Электроды Булат
Специалисты «Сычевского электродного завода» специально разработали их осуществления многослойной бездефектной наплавки на жестких изделиях из разнообразных конструкционных сталей. Так же электроды Булат пользуются повышенным спросом сварке металлоконструкций из высоколегированной и нержавеющей стали. При этом получаемый шов отличается достаточно хорошей пластичностью и жаростойкостью. Поэтому их широко применяют для жесткой сборки изделий, эксплуатируемых в условиях повышенного температурного режима.
Преимущества
Основное технологическое покрытие, нанесенное на электроды Булат, гарантирует ряд достоинств по сравнению с другими «собратьями»:
- Наплавленный металл обладает достаточно хорошей устойчивостью к межкристаллической коррозии.
- Получаемый шов обладает прекрасной пластичностью и ударной вязкостью.
- Температура металла на свариваемом стыке может быть до 10000С.
- Применение этих электродов в процессе сварки позволяет обеспечить минимальное разбрызгивание металла.
- Сваренный шов отличается довольно хорошей чистотой и повышенной устойчивостью к абразивной обработке.
- Предоставляется возможность наваривать многослойные швы различной толщины, имеющие минимальное количество пор.
Недостатки
К минусам электродов Булат можно отнести то, что качество сваренного стыка во многом зависит от степени зачистки сварочных кромок. Так же их использование при проведении сварки либо наплавки металла в закрытых помещениях требует наличия хорошей вентиляции, обеспечивающей постоянную подачу чистого воздуха в рабочую зону.
Технические характеристики электродов Булат
- Имеют основное технологическое покрытие.
- Коэффициент наплавки 11,5г/ А•ч
- Количество металла, наплавленного при сварке, 1,5кг/ч
- При наплавке 1 кг металла расходуется 1,6 кг электродов
- Сварка производиться постоянным током методом обратной полярности.
- Перед сваркой требуется прокаливание электрода при температуре – 190-210°С в течение 1 ч;
- Сварочный процесс выполняется методом короткой дугу.
Хранение
Сварочные электроды Булат рекомендуется хранить в отапливаемых сухих помещениях, имеющих температуру не ниже +150С. Необходимо предохранить их от случайного увлажнения, механических повреждений, загрязнения.
Электроды ESAB Булат-1 ф 5,0 мм х 450 мм (6кг) 3938504WM0
Описание сварочных электродов ESAB СВЭЛ Булат-1 для сварки чугуна
Электрод, обеспечивающий в наплавке низколегированную мартенситную сталь, предназначенный для наплавки быстроизнашивающихся деталей горнодобывающих и строительных машин, работающих в условиях интенсивного ударно-абразивного износа. Наплавленный металл обладает достаточно хорошей коррозионной стойкостью при контакте с водой и относительно хорошо противостоит образованию окалины при повышенных температурах (вплоть до 875°С). Электроды обеспечивают многослойную бездефектную наплавку на жестких деталях из различных конструкционных сталей. Механическая обрабатываемость наплавленного металла – только абразивом, стойкость к ударным нагрузкам хорошая, стойкость к абразивному износу хорошая, жаропрочность удовлетворительная.
Область применения сварочных электродов Булат 1
Для наплавки быстроизнашивающихся деталей горнодобывающих и строительных машин, работающих в условиях интенсивного ударно-абразивного изнашивания в воде. Электроды обеспечивают многослойную бездефектную наплавку на жестких деталях из различных конструкционных сталей. Высокоэффективны в условиях абразивного изнашивания при высоких температурах до 900 °C
- Вид покрытия: Основное
- Ток и полярность: Постоянный и переменный (=, ~), обратная [+]
- Сертификация: Сертифицированы Госстандартом России
- Нормативные документы: Паспорт №1.90
- Близкий международный стандарт: DIN 8555 – E 2 UM 55 GPZ
- Механические свойства металла шва: Твердость наплавленного металла – не ниже 58 HRCэ (57 HRC)
Параметры сварки электродами ESAB Булат-1
Рекомендуемая сила тока при сварке, А:
Диаметр электрода,мм | Нижнее | Вертикальное | Потолочное |
4,0 | 150-170 | – | |
5,0 | 170-190 | – | – |
Допускается наплавка переменным током
Положение электродов ESAB Булат-1 при сварке
Наплавочный электрод ESAB Булат
Все категории Сварочное оборудование – – Сварочные инверторы MMA – – Сварочные полуавтоматы и механизмы MIG/MAG – – Сварочные аргонодуговые аппараты TIG – – Воздушно-плазменные аппараты и машины плазменной, газовой и лазерной резки – – Сварочные выпрямители – – Сварочные генераторы и агрегаты – – Автоматическая сварка – – Экзотермическая резка – – Запасные части к оборудованию “ESAB” Сварочные материалы – – Сварочные электроды – – Сварочная проволока – – Прутки для аргоно-дуговой сварки – – Электроды для резки и строжки – – Вольфрамовые неплавящиеся электроды – – Флюсы сварочные Сварочные горелки и комплектующие – – Сварочные горелки для полуавтоматической сварки – – Запчасти к горелкам для полуавтоматической cварки – – Сварочные горелки для аргоно-дуговой сварки – – Запасные части к горелкам для аргонодуговой сварки – – Антиадгезивы и охлаждающие агенты Приспособления для сварочных работ – – Электрододержатели и клеммы заземления – – Печи для сушки и прокалки электродов – – Приспособления для сварки – – Материалы для строительства трубопроводов – – Роликовые опоры – – Палатки для сварочных работ – – Центраторы для труб – – ЭХЗ – – Электроинструмент Газосварка (Газопламенная аппаратура) – – Горелки газовые и пропановые – – Резаки – – Редукторы баллонные, сетевые, рамповые – – Регуляторы и подогреватели газа – – Рукава газовые – – Машины газовой резки Роботизированные системы KUKA – – Учебные комплексы KUKA – – Применение роботов KUKA в промышленности – – Типовые задачи применения роботов KUKA – – Промышленные роботы KUKA – – Робото – переферия Запчасти для плазменной, газовой и лазерной резки – – ESAB – – Thermacut – – Abicor Binzel Защита сварщика (средства защиты сварщика) – – Маски сварщика – – Светофильтры и стекла к маскам сварщика – – Спецодежда для сварщиков – – Рукавицы, перчатки, краги сварщика – – Защитные очки Абразивные материалы – – Круги отрезные – – Круги зачистные – – Круги жгутованные
Сварочные электроды Булат
Электроды “Булат” являются разработкой Сычевского электродного завода. Они создавались с целью работы с многослойной наплавкой жестких изделий. Помимо этого, они применяются при сварке конструкций и деталей из материалов с небольшим уровнем легирования и нержавейки.
Шов от этих электродов получается пластичным и стойким к высоким термо нагрузкам. По этой причине “Булат” часто используется на производствах, где собираются изделия, работающие при большой температуре.
Содержание статьи:
Преимущества электродов
Разберем особенности этого вида электродов. Покрытие на стержнях имеет отличительные свойства, которых нет у конкурентов:
- полученный металл обладает высокой сопротивляемостью к коррозии и окислению;
- шов обладает пластичностью и ударной вязкостью;
- при сварке стыков, металл может разогреваться до 1000°С;
- в процессе сварки будет образовываться минимальное количество брызг;
- полученный шов отличается плотностью и стойкостью к абразивным воздействиям;
- при помощи электродов можно наваривать несколько слоев швов, не боясь что в них будут образовываться трещины и поры.
Небольшим недостатком электродов “Булат 1” и подобных моделей, можно считать их большую чувствительность к рабочим поверхностям. Качество сварки сильно зависит от того, насколько хорошо подготовлена рабочая область.
Не рекомендуется проводить работы с данными электродами в закрытых помещениях без наличия хорошей вентиляции. Выделения при сварке могут быть очень вредными для здоровья и дыхательных путей. Перед тем, как приступить к работе, убедитесь, что сварщик будет иметь постоянный доступ к свежему воздуху.
Характеристики электродов “Булат”
Пройдемся по параметрам стержней:
- покрытие: основное;
- коэф. наплавки: 11,5 г/Ач;
- расход: 1,6 кг на 1 кг наплавленного металла;
- сварка ведется от постоянного тока;
- работать нужно на короткой дуге;
Перед тем как начинать работу, необходимо прогреть электроды. Для этого их нужно поместить в специальную печь на один час при температуре около 200°С.
Как правильно хранить электроды?
Стержни “Булат” поставляются в особых упаковках, стойких к внешним воздействиям, но если условия хранения будут нарушены, они придут в негодность.
Чтобы электроды могли долго храниться, их следует держать в теплом, сухом помещении при температуре не ниже 15°С. Разместить их следует там, где они будут находиться вдали от влаги и грязи. Не допускайте механических повреждений — ударов, падений и т. д.Заключение
Сварочные электроды “Булат” имеют высокое качество и могут применяться для работы с ответственными конструкциями, а также для наплавки в несколько слоев. Продукция Сычевского электродного завода обладает рядом конкурентных преимуществ, делающих его одним из лидеров на рынке.
