.Десять мощных полей (HPF) были выбраны случайным образом, и периваскулярное воспаление печени оценивалось следующим образом: 0 = воспаление отсутствует, 1 = минимальное воспаление, 2 = легкое воспаление, 3 = умеренное воспаление и 4 = сильное воспаление. Единый балл был выставлен на основе 10 HPF. Эти баллы были проанализированы с помощью непараметрического теста Краская – Уоллиса. Инфильтрацию макрофагами печени количественно оценивали с использованием программного обеспечения для анализа изображений HALO ^™ V2.2.1870.44 с модулем High Plex FL V2.0 (Indica Labs, Нью-Мексико, США) с определенными пороговыми значениями, установленными для идентификации F4 / 80-положительных клеток, присутствующих в срезе ткани.
Анализы биораспределения
Клетки mRBC-CTRL или mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12 инкубировали с 10 мкМ красителя CellTrace Far Red при комнатной температуре в течение 6 минут с последующим гашением FBS и обширной промывкой перед дозированием. Мышам Pep Boy (CD45.1 B6) вводили 1 × 10 ⁹ меченных красителем mRBC-CTRL CellTrace или mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12. Через 1 или 17 часов после введения дозы mRBC-aAPC мышей умерщвляли и перфузировали PBS.Одна четверть селезенки, весь нижнечелюстной лимфатический узел (ЛУ), один из мезентериальных ЛУ, нижняя половина левой доли легкого, 5-миллиметровая часть печени ³, нижняя половина сердца, 5 -мм ³ часть головного мозга, 5-миллиметровая часть ³ толстой кишки, целая почка, яичник и яички были заморожены в пластиковых формах Tissue-Tek ^® Cryomold ^® (VWR International, LLC), содержащий Tissue-Tek OCT Компаунд (VWR International, LLC) в ванне с жидким азотом.Замороженные ткани в O.C.T. Соединения хранили при -80 ° C перед приготовлением 7 мкМ срезов, которые помещали на предметные стекла. Предметные стекла фиксировали 4% формалином (Sigma-Aldrich), промывали и инкубировали с красителем Hoechst (Thermo Fisher Scientific). После промывки покровные стекла помещали на предметные стекла с помощью ProLong ^™ Gold Antifade Mountant (Thermo Fisher Scientific) и сканировали на сканере 3DHISTECH PANNORAMIC ™ v2.1.1.10094 RTM (Thermo Fisher Scientific). Изображения анализировали на плотность mRBC на площадь ткани с использованием программного обеспечения для анализа изображений HALO V2.2.1870.44 с модулем High Plex FL V2.0. Образцы, которые не были должным образом разделены или окрашены, исключались из анализа и указывались в исходных данных.
Анализы взаимодействия селезенки
Мышей CD45.1 Pep Boy перенесли 2 × 10 ⁶ наивных клеток OT-1, меченных красителем CellTrace Yellow, перед дозированием 1 × 10 ⁹ CellTrace Far Red, меченных красителем mRBC-CTRL , или клетки mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12. Через 1 или 17 часов после введения дозы mRBC мышей умерщвляли и перфузировали PBS.Половину каждой селезенки превращали в одноклеточную суспензию для анализов проточной цитометрии без лизиса эритроцитов для определения количества мРБК, которые образовывали дублеты с клетками ОТ-1. Одна четверть каждой селезенки была заморожена в Tissue-Tek O.C.T. Сложный. Замороженные ткани в Tissue-Tek O.C.T. Соединения хранили при -80 ° C перед приготовлением 7 мкМ срезов, которые помещали на предметные стекла. Предметные стекла фиксировали 4% формалином, промывали, блокировали реагентом, блокирующим Background Sniper (Biocare Medical, LLC, Калифорния, США), и окрашивали хомячковыми антителами против мышиных CD31 (1: 250, клон 2H8, MilliporeSigma, MA, США). ).Предметные стекла промывали, окрашивали антителом против хомяка, конъюгированным с AF488 (1: 125, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., PA, USA), и инкубировали с красителем Hoechst (Thermo Fisher Scientific). После промывки покровные стекла помещали на предметные стекла с помощью ProLong ™ Gold Antifade Mountant (Thermo Fisher Scientific) и сканировали на сканере Aperio ^™ ScanScope ^® FL с консолью ScanScope Console v102.0.0.33 (Leica Microsystems, Inc., IL, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Процент клеток OT-1, которые совместно локализовались с мРБК, определяли с использованием программного обеспечения для анализа изображений HALO с модулем FL V1 для совместной локализации объектов.0. Конфокальные изображения срезов селезенки получали с использованием конфокального микроскопа Leica TCS SP8 STED 3X (Leica Microsystems, Inc.) и программного обеспечения LAS X Life Science 3.5.5.19976 (Leica Microsystems, Inc.).
Визуализация живых клеток in vitro