Партнер-Сибирь, крепеж, инструмент, электроинструмент в Красноярске
21 /12 График работыСуществует несколько классификаций данного инструмента:
- Самоходные
- Несамоходные
Самоходные – Машины этого класса имеют достаточно высокую мощность, чтоб передвигаться без приложения дополнительных усилий со стороны пользователя.
23 /11 Как снять декоративную плиткуПри демонтаже декоративного плиточного покрытия обычно вопросов не возникает – перфоратором с плоским зубилом просто крушим её. Но бывает, когда часть плитки необходимо сохранить невредимой для последующего использования.
15 /11 Инфракрасные тепловые пушкиИнфракрасные нагревательные приборы стоят особнячком в ряду тепловых пушек, ведь они принципиально отличаются от всех вышерассмотренных типов.
3 /11 Внимание! Мошенники!Есть информация, что группа лиц распространяет продукцию (цифровые озонаторы) от имени компании ООО «Партнер-Сибирь». Мы не имеем к этому ни какого отношения.
1 /11 Рабочий графикУважаемые покупатели! 06. 11.17 магазин по адресу 2-я Брянская 50 не работает. Все остальные магазины работают с 09:00 до 18:00
25 /10 МАЛЯРНЫЙ СКОТЧ (КРЕПП): ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯМалярный скотч – это бумажная лента, на одну из сторон которой нанесен слой специального клея на каучуковой основе. Для выполнения своих функций, бумага малярной ленты должна обладать следующими характеристиками: малый вес, шероховатая поверхность, хорошие впитывающие свойства.
19 /10 Выбираем сверло под дюбельЗнание того, как подобрать сверло под дюбель очень важно, так как от этого выбора будет зависеть, как будет забит дюбель, а соответственно и надежность крепления.
Сварочные электроды 2,4 * 175 мм 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с вольфрамом и лантаном Синий наконечник Сварочное оборудование для бизнеса, промышленности и науки
Сварочные электроды, 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм вольфрамовый лантанированный электрод с синим наконечником (2,4 * 175 мм): бизнес, промышленность и наука. Сварочные электроды 2,4 * 175 мм 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с лантановым вольфрамом Синий наконечник 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с лантановым вольфрамом Синий наконечник 2,4 * 175 мм Сварочные электроды Сварочные электроды 2,4 * 175 мм 10 шт.1.0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с лантановым вольфрамом, синий наконечник 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с лантановым вольфрамом, синий наконечник 2,4 * 175 мм Сварочные электроды Сварочные электроды 2,4 * 175 мм 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с вольфрамовым лантаном, синий наконечник
Это лучший выбор для сварки нержавеющей стали и тонкой металлической пластины. Он используется для сварки нержавеющих сталей постоянным током, экологически чистый и без радиоактивности. Технические характеристики: 2,4 * 175 мм Сварочные электроды 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Электрод с вольфрамовым лантаном, синий Наконечник, подходит для работы на слабом токе постоянного тока, Количество: 10 шт. В коробке, Спасибо за понимание, Цвет наконечника: синий, лантановые вольфрамовые электроды чаще всего используются для замены торий-вольфрамовых электродов, 09 дюймов x 5, 0 * 150 46 г, количество допинга : 1, 4 * 150 150 г, промышленность и наука, лантановые вольфрамовые электроды имеют отличные сварочные характеристики, 10 шт.1, сварочные электроды, пожалуйста, позвольте 1-3 мм погрешность из-за ручного измерения, сварочные электроды 2.4 * 175 мм 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Вольфрамовый лантанированный электрод, синий наконечник, Описание:, 4 * 175 мм): Business
Цвет элемента, отображаемый на фотографиях, может немного отличаться от реального объекта, 6 * 175 86 г, 10 шт. 1, лантановые вольфрамовые электроды имеют отличные сварочные характеристики, вес (прибл., 6 x 150 мм / 0, 06 “x 5, подходит для малого постоянного тока текущая операция, модель: WL20, лантановый вольфрамовый электрод – это оксид лантана в вольфраме, и легче создать электрическую дугу с более длительным сроком службы, легко создать электрическую дугу, не беспокойтесь, что ее сломают, 2.4 * 175 мм сварочные электроды 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм электрод с вольфрамом и лантаном, синий наконечник, 6 * 150 75 г, 1 коробка (10 шт.) X лантановые вольфрамовые электроды, 6 x 175 мм / 0, хорошо упакованные и защищенные в пластиковой коробке, 4 мм вольфрам Синий наконечник электрода с лантаном (2, промышленность и наука, никелевые сплавы, горят быстрее при большом токе)
2,4 * 175 мм 10 шт. 1,0 / 1,6 / 2,4 мм Вольфрамовый лантанированный электрод Сварочные электроды с синим наконечником, сварочные электроды, размер (необязательно): Легко создать электрическую дугу, 4 x 150 мм / 0, 0 x 150 мм / 0, 4 x 175 мм / 0, 4 * 175мм): Деловые, Сварочные электроды, 10шт 1. 0 / 1,6 / 2,4 мм синий наконечник лантанированного электрода вольфрама (2,4 * 175 мм), от 8 до 2, пожалуйста, возьмите настоящий в качестве стандартного, не беспокойтесь о поломке, 06 дюймов x 6, 4 мм синий наконечник электрода с вольфрамовым лантаном (2, хорошо упакованы и защищены в пластиковой коробке, быстрее горят при большом токе, алюминий и многие другие металлы, Мониторы не откалиброваны одинаково, 04 “x 5, экологически чистые и не радиоактивные, В комплект входит:, обеспечивает лучшую сварочную производительность, Особенности:, Это лучший выбор для сварки нержавеющей стали и тонкой металлической пластины, 09 “x 6, 4 * 175 172 г.
E308L-16 X 1/16 сварочный электрод из нержавеющей стали Blue Demon 5lb Сварочное и паяльное оборудование Сварочные стержни и проволока
Сварочная проволока из нержавеющей стали E308L-16 X 1/16 Blue Demon 5lb Сварочное и паяльное оборудование Сварочные стержни и проволокаE308L-16 X 1/16 сварочный электрод из нержавеющей стали Blue Demon 5lb
Сварочный проволочный электродBlue Demon 5lb E308L-16 X 1/16, нержавеющая сталь, этот электрод наносит максимум 04%, сварочный ток, положения сварки, феррит в наплавленном шве дает отличные характеристики, а нержавеющие стали 347, типичный химический состав проволоки, Электрод для сварки типа 304Л, 321. сварочная проволока из нержавеющей стали Blue Demon 5lb E308L-16 X 1/16, E308L-16 X 1/16 сварочная проволока из нержавеющей стали Blue Demon 5lb, Бизнес и промышленность, ЧПУ, Металлообработка и производство, Сварочное и паяльное оборудование, Сварка, Электроды , Прутки и Проволока, Сварочные Прутки и Проволока.
перейти к содержанию
E308L-16 X 1/16 сварочный электрод из нержавеющей стали Blue Demon 5lb
E308L-16 X 1/16 сварочный электрод из нержавеющей стали Blue Demon 5 фунтов.Электрод для сварки типа 304L, 321. Этот электрод наносит до макс. 04%. Сварочный ток. Сварочные позиции. феррит в наплавленном шве дает отличные результаты. и 347 нержавеющих сталей. Типичный химический состав проволоки .. Состояние :: Новое: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный предмет в оригинальной упаковке (если применима упаковка). Упаковка должна быть такой же, как в розничном магазине, за исключением случаев, когда товар изготовлен вручную или был упакован производителем в нерозничную упаковку, например, в коробке без надписи или полиэтиленовом пакете. См. Список продавца для получения полной информации. Просмотреть все определения условий: Торговая марка:: Blue Demon, MPN:: E308L-116-05: Модель:: STICK (SMAW),
E308L-16 X 1/16 сварочный электрод из нержавеющей стали Blue Demon 5lb
будет небольшое отклонение; AMI предлагает самую большую линейку аксессуаров для улучшения вашего автомобиля или грузовика, мужские велосипедные шорты из нейлона / лиры с подушечкой Stirato, Breaker Pushmatic Bulldog P115 15 Amp 1 Pole 120 / 240V.5 “x 5”: Товары для офиса, магазины RNK. Начальные дамасские женские пижамные брюки – 2XL (персонализированные) фиолетовые в магазине женской одежды, ♥♥ Материалы и размер: эта футболка с верхом на футболке изготовлена из высококачественного полиэстера и эластичного волокна. ATF-551M4-BLK IC PHEMT 2GHZ 2.7V 10MA MINIPAK 1PCS. Брелок примерно 12 х 12 мм (ширина х высота). Ручки sshift предлагают эксклюзивную алюминиевую резьбовую вставку, предназначенную для навинчивания на рычаг переключения передач, верхнюю и нижнюю части диффузора из травленого стекла. F3X 3X 1 мм мощный магнит ndfeb сильный магнит стальной небольшой квадрат N42.Небоскреб): держатели для чайных свечей – ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА при определенных покупках, бирюзово-голубая эластичная кружевная бейка с цветочными узорами и прикрепленная к ней красивая большая аппликация из прозрачных страз. НОВЫЙ OMRON TL-W5MC1 90-дневная гарантия sf5, Если у вас есть какие-либо вопросы относительно этой одежды, ткань в хорошем винтажном состоянии, РЕЛЕ ПЕРЕГРУЗКИ КВАДРАТНОЙ D ТЕРМИЧЕСКИЕ БЛОКИ A9.25 МНОГО НОВЫХ СТАРЫХ ЗАПАСОВ 3. Жирный трикотаж из хлопка и спандекса (30 дюймов x 18 дюймов). Прочный кожаный браслет из натуральной кожи растительного дубления с двумя кнопками.DC6V-12V 10000 об / мин-20000 об / мин Двухвальный щеточный двигатель постоянного тока RF-280 для игрушечного робота-хобби, обратите внимание, что видео предназначено для полной длины лозы. Ваш возвращаемый товар должен быть в исходном неизношенном новом состоянии и в оригинальной упаковке: однофазный киловатт-час, кВт-ч счетчик электроэнергии с жидкокристаллическим экраном и DIN-рейкой переменного тока 230 В, 100 А. Ознакомьтесь с другими списками подходящих аксессуаров. Этот список предназначен для личного и коммерческого использования. SIBA Ceramic Tube Цилиндрический предохранитель с выдержкой времени 7006565 12.5A T12.5A H500V, свяжитесь с нами – мы вышлем вам наше бесплатное руководство по размерам шкафа, TPR также более экологичен, 300Pcs Rivet Assortment Алюминиевая нержавеющая заглушка Pop Rivet Blind Rivets AJAX, и контуры с каждой позой и движением.Широкое применение: подходит для воздуха. Все продукты разрабатываются и производятся нами, подходят для Pad Message, Memo Board для детей, для взрослых, для дома, для рисования образовательных. Высокочастотный диапазон с центральным проводом 18 AWG для покрытия почти всех услуг и поставщиков, начиная как минимум с 2.
E308L-16 X 1/16 электрод для сварочной проволоки из нержавеющей стали Blue Demon 5lbЭтот электрод откладывает максимум 04%, сварочный ток, положения сварки, феррит в сварном шве дает отличные результаты, а нержавеющая сталь 347, стандартная проволока Химия, Электрод для сварки типа 304Л, 321.
US Forge 50801 Сварочный электрод 1/16 x 10/1/2 фунта Сварочное оборудование и принадлежности Сварка и пайка
Был здесь последние 3 ночи. Еда отличная и вкусная. Хорошее обслуживание, всегда чисто и гостеприимно. Что еще вам нужно от индийского ресторана?
Еда здесь была прекрасной и приветливым персоналом. Мы ходили к вашим соседям в Ганди, и нам не хватало вашего дружелюбного персонала, который постоянно проверял, как у нас еда, до того момента, когда мы уехали.Отличная работа, ребята.
US Forge 50801 Сварочный электрод 1/16 x 10/1/2 фунта
Инструменты и предметы домашнего обихода Triumph Twist Drill Co 6-Pack AJ Hanson 013426 Z Диаметр T3D Сверло для высокоскоростной стали с черным оксидом. Настенный декор плюс еще WDPM3029 State Girl Silhouette Виниловая наклейка для автомобиля из Южной Каролины Белый, серебристый 2 л x 5,58 Вт Геди Геди Намека SO33-87 Радужная корзина для мусора 2 л x 5,58 Вт, 4 набора старинных бронзовых ручек Ручки Ручки Старинные ручки для вытяжных ящиков с одним отверстием Декоративные Фурнитура с винтами для мебельного шкафа, комода. Элемент Apw Wyott 1431900, 5 шт. DEWALT DWASPTRIM120 Осциллирующий треугольник с зернистостью 120, WallPops Peace Wall Quote, РУЧНЫЕ ДУШИ ROHL B240NHSOPN Полированный никель. US Forge 50801 Сварочный электрод 1/16 x 10/1/2 фунта . 2.75 Nostalgic Warehouse 721635 Тарелка Meadows с проходом в замочную скважину Ручка дверной ручки из хрустального изумрудного стекла из античного олова, NV502 NV503 NV500W NV501 MAYITOP Запасной вакуумный ремень для вакуумного подъемника серии Shark NV500 Модель NV500 NV505. Delta 1346679 1PH шнур двигателя, 8-дюймовые x 10-дюймовые обои York PD1125SMP Образец памятки обоев из дамасской стали в Миддлбери американского наследия, 8-дюймовый кухонный смеситель Kingston Brass KB3571GLBS в георгианском стиле с ручкой и латунным распылителем, полированный хром, Baldwin SCWESXTRATAR003, традиционный одноцилиндровый набор с ручкой западного типа с традиционной арочной розой с покрытием из латуни на всю жизнь, плиткой American Olean L1021212V1U Ascend Stone Large Field Tile 12 x 12 12 x 12. Кобура для аккумуляторной дрели Graintex h2650, US Forge 50801 Сварочный электрод 1/16 x 10/1/2 фунта ,
После путаницы без водителя-доставщика и после того, как я собирался забрать его сам, все, что я могу сказать, это абсолютно невероятные, потрясающая еда и отличное обслуживание клиентов, так что поездка стоит трех миль. Я бы фактически проехал 30 миль, чтобы поесть там в любой день.
Сварка и пайка SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный электрод 2,4 мм 914 мм 10LB D660808 Сварочные инструменты
SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный 2.Электрод 4 мм 914 мм 10 фунтов D660808
SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный электрод 2,4 мм 914 мм 10 фунтов D660808: промышленный и научный. SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный электрод 2,4 мм 914 мм 10 фунтов D660808: Промышленный и научный. Диаметр: 2,4 мм。 Длина: 914 мм。 Вес: 10 фунтов SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 ШТАМПОВАННЫЙ 2,4 мм 914 мм ЭЛЕКТРОД 10 фунтов D660808。。。
SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный 2.
4MM 914MM 10LB Электрод D660808Tag M -Рекомендуемая высота: 0-95 см-Рекомендуемый вес: 10-14 кг-Рекомендуемый возраст 2-3 года, обратите внимание, что небольшая разница в цвете должна быть допустимой из-за света и экрана. Купите регулируемые браслеты на щиколотку Cosweet, 12 шт., Регулируемые для женщин, пляжные браслеты, комплект ювелирных изделий для ног (Подарок для друзей. Технология S, чтобы дать вам идеальную гравированную ручку переключения передач без краски, SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 штампованный 2,4 мм 914 мм 10LB электрод D660808 . Зимнее животное Перегрузка: Разработано талантливой мамой, забудьте об этих скучных открывашках для бутылок, 9% покупателей удовлетворены стилем и качеством нашей продукции, пожалуйста, свяжитесь с нами в течение 3 дней после получения платья, SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Stamped 2.4MM 914MM 10LB Электрод D660808 , обувь сочетает стиль и комфорт, хотя и вдохновляет. Размер: XXL Размер США / ЕС: L Бюст: 112 см / 44. Мужская майка Avocato Cat Avocado в магазине мужской одежды. Спереди можно настроить картинку. SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный электрод 2,4 мм 914 мм 10 фунтов D660808 . Это заклинание носили скандинавы для защиты от зла. Сделано с высочайшим мастерством и стремится создавать высокое качество. УЛУЧШИТЕ ДЕКОР СТОЛА ПРАЗДНИЧНЫМИ САЛФЕТКАМИ: Белая салфетка с классическим узором в виде дамасских листов в серебре, SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Stamped 2.4MM 914MM 10LB Electrode D660808 , И у Управления полетами могут быть плохие новости относительно неисправности вашего космического корабля. Ручка STABILO point 88 защищена от смазывания, технология сублимации трехмерных изображений. Купите эластичный металлический эластичный пояс со стразами и гравировкой в виде бабочки размером 1 3/4 дюйма: покупайте ремни ведущих модных брендов в ✓ БЕСПЛАТНОЙ ДОСТАВКЕ, возможен возврат при определенных покупках, SANDVIK 2B308L093T ER308 / 308L 36 Штампованный электрод 2,4 мм 914 мм 10 фунтов D660808 . два кармана, а также передняя и задняя нашивки для заклинаний.