CD8 ⁺ Т-клетки выделяли из селезенки и лимфатических узлов мышей OT-1 и инкубировали с шариками T-Activator CD3 / CD28 мыши Dynabeads в соотношении 1: 1 в течение 2 дней до активировать экспрессию 4-1BB. Гранулы удаляли перед инкубацией активированных клеток ОТ-1 с Fab-фрагментом антитела против мышиного TCRβ клона H57-597, конъюгированным с красителем AlexaFluor 488 ^® (AF488) (250 мкг / мл, Bio X Cell).mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12 конъюгировали с меченным красителем DyLight ^™ 650 (DL650) белком 4-1BBL, который, как было установлено, функционирует аналогично немеченому белку 4-1BBL. Клетки mRBC-CTRL метили 10 мкМ красителя CellTrace Far Red при комнатной температуре в течение 6 мин. Меченые клетки mRBC-CTRL или mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12 были иммобилизованы на 8-камерном покровном стекле Nunc ^™ Lab-Tek ^™ II (Thermo Fisher Scientific), которое было предварительно покрыто анти-TER- 119 антитела (25 мкг / мл, Thermo Fisher Scientific).Примерно через 10 минут после добавления меченных AF488-H57 активированных клеток OT-1 к иммобилизованным клеткам mRBC-CTRL или mRBC-OVA-4-1BBL-IL-12 при 37 ° C изображения были получены на конфокальном приборе Leica TCS SP8 STED 3X. микроскоп с объективом × 100 каждые 10 с в течение 15 мин с использованием программного обеспечения LAS X Life Science 3.5.5.19976. Коэффициент колокализации Мандера был определен с помощью плагина EzColocalization ⁶² в программном обеспечении ImageJ 2.0.0-rc-69 / 1.52p (Java 1.8.0_172, 64 бит) для количественного определения процента выше фонового сигнала OT-1, который перекрывается с процентов выше фонового сигнала mRBC в каждом кадре видеоизображения живых клеток.
TCR-трансдукция первичных Т-клеток человека и анализ совместного культивирования с сконструированными эритроцитами
CD8 ⁺ Т-клеток от HLA-A * 02: 01-положительных доноров человека (Cellero ^™, Массачусетс, США), собранные под Одобрение и информированное согласие Advarra IRB стимулировали гранулами Dynabeads Human T-Activator CD3 / CD28 (Thermo Fisher Scientific) в соотношении 1: 1 в среде X-VIVO ^™ 15, содержащей 100 МЕ / мл человеческого IL-2 (PeproTech , Нью-Джерси, США). На следующий день гранулы удаляли и активированные Т-клетки CD8 ⁺ трансдуцировали лентивирусом, кодирующим HPV E7 _11-19 -специфический TCR, в среде X-VIVO 15, содержащей 100 МЕ / мл человеческого IL-2.Культуральную среду меняли через 1, 4 и 8 дней после трансдукции. На 10 день 8 × 10 ⁴ нетрансдуцированных Т-клеток или первичных CD8 ⁺, сконструированных с помощью TCR, с ~ 20% экспрессией TCR инкубировали с 3,2 × 10 ⁵ RTX-321 или контрольными эритроцитами в 200 мкл X- Среда VIVO 15 без человеческого IL-2. Через 2 часа клетки собирали, окрашивали поверхность, фиксировали и повышали проницаемость с использованием набора буферов для окрашивания Foxp3 / фактора транскрипции (Thermo Fisher Scientific) и окрашивали на экспрессию Nur77. В день 1 клетки обрабатывали брефельдином A (BioLegend) в течение 4 часов перед сбором и окрашивали по аналогичному протоколу для экспрессии CD69 и гранзима B.На 5 день клетки собирали для анализа проточной цитометрии HPV E7 _11-19 тетрамера ⁺ (1:10, MBL International Corporation) CD8 ⁺ количества Т-клеток и живых CD8 ⁺ Т-клеточного фенотипа. . Следующие антитела были использованы после исключения мертвых клеток с помощью LIVE / DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain: анти-CD8 (1: 200, RPA-T8, BioLegend), антитела против TCRβ мыши (1: 100, H57-597, BioLegend), анти-Nur77 (1: 100, 12,14, Thermo Fisher Scientific), анти-CD69 (1: 200, FN50, BioLegend), анти-4-1BB (1: 200, 4B4-1, BioLegend), анти-CCR7 (1 : 200, G043H7, BioLegend), анти-CD45RO (1: 200, UCHL1, BioLegend) и антигранзим B (1: 200, QA16A02, BioLegend).Данные проточной цитометрии были получены на проточном цитометре BD LSRFortessa с BD FACSDiva v8.0.2 и проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo 10.5.3. Через 5 дней собирали супернатант клеточной культуры и измеряли уровень секретируемого IFNγ, используя мультиплексный анализ LEGENDplex Human CD8 / NK Panel (13-plex) (BioLegend). Анализ проводили в соответствии с инструкциями производителя.
Статистика