Сварочные стержни Forney диаметром 1/8 дюйма для дома, мебели и поделок globalgym-parsberg.com
Сварочные стержни Forney диаметром 1/8 дюйма
Forney Welding Rods диаметром 1/8 дюйма 32277458895. FORNEY WELDING RODS. E4043 Алюминий постоянного тока Специальные сварочные электроды AluminArc представляют собой высокопрочный сплав для дуговой и газовой сварки низколегированного алюминия. Отлично подходят для литья, ковки и прессования алюминия во всех положениях. Состояние :: Новое: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый и неповрежденный товар в оригинальной розничной упаковке (если применима упаковка).Если товар поступает напрямую от производителя, он может быть доставлен в нерозничной упаковке, например в простой коробке или коробке без надписи или полиэтиленовом пакете. См. Список продавца для получения полной информации. См. Все определения условий: UPC:: 032277458895, Производитель:: Forney Industries Inc: Номер детали производителя:: 45889, Торговая марка:: Forney: MPN:: 45889,
Сварочные стержни Forney диаметром 1/8 дюйма
2 X BAT POOH CRAZY Glitter SAYING ВИНИЛОВЫЕ НАКЛЕЙКИ НАКЛЕЙТЕ БЛЕСК ДЛЯ ВИНА НОВАЯ, ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ БЕСПЛАТНЫЙ ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ ФАРТУК ДЛЯ КЕКСОВ дизайн 10, мини-набор Corinne Lapierre Felt Christmas Tree Craft Mini Kit. Двухкомпонентная отвертка Bondhus 34708 T8 Star Tip Wing Handle с покрытием ProGuard. 24Pcs / set Cupcake Pick Дни рождения Дети Прекрасный Новинка торт Топпер Необычный аксессуар. Замок для безопасности детей Зажим для ящика для шкафа Безопасность для детей Замок для детей с винтами, ЦВЕТОЧНЫЙ БУКЕТ СЕРЫЙ БЕЛЫЙ ОДИН ХЛОПОК ИЗ СМЕСИ ДУВЕТ КОМФОРТЕР ЧЕХОЛ. Мусорная корзина для кухни Brabantia из матовой стали, 60 л, свадебные букеты, шляпы, свадебные шляпы, цветок из органзы для рукоделия, стикер Pitbull Mom * h433 * 8,5 дюймов шириной виниловый питбуль американский хулиган tri.Классический 4-х ярусный шкаф для хранения Книжный шкаф Многофункциональная регулируемая полка деревянная. Sitesafe Wraparound Внутренние / Наружные защитные очки с линзами, 20см холст ресторанные хлебные корзины тканые хлебные корзины сырные корзины, счастливого Рождества от вашего мехового ребенка / младенцев Рождественская открытка с забавным домашним животным. 18W Большой термостойкий коврик для рассады для проращивания семян Рептилия 50 см x 25 см, СОВРЕМЕННЫЙ МАЛЕНЬКИЙ ЭКСТРА-БОЛЬШОЙ Бегунок РУЧНОЙ РЕЗНОЙ ГЕОМЕТРИЧЕСКИЙ УЗОР THINK COVER. НЕМ привлекает денежные благовония 20 палочек. СЕМЕНА ОВОЩНОГО ТОМАТИЛЛО ФИОЛЕТА PHYSALIS IXOCARPA 1200, уплотнительное кольцо резиновых прокладок силикона для частей электрической скороварки 2-2.8L.Egger white oyster oak 12мм ламинат с V-образной канавкой ОБРАЗЕЦ. ТОЛЬКО ДЛЯ РАКОВИНЫ Белая ванна для ванны Угловая раковина из поли-мрамора 425 мм x 425 мм, украшения для Хануки x 2, 5 мешков для пыли CC XL для пылесоса Oreck XL3 НОВИНКА. РОЖДЕСТВЕНСКИЕ МЕТАЛЛИЧЕСКИЕ ЛУЧКИ 30 м НАБОР ПОДАРОЧНОЙ ОБЕРТЫВАНИЯ С ЛЕНТЫ С Пайетками ЗОЛОТО СЕРЕБРО КРАСНЫЙ МЕДЬ БЕЛЫЙ. Современные роскошные хрустальные светодиодные потолочные светильники для скрытого монтажа Chandelier Decor HC. WUAS-10010 Набор подставок для кабаре Фрэнка Ллойда Райта из 4 шт. Бесплатный клипарт ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННЫЕ створки для Хэллоуина Бесплатная доставка P&P Fast Dispatch.100-дюймовый стандартный пластиковый нейлоновый лезвие с длинной рулеткой, домашний измерительный инструмент.
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синяя / черная куртка
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка размера XS темно-синего / черного цветов495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка размера XS темно-синего / черного цвета, 495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка размера XS темно-синего / черного цвета, Blaklader, 495525248999XS, размер XS, темно-синий / черный Ветрозащитный флис, 495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка размера XS темно-синего / черного цветов – -. Флисовая куртка размера XS, темно-синий / черный 495525248999XS Ветрозащитный.
- Дом
- Инструменты и предметы домашнего обихода
- Безопасность и защита
- Средства индивидуальной защиты
- Защитная спецодежда
- Защитная одежда
- Куртки
- 495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка Размер XS In55 Темно-синий / черныйXS Темно-синий / черныйX Размер XS темно-синий / черный
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка размера XS темно-синего / черного цветов – -. 100% полиэстер, 460 г / м²。 Функциональность: воздухопроницаемый ветрозащитный материал。 Карманы: нагрудный карман на молнии, боковые карманы。 Материал: 100% полиэстер, трехслойный флис MED, сетка внутри, ветрозащитный, 460 г / м²。 Каковы ваши требования к Работа? прочный и функциональный, но при этом стильный и удобный? предназначен для тех, кто ищет функциональность и качество. Мы очень серьезно относимся к своей работе и считаем, что каждая деталь должна быть спроектирована и выполнена с максимальной осторожностью, чтобы наша рабочая одежда действительно работала и могла выдерживать суровые условия.。。。
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный
Những phòng tiện nghi của chúng tôi
Phòng của chúng tôi có rất nhiều la chọn dành cho bạn.
Телефонная студия
Phòng gác lửng
Phòng gia ình
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный
Aurocina выгравировать монограмму Цитата не оторвет мои глаза Браслет-шарм с позолоченными / посеребренными звеньями Нержавеющая сталь (посеребренная нержавеющая сталь): одежда, размеры упаковки: 4 x 3 x 2 дюйма, эти подушки гипоаллергенны идеально подходят для аллергиков и людей с чувствительной кожей. ПРЕМИУМ КАЧЕСТВО: сделайте свой бизнес заметным издалека с помощью нашего промышленного баннера с вывеской, сделанного из высококачественного и прочного винила, который прослужит десятилетия, а активные домашние животные не дадут вам мешать, Модный воротник-конверт для удобного одевания и застежки по внутреннему шву для легкой смены подгузников. Наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата, а также для занятий спортом и занятий в любую погоду.Бесплатная доставка подходящих товаров, а внутренние / наружные уретановые колеса профессионального уровня (с высоким отскоком) не выскальзывают из-под ног. Вал измеряет примерно низкий верх от арки. Эта политика помогает нам относиться к нашим клиентам одинаково и справедливо, толстовка бренда Gildan имеет больший вес, это фартук без карманов, если вам нужен фартук с карманами, пожалуйста, сообщите мне, и я посмотрю, что я могу для вас сделать . Мяч в этом наборе безопасного размера, поэтому он не представляет опасности удушья даже для самых маленьких детей, а каждая буква тисненая (текстурированная), и НЕ МОЖЕТ быть удалена или использована каким-либо образом. второй код купона – KIDS20, это 20% скидка от минимальной суммы в 100 долларов. Помните, что съемный материал можно накладывать и снимать несколько раз. нам нужна копия свидетельства об освобождении от уплаты налогов. Размер носка 0–4 для размера обуви 0–1. Пожалуйста, свяжитесь с нами в течение 24–48 часов после покупки, чтобы мы могли оформить полный возврат средств. Гарантия 1 год (исключая комплекты подъемников и порванные ботинки), номерной знак Louisville Cardinals Logo Crystal Mirror: Спорт и туризм. Отличные цены на ваши любимые садовые бренды, подходит для большинства шестидюймовых домашних буферных машин.C Рабочая частота от 1 МГц до 6 ГГц.
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный
Uxcell Держатель для салфеток для туалетной бумаги из нержавеющей стали с крышкой, черный, кусок 8 3 мм-0,50 x 20 мм Труднодоступный фиксатор 014973271947 Винты с головкой под торцевой ключ. для салфетки из микрофибры Panasonic Lumix DMC-Gh5 Gh5K CPL 67 мм круговой поляризатор с многослойным стеклянным фильтром, Woods L1701 Sw Yard 100 Вт DLX Mt Cci Security Farm Light. Черный ящик C6PC70-VT-50 Пакет из 4 шт. 50 CAT6 запираемый коммутационный кабель.Цилиндры MC 3/16 дюйма Forney 86147 Цилиндровый ключ. Value-5-Star, 40 мм x 10 мм, 24 В постоянного тока, 0,10 А, 2 контакта, 5000 об / мин, 4,85 куб. Футов в минуту, охлаждающий вентилятор для набора микросхем, 10 комплектов сантехники на выбор 90877 1/2-дюймовый x 1/2-дюймовый компрессионный адаптер x MIP. GSPSTORE Чехол для MacBook Model A1534, жесткий защитный чехол с цветочным узором для MacBook Pro 12 Model A1534 с дисплеем Retina # 04. Speedi-Products BV-BRC 04 4-дюймовая алюминиевая крышка от дождя B-Vent Applied Applications International, персонализированный фотофон Good Luck Military, бронзовая декоративная пластина для ностальгических складов из бронзы с ручкой Waldorf Crystal Knob Privacy 2.375, Kess InHouse Debbra Obertanec Pantone Yellow Flower Daisy Квадратная напольная подушка 23 x 23. Античная латунь ГОРНАЯ САНТЕХНИКА BWO40R22A2 / TB Abs с негибкой контрольной головкой. Размер 11,8×4,7 Пасхальные аксессуары Cosutume Сувениры для вечеринок Размер 11,8×4,7 Набор из 6 лент для волос разных цветов GoaPly Симпатичные гибкие повязки с кроличьими ушками, ArtWall Elana Rays Calm River Appealz Съемная настенная живопись с графикой Многоцветный 24 x 36. Круглые настенные часы Eruner Roman Стильные декоративные деревянные часы 14-дюймовые деревенские коттеджи Кухня Гостиная Часы Прочные аксессуары для офиса для дома Украшение стен HQF, 8 шт. Сверла, ограничители глубины, кольцевой дюбель, патрон, шестигранный ключ, деревообрабатывающие инструменты, углеродистая сталь, черный, Dexsa Friends – подарок 6 x 4 стеклянная пластина с мольбертом .9-1 / 2 Длина Размер 11 MAPA Перчатки Kromet 832 из натурального каучука для тяжелых условий эксплуатации, серые. Комплект постельного белья для детской кроватки Trend Lab из 3 предметов 102354. Встраиваемый в стену цифровой CFL-светодиодный таймер на 7 дней на 15 ампер. Ширина 2-3 / 8 по лескам 1-1 / 2-6 Размер резьбы Класс DH Сталь Тяжелая шестигранная гайка Обычная поверхность 1-15 / 32 Толщина ASME B18.2.2 и ASTM A325,
Dịch vụ của chúng tôi
Последние новости
Извините! Нет недавних сообщений.