Были построены графики и проведен статистический анализ с использованием программного обеспечения Prism v8.4.2 (GraphPad Software, Inc., Калифорния, США). Данные были выражены как среднее ± стандартное отклонение. Анализ двух групп проводился с помощью двустороннего непарного теста Стьюдента t , где это применимо. Для анализа трех или более групп выполняли односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с тестом множественного сравнения Даннета в каждую временную точку по сравнению с контролями. Значимость биораспределения определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с помощью теста множественного сравнения Тьюки в пределах каждого типа ткани. Экспансию Т-клеток после повторного заражения опухолью определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с помощью теста множественного сравнения Даннета по сравнению с тестом до заражения.Массу тела и уровни цитокинов в плазме с течением времени анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа ANOVA с повторными измерениями с тестом множественных сравнений Тьюки в каждую временную точку, и статистическую значимость сообщали для каждой временной точки по сравнению с аналогичным образом обработанным mRBC-CTRL. Тетрамер + CD8 + Т-клетки в крови с течением времени анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа ANOVA с повторными измерениями с помощью теста множественного сравнения Даннета по сравнению с mRBC-CTRL после логарифмического преобразования точек данных (данные не соответствуют нормальному распределению, определенному с помощью теста Шапиро-Уилка) .Статистические различия в выживаемости определяли с помощью анализа логарифмических рангов (Mantel-Cox). P <0,05 считали статистически значимым.
Сводка отчетов
Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.
Страница не найдена | Департамент обучения и развития персонала
Страница не найдена
Добро пожаловать на новый веб-сайт Департамента обучения и развития персонала.Вы попали сюда, потому что информация, которую вы искали, имеет новое местоположение, больше не доступна или URL-адрес, который вы использовали, неверен. Используйте главное меню, чтобы найти то, что вы искали, воспользуйтесь функцией поиска в верхней части страницы или просмотрите следующий обзор содержания нового веб-сайта, чтобы найти нужную информацию. Или вы можете перейти на нашу домашнюю страницу, чтобы узнать больше о том, что доступно.
Этот веб-сайт был запущен 15 декабря 2016 года с новым дизайном и реорганизацией контента, так что теперь он больше соответствует нашим клиентам и заинтересованным сторонам, а информацию легче находить.Кроме того, новый веб-сайт соответствует всем требованиям правительства штата, включая доступность, и удобен для мобильных устройств.
Мы будем рады вашим отзывам о новом веб-сайте. Пожалуйста, напишите нам по адресу [email protected].
1513913721
Что на сайте
Обучение
В этом разделе представлена информация о профессиональном образовании и обучении для учащихся, родителей и сотрудников, такая как выбор учебного курса и / или учебного заведения, ученичество и стажировка, курсы фундаментальных и справедливых навыков, стоимость курсов и ПОО для учащихся средних школ программ.
Работа и навыки WA
Информация о вакансиях и навыках WA, включая подробную информацию о субсидируемых учебных курсах. В этом разделе доступен отраслевой квалификационный список Priority (PIQL).
Развитие карьеры
В этом разделе вы найдете информацию и ссылки на ресурсы и инструменты, которые помогут вам в развитии вашей карьеры и планировании.
Развитие персонала
В этом разделе представлена информация о модели планирования и развития персонала в Западной Австралии, а также информация о рынке труда Западной Австралии.Список приоритетных занятий штата – SPOL – находится в этом разделе.
Онлайн-услуги
Здесь мы предоставили ссылки на услуги, которые Департамент предлагает в Интернете.
О нас
В этом разделе содержится корпоративная информация Департамента, включая политики и инструкции. Контактная информация наших сервисных центров также доступна здесь.
Офис ученичества
Управление ученичества регистрирует и управляет контрактами на обучение и регулирует систему ученичества / стажировки в Западной Австралии.
1513820918
Провайдеры обучения, практики ПОО и школы
Вся информация, инструменты и ресурсы, относящиеся к программам ПОО, доставке и оценке, доступны через «стикер» на главной странице или значок в правом углу главного меню.
Это включает в себя нашу программу профессионального развития, навыки грамотности и счета, политику и руководящие принципы, SPOL, информацию о требованиях к отчетности, Реестр квалификаций классов A и B , справочники по номинальным часам и Поиск продуктов для обучения, учебный центр управление и ресурсы для поставщиков, работающих по контракту, и реферальных агентов по участию.
1486449314
Последнее обновление страницы: 22 января 2021 г.
Сменные стержни для ручки-роллера Глоссарий – RefillFinder
Хотя наконечники могут выглядеть одинаково, стержень стержня ручки-роллера сильно отличается от стержня шариковой ручки. Во-первых, формы картриджа несовместимы с другой ручкой. Если вы попытаетесь поместить шариковую ручку в шарик-роллер и наоборот, ручка не закроется и не будет писать.Это похоже на покупку картриджа неправильной модели для вашего принтера. Другое главное отличие – это чернила: чернильный картридж для роликовой ручки содержит жидкие чернила, которые текут по бумаге так же, как чернила для перьевой ручки. Ручка-роллер требует колпачка, чтобы предотвратить высыхание картриджа. В стержнях для шариковых ручек используются более густые чернила и требуется большее давление, чтобы на бумаге оставались темные пятна.
Плюсы: Чернила текут плавно, делая отметки на бумаге более темными и насыщенными. Меньшая нагрузка на руки. Минусы: Менее удобно, так как большинству ручек-роллеров нужны колпачки. Более склонны к преждевременному высыханию. Меньший срок службы картриджа. Некоторые производители ручек, такие как Delta и Retro 51 , изготавливают ручки, в которых используется стержень-роллер без колпачка, который производит тот же эффект, что и гладкие насыщенные чернила для роллера, но не высыхает и может выдвигаться. Другой популярной альтернативой наконечнику-роллер-ролику является картридж с фломастером (также называемый тонкой подводкой, волокнистым наконечником или пористым наконечником ручки), который похож на ультратонкую ручку Sharpie.Для создания гладкой насыщенной отметки достаточно легкого прикосновения к бумаге стержня из фломастера.
Стандартный стержень для керамической ручки-роллера
Широко используемый в большинстве ручек-роллеров с колпачками, безопасный керамический стержень для ручки-роллера , также известный как керамический стержень Schmidt 888, отличается длинным цилиндром, который резко сводится к одной точке на одном конце и плоский на противоположном, конец без записи. Иногда они имеют другую маркировку или другие торговые марки на стволе, но если размер такой же, он будет работать с вашей ручкой-роллером.Большинство фирменных стержней, таких как Waterford, ACME и т. Д., Производятся на одном и том же заводе в Германии и являются взаимозаменяемыми, что означает, что они подходят для различных ручек-роллеров.
Бренды, подходящие для керамических стержней-роллеров: Aldo Domani, ACME, Aurora, Bexley, Brossert & Erhard, Colibri, Delta, Diplomat, Elysee, Faber Castell, Foray Focus, Hauser, Inoxcrom, Itoya, Jean Pierre Lepine, Krone, Марлен, Монтеграппа, Монтеверде, Неттуно, OMAS, Ретро 51, Ротринг, Шмидт, Шнайдер, Сенса, Стипула, Висконти, Яфа.
Стандартные керамические стержни для роллера: ACME, Caran d’Ache, Monteverde, Schmidt, Sheaffer (Slim), Visconti
Short Schmidt P8126 Сменный стержень для роллера без колпачка
Сменный стержень для роллера Schmidt P8126 короче и имеет небольшую пластиковую деталь в виде шляпки на конце, противоположном пишущему наконечнику. В нем используются те же жидкие чернила, которые специально разработаны, чтобы не использовать колпачок. Ручки-роллеры Retro 51 Tornado и Delta являются наиболее известными для использования этого типа стержня.Это обеспечивает удобство поворотной ручки с насыщенными жидкими чернилами для роллеров.
Марки ручек, подходящие для Schmidt P8126 стержень для роллера без колпачка: Delta, Monteverde, Retro 51, OMAS.
Short Schmidt P8126 стержни для роллербола без колпачка: ACME Studios , Schmidt Technologies, Retro 1951
Его старший брат, длинный шарик-роллер 8216 без колпачка, обычно ошибочно принимают за совместимость с короткой версией. Легко понять, почему, поскольку они оба выглядят одинаково, за исключением длины.Вот почему нам нравится наносить размеры на наши фотографии, размещенные на этом сайте.
Сменный стержень 8126 подходит для небольшого набора ручек-роллеров, которые обычно закрыты крышками. Некоторые ручки Sensa, OMAS и Retro 51 используют этот тип заправочного картриджа. Скорее всего, если ваш роллер выдвижной, он не будет использовать больший размер. Если вы не уверены, сделайте быстрое измерение, чтобы дважды проверить длину картриджа.
Long Schmidt 8126 стержень для роллера без колпачка: Schmidt Technologies , Retro 1951
Сменные стержни для шариковых ручек других производителей
стержень для гелевого роллера Cross Selectip
Сменный стержень для роллера Waterman
стержень для роллера Parker
Сменный стержень для роллера Sheaffer (НЕ SLIM)
стержень для роллера Pelikan
Mont Blanc стержень для роллера
стержень для ручки-роллера Lamy M62 / 63
Выдвижной стержень для ручки-роллера Lamy M66
.}}}}}}