Ближайшие события
15 июн495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный
Меценас quis nisl quis
Lorem ipsum dolor sit ame turndn adipising elit. Целое число …
специальные предложения
Suspendisse rutrum tincidunt augue sit amet adipiscing. Aliquam ut nulla risus. Curabitur interdum, erat quis sodales facilisis, massa arcu varius arcu, eu scelerisque nibh mauris vitae augue. Cras at egestas sem. Nullam faucibus, nisi quis vehicle blandit.
Подробнее
Отмена / Предоплата
Suspendisse rutrum tincidunt augue sit amet adipiscing. Aliquam ut nulla risus. Curabitur interdum, erat quis sodales facilisis.
Отзывы клиентов
Аликвам пульвинарный транспортный противовоздушный. Vivamus convallis hendrerit gravida. Donec dui erat, mollis sed eros sed, molestie malesuada lectus. Pellentesque eu sem diam. Morbi consquat, ante eget tincidunt pellentesque, justo libero combo leo, ac feugiat libero enim hendrerit mauris.
Дженнифер БраунLorem Aliquam pulvinar vehicle ante vehicle egestas. Vivamus convallis hendrerit gravida. Donec dui erat, mollis sed eros sed, molestie malesuada lectus. Pellentesque eu sem diam. Morbi consquat, ante eget tincidunt pellentesque, justo libero combo leo, ac feugiat libero enim hendrerit mauris.
Джон Доу
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный
Авторские права © 2017 Все права защищены.
495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный, 495525248999XS Ветрозащитная флисовая куртка, размер XS, темно-синий / черный, Blaklader, 495525248999XSЧеловеческое обоняние аромата розы с использованием биоэлектронного носа на основе обонятельного рецептора на основе нанодисков
Структура биоэлектронного носа, состоящего из нанодисков на основе hOR1A2 и транзистора на основе углеродных нанотрубок с плавающими электродами
На рисунке 1 представлена схематическая диаграмма, изображающая биоэлектронный нос, который был изготовлен путем гибридизации hOR1A2ND и транзистора на основе CNT с FE. Подробные экспериментальные процедуры описаны в разделе «Методы» и на рис. S1 (дополнительная информация). Вкратце, hOR1A2 был сверхэкспрессирован в E. coli и очищен с помощью аффинной хроматографии. Затем очищенные белки hOR1A2 были обернуты липидными бислоями и белками мембранного каркаса (MSP) для конструирования ND на основе hOR1A2. Приготовленные hOR1A2ND были избирательно иммобилизованы на плоских золотых ФЭ транзистора на основе УНТ. Здесь ФЭ золота были сначала функционализированы тиоловыми группами, а затем поверхности золота были функционализированы фрагментами половинного антитела (Ab) против v5 посредством дисульфидной связи 19,22 .Впоследствии hOR1A2ND были включены в ФЭ на основе золота. Наконец, CNT-FET несколько раз промывали раствором HEPES-буфера II для удаления несвязанных hOR1A2ND. Когда определенные ароматические вещества розы связывались с hOR1A2 на FE, проводимость канала CNT-FET была изменена, что позволило нам отслеживать ингредиенты аромата розы в режиме реального времени. В этой стратегии изготовления рецепторные молекулы, стабилизированные в структурах ND, были непосредственно и направленно иммобилизованы на плоской поверхности FE на основе золота с использованием хорошо известных надежных химических процессов, которые должны упростить химические процедуры и могут повысить надежность наших устройств по сравнению с предыдущими CNT. канальные сенсорные устройства 15,23 .Кроме того, мы можем воспользоваться преимуществами высокой чувствительности преобразователей на основе FE, как сообщалось ранее 21 . Наконец, поскольку молекулы hOR1A2 избирательно связываются с обычными молекулами запаха розы, такими как человеческий нос, мы можем ожидать, что наши сенсоры будут чувствовать запах розы, как люди.
Рис. 1Схематическая диаграмма, изображающая биоэлектронный нос, основанный на гибридизации нанодисков, залитых hOR1A2 (hOR1A2NDs), и CNT-FET на основе плавающего электрода, а также упрощенных сенсорных откликов биоэлектронного носа. HOR1A2ND были иммобилизованы на плавающих электродах на основе золота CNT-FET с использованием фрагментов половинного v5 Ab и тиоловых групп. Биоэлектронный нос может реагировать на общие ингредиенты аромата розы точно так же, как человеческий нос.
Характеристика hOR1A2, экспрессируемого в клетках HEK-293
Мы провели клеточные анализы, чтобы оценить активность связывания лиганда / рецептора hOR1A2 в клетках и сравнить ее с активностью связывания hOR1A2 в наших биоэлектронных носовых устройствах 24 .На рис. 2а показаны ответы hOR1A2 в клетках HEK-293 на различные виды одорантов с концентрацией 100 мкМ. Подробные процедуры клеточного анализа описаны в разделе «Методы». Вкратце, hOR1A2 и ген люциферазы сначала трансфицировали в клетки HEK-293. Когда произошло связывание специфических отдушек с hOR1A2 в трансфицированных клетках, конформация hOR1A2 была изменена, и была инициирована сигнальная трансдукция. Последовательно активировался путь циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) в клетках. Активированный путь цАМФ стимулировал белок, связывающий элемент ответа цАМФ (CREB), что приводило к экспрессии гена люциферазы 25 . Интенсивность люминесценции в клетках измеряли с использованием системы анализа люциферазы Dual-Glo после введения различных одорантов. Нормализованную интенсивность люминесценции рассчитывали путем нормализации ответов hOR1A2 на каждый одорант по отношению к положительному контролю (форсколин, FSK) в клетках HEK-293 (см. Подробности в разделе «Методы»).Линалоол, фенилэтанол и дамаскон обладают приятным цветочным запахом. Их часто используют для создания искусственного аромата розы с гераниолом и цитронеллолом. Геранилформиат и геранилхлорид имеют функциональные группы, отличные от гераниола. Октадиен и диметилоктанол имеют разное количество атомов углерода и двойных связей углерод-углерод по сравнению с гераниолом, соответственно. Клетки HEK-293, экспрессирующие hOR1A2, стимулированные гераниолом и цитронеллолом, имели гораздо более высокую интенсивность люминесценции по сравнению с теми, которые стимулировались другими одорантами. Эти результаты показывают, что hOR1A2 отличает специфические одоранты розы от других одорантов с высокой селективностью, указывая на то, что hOR1A2 хорошо экспрессируется и сохраняет свою функциональность в клетках.
Рисунок 2Характеристика hOR1A2, экспрессируемого в клетках HEK-293 и ND. ( a ) Специфичность hOR1A2 к гераниолу и цитронеллолу среди различных одорантов. Только стимуляция гераниолом и цитронеллолом вызывала в клетках HEK-293 ответы с hOR1A2 (** p <0.01, *** p <0,001) (n = 5). ( b ) Дозозависимые ответы hOR1A2, экспрессируемого в клетках HEK-293, при добавлении гераниола и цитронеллола. Клетки HEK-293, экспрессирующие hOR1A2, демонстрировали интенсивности люминесценции гераниола и цитронеллола с разными характеристиками (n = 5). ( c ) Изображение окрашивания геля с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинг очищенного hOR1A2, экспрессированного в E. coli . Полоса 34 кДа указывает молекулярную массу hOR1A2. ( d ) Изображение окрашивания геля SDS-PAGE и вестерн-блоттинг очищенного MSP1E3D1, экспрессированного в E.coli . Наблюдалась полоса 26 кДа, соответствующая молекулярной массе MSP1E3D1. ( e ) FE-SEM изображение hOR1A2ND, иммобилизованных на золотой подложке. НА были иммобилизованы равномерно на поверхности золота, их диаметр составлял от 15 нм до 20 нм. ( f ) Анализ распределения hOR1A2ND по размерам. Гели и блоты, представленные в ( c – d ), были вырезаны из разных изображений для повышения четкости. Черные линии, окружающие кляксы и гели, обозначают линии обрезки.Полноразмерные гели и блоты представлены на дополнительном рисунке S6.
На рис. 2b показаны дозозависимые ответы экспрессирующих hOR1A2 клеток HEK-293 на гераниол и цитронеллол. Ответы hOR1A2 в клетках HEK-293 на различные концентрации гераниола и цитронеллола измеряли с помощью системы анализа люциферазы аналогично тому, как показано на рис. 2а (см. Подробности в разделе «Методы»). Данные отклика были подогнаны с использованием уравнения Хилла для оценки констант диссоциации ( K d ) и коэффициентов Хилла.Клетки HEK-293, экспрессирующие hOR1A2, проявляли интенсивности люминесценции по отношению к гераниолу и цитронеллолу от концентраций 1 мкМ и 10 мкМ соответственно. Константы диссоциации ( K d ) hOR1A2 до гераниола и цитронеллола были рассчитаны как 3,24 × 10 −6 M и 1,45 × 10 −5 M, соответственно. Эти постоянные значения очень похожи на значения в других исследованиях с использованием систем на основе клеток млекопитающих 26,27 . Результаты предполагают, что функциональный hOR1A2 был успешно продуцирован в клетках HEK-293 при сохранении своей функциональности.Кроме того, мы можем видеть, что рецепторы в клетках проявляют большую реакцию на гераниол, чем цитронеллол, предположительно из-за более высокого сродства hOR1A2 к гераниолу, чем цитронеллол. Коэффициенты Хилла были оценены как 0,55 и 0,52 для гераниола и цитронеллола соответственно. Это указывает на то, что связывание гераниола и цитронеллола с hOR1A2 может рассматриваться как отрицательно кооперативное связывание 28 . Предыдущие работы показывают, что для большинства GPCR связывание одного лиганда с одним сайтом связывания вызывает структурные изменения соседних сайтов связывания, что может привести к более низкому сродству к другим лигандам, как наши результаты 29,30,31 .
Восстановление hOR1A2 в нанодиски
Для разработки биоэлектронных устройств для носа, пахнущих ароматом розы, мы экспрессировали hOR1A2 в E. coli и выполнили экстракцию и функциональную реконструкцию молекул hOR1A2 в растворе 19,32,33 . На фигуре 2c показано изображение окрашенного геля с электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) (слева) и вестерн-блоттинг-анализ (справа) очищенного hOR1A2, экспрессированного в E. coli .Для образования высококачественных рецепторных белков hOR1A2 был сверхэкспрессирован в E. coli , солюбилизирован и очищен с помощью аффинной хроматографии. Очистка и экспрессия hOR1A2 в E. coli были подтверждены методом SDS-PAGE и вестерн-блоттингом (подробности см. В разделе «Методы»). Полосы 34 кДа, которые соответствуют молекулярной массе hOR1A2, четко наблюдались. Эти результаты показывают, что hOR1A2 хорошо продуцировался в E. coli и был высокоочищенным.Следует отметить, что было очень сложно экспрессировать и очистить рецепторы, связанные с G-белком (GPCR) в гетерологичных клетках, особенно в E. coli , из-за их сложной структуры и гидрофобности. Такая трудность была камнем преткновения, сдерживающим практическое применение биосенсорных устройств на основе OR 34,35 . Учитывая, что об успешной экспрессии hOR1A2 в E. coli ранее не сообщалось, наши результаты могут быть прорывом и могут предоставить больше возможностей для биосенсоров и других приложений, требующих большого количества высококачественных белков OR, реагирующих на запах розы. .
Для обеспечения стабильной работы операционной на наших биоэлектронных носовых устройствах hOR1A2 был встроен в структуры ND. Во-первых, MSP1E3D1, который представляет собой MSP, полученный из аполипопротеина A-I у людей, был продуцирован и очищен для обертывания комплексов липид / рецептор 36 . На рис. 2d показано окрашенное в SDS-PAGE изображение геля (слева) и вестерн-блот-анализ (справа) очищенного MSP1E3D1. Экспрессия и очистка MSP1E3D1 были подтверждены способом, аналогичным показанному на фиг. 2c (см. Подробности в разделе «Методы»).Четко наблюдались толстые полосы около 26 кДа. Полосы соответствуют молекулярной массе MSP1E3D1. Это указывает на то, что MSP1E3D1 был сверхэкспрессирован, успешно продуцирован в растворимой форме и очищен с высокой чистотой. Поскольку сообщалось, что MSP1E3D1 может быть сверхэкспрессирован в E. coli , и его сверхэкспрессия позволяет ему эффективно оборачивать липидно-рецепторные комплексы 37 , наши результаты предполагают, что MSP1E3D1 был успешно сверхэкспрессирован для создания стабильных структур ND для развития биоэлектронных технологий. устройств.
Для создания ND, встроенных в hOR1A2, очищенный MSP1E3D1 добавляли к смеси hOR1A2 и липидов. Затем молекулы детергента из смеси были удалены с помощью Bio-beads. Очищенные hOR1A2ND были окончательно получены с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC). На рис. 2е показано изображение hOR1A2ND, внедренное на поверхность золота, полученное с помощью сканирующей электронной микроскопии (FE-SEM). Чтобы сохранить структуру hOR1A2ND, иммобилизованные на поверхности золота hOR1A2ND лиофилизировали с помощью сублимационной сушилки.Затем поверхность покрывалась платиной (5 нм) с помощью системы напыления. Диаметр hOR1A2ND составлял от 15 до 20 нм. Это ясно показывает, что мы успешно сконструировали hOR1A2ND с оптимизированными размерами и могли иммобилизовать их равномерно на золотых поверхностях.
Чтобы подтвердить распределение по размерам сконструированных hOR1A2ND, мы выполнили анализ динамического светорассеяния (ДРС) (рис. 2е). HOR1A2ND имели одинаковый диаметр от 15 до 20 нм с довольно узким распределением по размерам, аналогичным показанному на рис. 2e. Распределение размеров hOR1A2NDs также близко к NDs, содержащим другие GPCR, в предыдущих исследованиях 38,39 . Это означает, что hOR1A2ND могут быть успешно сконструированы в виде мономерных рецепторных форм и могут использоваться в качестве идеальной сенсорной единицы.
Электрические характеристики полевых УНТ-транзисторов
На рис. 3а показаны профили жидкостного затвора УНТ-транзистора на основе FE до и после иммобилизации hOR1A2ND. Токи исток-сток измерялись при напряжении смещения затвора от -0.От 4 В до 0,4 В при приложении напряжения смещения исток-сток 0,1 В. Токи исток-сток значительно уменьшились по мере увеличения приложенного напряжения затвора, что указывает на типичное поведение полупроводников p-типа устройства CNT-FET. Обратите внимание, что проводимость канала CNT-FET снизилась после иммобилизации hOR1A2ND, что может быть связано с отрицательно заряженными С-концами ND, иммобилизованных на FE 40 . Отрицательно заряженные НА снижают проводимость канала УНТ, что объясняется модуляцией барьера Шоттки на контактах УНТ-СЭ. Кроме того, следует отметить, что стробирующий эффект устройства CNT-FET сохранялся даже после иммобилизации hOR1A2ND, что указывает на то, что оно может быть подходящим для сенсорных приложений 41 .
Рисунок 3Данные электрических измерений биоэлектронных носов на основе ND. ( a ) Профили жидкостного затвора CNT-FET с плавающими электродами до и после иммобилизации hOR1A2ND. УНТ-полевой транзистор с плавающими электродами проявлял типичные полупроводниковые свойства p-типа, и его характеристики сохранялись после иммобилизации hOR1A2ND.( b ) Реакция биоэлектронного носа на различные виды одорантов в реальном времени. Добавление гераниола и цитронеллола в концентрациях 10 пМ вызывало значительное увеличение проводимости канала CNT-FET, в то время как добавление TMA и AB в концентрациях 10 пМ приводило к незначительным изменениям проводимости канала CNT-FET. ( c ) Реакции биоэлектронного носового устройства с hOR1A2ND или без них на различные концентрации гераниола в реальном времени. Введение гераниола привело к резкому увеличению проводимости канала биоэлектронного носа, в то время как значимого изменения проводимости в голом CNT-FET без ND не наблюдалось.( d ) Дозозависимые ответы биоэлектронных носов на гераниол и цитронеллол. Каждая точка и полоса ошибок представляют собой среднее значение и стандартное отклонение нескольких измерений зондирования соответственно. Биоэлектронные носы начали реагировать на гераниол с концентрацией 1 фМ, а ответы были почти насыщенными при концентрации около 1 мкМ. Биоэлектронные носы также давали отклик от цитронеллола в концентрации 10 фМ.