Патроны для дрелей и перфораторов

Купить патроны для дрелей и перфораторов

Где заказать?

Разновидности патронов для дрели. Как снять патрон, как правильно выбрать

Посадка подшипников | Главный механик

Основные термины

Выбор посадки подшипников качения

Внимание покупателей подшипников

Внимание покупателей подшипников

Разница между картриджем для перьевой ручки и конвертером для перьевой ручки

Картриджи для перьевой ручки

Преимущества картриджей для перьевых ручек

Недостатки чернильных картриджей для перьевых ручек

Конвертеры чернил перьевой ручки

Преимущества преобразователей чернил для перьевых ручек

Недостатки картриджей с чернилами для перьевых ручек

Запасные части для перьевых ручек Глоссарий – RefillFinder

Заправка картриджей международного размера

Стандартный (международный) преобразователь чернил Шмидта

Картриджи и преобразователи для перьевых ручек от других производителей

00000 п.

2 00000 п. 0003

7 00000 п. 0003

3 00000 п. 0003

6 00000 п. 0003

Разработанные эритроциты в качестве готового аллогенного противоопухолевого терапевтического средства

Клеточные линии и мыши

Конструирование продукции и определение экспрессии RBC

Препарат суррогатного mRBC-aAPC мыши

In vitro CD8

Анализ уничтожения опухолей

Адоптивный перенос Т-клеток мышам

Модель подкожной опухоли EG7.OVA и EL4

Модель метастазов в легкие B16-F10

Иммунопрофилирование мышей и проточная цитометрия

Секвенирование вариабельной бета-цепи TCR

Измерения безопасности

Анализы биораспределения

Анализы взаимодействия селезенки

Визуализация живых клеток in vitro

TCR-трансдукция первичных Т-клеток человека и анализ совместного культивирования с сконструированными эритроцитами

Статистика

Сводка отчетов

Страница не найдена | Департамент обучения и развития персонала

Страница не найдена

Что на сайте

Обучение

Работа и навыки WA

Развитие карьеры

Развитие персонала

Онлайн-услуги

О нас

Офис ученичества

Провайдеры обучения, практики ПОО и школы

Сменные стержни для ручки-роллера Глоссарий – RefillFinder

Стандартный стержень для керамической ручки-роллера

Short Schmidt P8126 Сменный стержень для роллера без колпачка

Сменные стержни для шариковых ручек других производителей

Автор: alexxlab

Добавить комментарий Отменить ответ

Рубрики