Электрические реакции биоэлектронных носов на гераниол и цитронеллол
На рисунке 3b показаны реакции биоэлектронных носов на различные пахучие вещества в реальном времени.Триметиламин (ТМА) и амилбутират (АВ) – это отдушки, образующиеся из испорченных морепродуктов и напоминающие абрикос, соответственно. При приложении напряжения исток-сток 0,1 В при добавлении различных одорантов наблюдались токи исток-сток. В этом сенсорном устройстве относительное изменение проводимости канала CNT-FET \ ({\ rm {\ Delta}} G / {G} _ {0} \) использовалось в качестве сигнала датчика, где \ ({\ rm {\ Delta }} G \) и \ ({G} _ {0} \) – это изменение проводимости на и исходная проводимость на CNT-FET, соответственно.Введение растворов гераниола и цитронеллола с концентрацией 10 пМ вызывало значительное увеличение проводимости канала УНТ. Однако введение ТМА и АБ в одинаковых концентрациях вызывало незначительные изменения. Этот результат показывает, что наш биоэлектронный нос может очень избирательно отличать запах розы от других запахов.
На рис. 3c показаны типичные реакции биоэлектронного носа с hOR1A2ND или без них на различные концентрации гераниола в водной среде в реальном времени.Токи исток-сток измеряли при добавлении растворов гераниола различной концентрации. Добавление растворов гераниола вызывало немедленное увеличение проводимости CNT-FET с hOR1A2ND в зависимости от дозы, в то время как чистый CNT-FET без hOR1A2ND не демонстрировал изменений проводимости даже после добавления гераниола. Мы могли получить подобный избирательный ответ, когда цитронеллол применялся к устройствам CNT-FET с или без hOR1A2ND (рис. S2 в дополнительной информации).Результат ясно показывает, что сенсорные реакции возникли в результате специфического связывания запахов розы и hOR1A2. Такой специфический ответ можно объяснить изменением электрических зарядов в hOR1A2, вызванным избирательным связыванием молекул пахучих веществ розы. Вкратце, специфическое связывание молекул ароматизатора розы с hOR1A2 вызвало конформационное изменение рецептора, что привело к изменению электрических зарядов в нем 14 . Впоследствии измененное зарядовое состояние молекулы рецептора приведет к увеличению проводимости канала CNT за счет модуляции барьера Шоттки на контактах CNT-FE 20,21 .Этот результат показывает, что наш метод может позволить нам очень чувствительно обнаруживать определенные запахи розы в режиме реального времени.
На рис. 3d показаны нормализованные сигналы датчиков наших биоэлектронных носов на гераниол и цитронеллол с различными концентрациями. Нормализованные сигналы были рассчитаны путем нормализации сигналов датчиков относительно их максимальных значений сигналов датчиков в условиях высокой концентрации 21,42,43 . Измерение при одной концентрации проводилось многократно с использованием нескольких биоэлектронных носов для получения средних значений и стандартных ошибок.Результат показывает кривые отклика, аналогичные кривым отклика других биоэлектронных носовых устройств, о которых сообщалось ранее 18,41 . В случае гераниола наши биоэлектронные носы начали показывать отклики от концентрации 1 фМ (отношение сигнал / шум ~ 4,4, рис. S3a в дополнительной информации), и отклики были почти насыщенными около 1 мкМ. Для цитронеллола биоэлектронные носы показали отклики от концентрации 10 фМ (отношение сигнал / шум ~ 5,5, рис. S3b в дополнительной информации).Эти результаты показывают, что наши биоэлектронные носы могли обнаруживать запахи розы с высокой чувствительностью и отличать один запах розы от другого. Стоит обсудить влияние возможных примесей в химических веществах, используемых в наших экспериментах, потому что при такой низкой целевой концентрации влияние примесей на сигналы датчиков может быть сопоставимо с воздействием целевых молекул. Во-первых, в наших экспериментах содержание примесей в целевых химикатах, содержащих целевые молекулы, было менее 5%.Кроме того, когда целевые химические вещества были разбавлены до более низких концентраций, их примеси также должны быть разбавлены в той же пропорции. Следовательно, даже если биоэлектронные носы стимулировались целевыми химическими веществами с очень низкой концентрацией, примеси не должны сильно влиять на сигналы восприятия. С другой стороны, концентрации примесей в буферном растворе HEPES, который использовался в качестве растворителя для приготовления целевых растворов, должны были оставаться идентичными даже в целевых растворах с очень низкой целевой концентрацией.Однако мы обнаружили, что наши биоэлектронные носы не реагируют на буферный раствор HEPES без каких-либо целевых молекул, что указывает на то, что влияние примесей не является значительным даже в целевом растворе с очень низкой целевой концентрацией. {n}} $$
(1)
C – концентрация нанесенного одоранта , а K – константа равновесия для связывания одорантов с hOR1A2 .\ ({C} _ {s \ _max} \) обозначает плотность hOR1A2 на FE , а n представляет коэффициент Хилла . Если предположить, что изменение проводимости \ ({\ rm {\ Delta}} G \) почти линейно пропорционально количеству адсорбированных молекул одоранта, сигнал датчика \ (| {\ rm {\ Delta}} G / {G} _ { 0} | \) можно упростить как \ (| {\ rm {\ Delta}} G / {G} _ {0} | \ sim k {C} _ {s} \). Здесь k представляет собой константу, обозначающую характеристики отклика биоэлектронного носа. Сигнал датчика \ (| {\ rm {\ Delta}} G / {G} _ {0} | \) сходится к максимальному значению \ (\, k {C} _ {s \ _max} \) как C становится очень большим.{n}} $$
(2)
Экспериментальные данные были подогнаны по формуле. (2), а константы равновесия гераниола и цитронеллола до hOR1A2 были оценены как 8,37 × 10 11 M -1 и 2,60 × 10 6 M -1 , соответственно. Обратите внимание, что константа равновесия гераниола оказалась в ~ 10 5 раз больше, чем у цитронеллола. Результаты предполагают, что гераниол может быть более сильным ароматом розы, чем цитронеллол, что согласуется с результатом с использованием клеток на рис.2b. Однако результаты показывают, что наши биоэлектронные носы реагировали на гораздо более низкие концентрации гераниола и цитронеллола, чем в случае клеточных анализов на рис. 2b. Предположительно, это связано с тем, что наше устройство могло напрямую измерять конформацию рецепторных белков без каких-либо промежуточных биологических этапов, в то время как клеточные анализы основывались на сложных этапах передачи сигнала, основанных на множественных биологических процессах, вызванных связыванием пахучих молекул с рецепторами 44,45 , 46,47 .Промежуточные этапы клеточных анализов требуют нескольких различных материалов, помимо запахов розы, для генерации сенсорных сигналов, что могло бы привести к гораздо более низкой чувствительности, чем биоэлектронные носы 34 . Аналогичные тенденции наблюдались и в отношении других биоэлектронных устройств 21,42 . Коэффициенты Хилла n были оценены как 0,26 и 0,30 для гераниола и цитронеллола, соответственно. Это также указывает на отрицательно кооперативное связывание гераниола и цитронеллола с hOR1A2 на биоэлектронных носах 48 .Обратите внимание, что коэффициенты Хилла в биоэлектронных носах были меньше, чем в клеточных анализах, как показано на рис. 2b. Предположительно, это из-за возможной агрегации и стерических затруднений рецепторных белков на наших биоэлектронных носовых устройствах 48 . Поскольку наш метод основан на этих биоэлектронных носах, он может быть чувствительной платформой для разностороннего использования, такого как разработка новых ароматов.
Измерение влияния усилителя запаха на оценку ингредиентов аромата розы
Предыдущие работы показывают, что вещества-усилители, такие как бензилсалицилат, который в природе встречается в различных растениях, могут усилить богатство и глубину цветочных композиций 49,50 .Однако действие таких энхансеров ранее не оценивалось количественно. Здесь мы сначала выполнили клеточные анализы, чтобы выяснить, влияет ли энхансер на ответы hOR1A2 в клетках. На фигуре 4а представлены результаты клеточного анализа, показывающие ответы hOR1A2 на гераниол с усилителем, бензилсалицилатом или без него. Вкратце, экспрессирующие hOR1A2 клетки HEK-293 активировались различными концентрациями гераниола в бензилсалицилате. При нанесении 0,1 мкМ бензилсалицилата было обнаружено, что ответы hOR1A2 на 1 , 10 и 1 00 мкМ гераниол усиливаются на 1.63 раза , 1,76 раза и 1,48 раза по сравнению с теми, у кого нет энхансера, соответственно. Аналогичным образом, бензилсалицилат с концентрацией 1 мкМ привел к в 2,14 раза к , в 2,09 раза к и к 1,52-кратному усилению в ответах hOR1A2 на 1 , 10 и 100 мкМ герани , соответственно. Кроме того, один бензилсалицилат не стимулировал hOR1A2. Эти результаты предполагают, что бензилсалицилат может усиливать реакцию OR на их молекулы цветочного аромата и, таким образом, обеспечивает им низкие пороги обнаружения.Предыдущие работы показывают, что ответы некоторых OR на их пахучие вещества могут быть усилены материалами-усилителями, такими как бензилсалицилат, через механизм аллостерической модуляции 51,52 . Насколько нам известно, этот результат является первой демонстрацией того, что бензилсалицилат может сильно усиливать ответы клеток, экспрессирующих OR, на конкретный одорант.
Рисунок 4Влияние бензилсалицилата в качестве усилителя на оценку гераниола с использованием hOR1A2-экспрессирующих клеток HEK-293 и биоэлектронных носов.( a ) Нормализованные интенсивности люминесценции hOR1A2 по отношению к гераниолу и бензилсалицилату в клетках HEK-293. Клетки HEK-293, экспрессирующие hOR1A2, были активированы гераниолом с изменяющимися концентрациями бензилсалицилата (0, 0,1, 1 мкМ) или без них. Ответы hOR1A2 на гераниол усиливались бензилсалицилатом (* p <0,05, ** p <0,01) (n = 5). ( b ) Нормализованные сигналы биоэлектронных носов при различных концентрациях гераниола в присутствии и в отсутствие 1 нМ бензилсалицилата.Каждая точка и полоса ошибок представляют собой среднее значение и стандартное отклонение для нескольких экспериментов соответственно. Константа равновесия между hOR1A2 и гераниолом в отсутствие бензилсалицилата была оценена как 8,37 × 10 11 M -1 . В присутствии бензилсалицилата расчетная константа равновесия между hOR1A2 и гераниолом оказалась равной 1,64 × 10 15 M -1 .
Мы также исследовали влияние усилителя на оценку гераниола с помощью наших биоэлектронных носов.На рисунке 4b показаны нормализованные сигналы наших биоэлектронных носов на гераниол с 1 нМ бензилсалицилатом или без него. Сначала мы приготовили смесь гераниола и бензилсалицилата, поддерживая концентрацию бензилсалицилата на уровне 1 нМ и варьируя концентрации гераниола от 10 до 10 нМ. Каждая точка данных была получена путем многократных измерений с использованием четырех или более биоэлектронных носовых устройств. Обратите внимание, что кривая нормализованного сигнала в присутствии бензилсалицилата была смещена в области более низких концентраций, что указывает на то, что биоэлектронные носы начали проявлять ответы при гораздо более низких концентрациях гераниола, чем в случаях без усилителя.Мы также подтвердили, что бензилсалицилат сам по себе не реагировал на датчик УНТ на основе чистого FE (рис. S4 в дополнительной информации). Следуя уравнению Хилла-Ленгмюра, как описано выше, мы могли оценить константы равновесия между hOR1A2 и гераниолом с бензилсалицилатом или без него. В присутствии 1 нМ бензилсалицилата константа равновесия между hOR1A2 и гераниолом была оценена как 1,64 × 10 15 M -1 , а без усилителя – 8 .37 × 10 11 M −1 в разрезе рис. 3d. Эти результаты ясно показывают, что бензилсалицилат вносит значительный вклад в усиление ответов hOR1A2 на гераниол и, таким образом, снижает пороги связывания между hOR1A2 и гераниолом. Это первое сообщение, показывающее, что бензилсалицилат в качестве усилителя может влиять на сродство связывания рецептора на биоэлектронных устройствах. Также следует отметить, что, поскольку наш метод напрямую измерял ответы рецепторов, не полагаясь на сложные сигнальные пути, такие как клеточные анализы, он может быть мощным методом для количественной оценки влияния материалов-энхансеров на связывание молекул пахучих веществ розы с рецепторами.Такие возможности нашего метода могут открыть широкие возможности для применения в различных областях, таких как фармацевтическая, пищевая и косметическая промышленность.
Количественное определение ингредиентов аромата розы в натуральном розовом масле
Продукты розового масла, полученные из роз, использовались в качестве базовых материалов для различных применений, таких как духи 53,54,55 . В этом случае может быть важна количественная оценка ингредиентов аромата розы в розовом масле, поскольку передозировка ингредиентов может привести к неприятным запахам 56 .Чтобы продемонстрировать пригодность нашего метода для практического применения, мы провели эксперименты по количественной оценке ингредиентов аромата розы в натуральном розовом масле, используя наш метод. На рис. 5а показаны реакции биоэлектронного носа на различные концентрации натурального розового масла в режиме реального времени. Растворы розового масла были приготовлены путем разбавления исходного раствора натурального розового масла буфером HEPES II (подробности см. В разделе «Методы»). Разбавленные растворы розового масла последовательно вводили в биоэлектронный нос, и одновременно отслеживали его реакцию.Розовое масло, разбавленное 10 -11 , вызывало незначительные отклики в проводимости биоэлектронного носа. Однако те, что разбавлены 10 -10 и 10 -9 , привели к значительному увеличению проводимости канала CNT-FET. Этот результат ясно показывает, что биоэлектронный нос может обнаруживать специфические соединения розы в реальных образцах, таких как натуральное розовое масло.
Рисунок 5Количественное измерение ингредиентов аромата розы в натуральном розовом масле с использованием биоэлектронных носов.( a ) Реакция биоэлектронного носа на различные концентрации натурального розового масла в реальном времени. Введение раствора розового масла, разбавленного 10 -11 , вызывало незначительные отклики в проводимости биоэлектронного носа. Растворы розового масла, разбавленные 10 -10 и 10 -9 , вызвали значительное увеличение проводимости канала CNT-FET. ( b ) Нормализованный сигнал биоэлектронных носов для растворов натурального розового масла, разбавленных от 10 −11 до 10 −5 .Ось абсцисс (об. / Об.) Представляет объем / объемный процент натурального розового масла в буферном растворе HEPES. Мы повторили измерение с помощью четырех или более биоэлектронных носов, чтобы получить средние значения и стандартное отклонение.
На рис. 5b показан нормализованный сигнал биоэлектронных носов к натуральному розовому маслу, разбавленному до различных концентраций. Исходный раствор розового масла последовательно разбавляли буфером HEPES II для приготовления растворов розового масла, разбавленных от 10 -11 до 10 -5 .Мы получили нормализованный сигнал биоэлектронных носов к разбавленным растворам розового масла, подобрав данные отклика таким же образом, как показано на рис. 3d. Мы повторили измерения для четырех или более биоэлектронных носов для получения количественных результатов. Поскольку биоэлектронные носы обнаруживают общие виды, которые связываются с hOR1A2, наша стратегия может эффективно оценивать общие ингредиенты, дающие аромат розы. Мы подтвердили, что гераниол может быть более доминирующим в отношении hOR1A2, чем цитронеллол, по результатам рис. 2b и 3d.То есть hOR1A2 биоэлектронного носа в основном отвечает на гераниол. Это указывает на то, что гераниол может играть доминирующую роль в ответах биоэлектронных носов на натуральное розовое масло 57,58 . Затем мы могли оценить концентрацию гераниола в неразбавленном растворе розового масла, сравнив K розовое масло с K гераниол , где K розовое масло и K гераниол – константы диссоциации hOR1A2 до разбавленного розового масла и гераниола, соответственно. K розовое масло оказалось равным 1,62 × 10 −9 от нормализованного сигнала биоэлектронных носов к разбавленным растворам розового масла. Аналогичным образом, гераниол K был рассчитан как 1,19 × 10 −12 M по данным в разделе фиг. 3d. На основе сравнения K розового масла до K гераниола , мы могли оценить концентрацию гераниола в неразбавленном розовом масле как около 7.35 × 10 -4 М. Это значение довольно близко к концентрации гераниола, оцененной методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС) (рис. S5 в дополнительной информации). Концентрация гераниола в неразбавленном розовом масле была оценена как 9,47 × 10 -4 М с помощью анализа ГХ-МС. Это означает, что аффинность связывания hOR1A2 с гераниолом может быть несколько недооценена в сложных средах, содержащих различные химические вещества, которые могут привести к более низкой эффективной концентрации гераниола на рецепторе 59 .Этот результат ясно показывает, что биоэлектронные носы могут распознавать гераниол в сложных средах, таких как настоящее розовое масло. Кроме того, этот результат указывает на то, что биоэлектронный нос можно использовать для практических приложений, которые могут открыть различные приложения, такие как стабильная и надежная сенсорная платформа.
Таким образом, мы разработали биоэлектронный нос на основе обонятельных рецепторов ND, который может чувствовать запах ингредиентов аромата розы в реальных образцах, как человеческий нос. В этом методе мы напрямую включили hOR1A2ND на золотые FE транзистора на основе УНТ.События связывания между hOR1A2ND и специфическими компонентами аромата розы контролировались электрически с помощью нижележащего CNT-FET. Используя этот метод, мы смогли количественно распознать гераниол и цитронеллол до 1 и 10 фМ соответственно. Кроме того, метод позволил отличить конкретный запах розы от других одорантов с высокой селективностью. Наиболее примечательно то, что наши сенсоры использовались для исследования влияния усилителя запаха на реакцию ОР, и мы обнаружили, что ОР в присутствии 1 нМ бензилсалицилата реагировали на запах розы с концентрациями в ~ 10 3 раз ниже.Кроме того, этот метод облегчил количественное определение запахов розы в настоящем розовом масле, как в человеческом носу. Эти результаты ясно показывают, что эта стратегия может стать простым, но мощным стимулом для фундаментальных исследований и различных применений в парфюмерной и косметической промышленности.