Электрод мр 3 характеристика: Сварочные электроды МР-3. Описание, характеристики

Содержание

Какие характеристики сварочных электродов МР 3?

Многие профессиональные сварщики знают, что для сварки низколегированных видов стали прекрасно подходят электроды МР 3. По сравнению с другими электродами, они имеют высокие сварочно-технологические показатели. В это же самое время они полностью соответствуют ГОСТу и требованиям мирового рынка. В целом, самой главной положительной чертой электродов МР 3 является их высокая производительность.

У электродов МР 3 есть свои отличительные черты, которое доказывают правильность их использования при сваривании. Они могут производить сварку как большой, так и средней толщины, а самым оптимальным вариантом для использования является средняя и короткая длина дуги. Предварительная прокалка электродов должна происходить при температуре 170 – 210 градусов по Цельсию в течение не более одного часа.

Электроды МР 3 относятся к тому типу электродов, которые могут работать как от источников постоянного тока, так и от источников переменного тока. Также ими можно варить во всех пространственных положениях. Помимо такого множества положительных качеств, МР 3 способствуют легкости и простоте сваривания потолочных швов и прихваток.

Также эти электроды широко применяются при сваривании водопроводных труб. Их отличительной особенностью является отличное отделение шлаков, что очень нравится многим сварщикам, ведь в этом случае не нужно прилагать больших усилий при снятии шлаков с изделия.

Львиной долей своих прекрасных особенностей электроды МР 3 обязаны своему специальному химическому составу обмазки. Это также обеспечивает формирование хорошего обжима дуги и постоянство горения, независимо от того как происходит сваривание: прихватками или же в движении. К примеру, они могут работать с сильно окисленными поверхностями. Их коэффициент наплавки составляет около 8 г/Ач. В основном покрытие данных электродов состоит из серы, кремния, углерода, фосфора и марганца. Средний диаметр электродов МР 3 составляет от 2,5 до 6 миллиметров. Такой диапазон толщины электродов позволяет Вам подобрать самые удобные электроды для сваривания высокого качества.

Электроды МР 3 могут работать от источника питания 50 Вольт. Найти такой источник питания или изобрести самому Вам не составит большого труда. При всех этих положительных качествах цена за килограмм не поднимается сильно высоко. Купить электроды МР 3 Вы можете, как и на просторах Сети, так и в специализированных магазинах, которые продают сварочное оборудование. Самым правильным решением будет покупка электродов высокого качества прямо у завода-изготовителя. Это будет для Вас самым выгодным вариантом потому что, таким образом, Вы будете избегать накруток от перекупщиков их магазинов. Для того чтобы совершить выгодную покупку Вам нужно всего лишь перейти на специальную страницу нашего сайта «Контакты». Там Вы без проблем сможете найти ссылки, ведущие на сайты заводов-изготовителей электродов и сварочного оборудования.


Сварочные электроды МР – 3 ф 2,5 – 1 кг

Сварочные электроды МР – 3 ф 2,5 – 1 кг – Описание товара

Купить сварочные электроды МР – 3 ф 2,5 – 1 кг

КЛАССИФИКАЦИЯ: Э46 по ГОСТ 9467-75

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: Э46 – МР-3 – Ø – УД 
                                                        Е 430 (3) – Р26

ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ: ГОСТ 9466-75 и ТУ РБ 100034500.010-2005

ПОКРЫТИЕ: рутиловое

НАЗНАЧЕНИЕ:

Электроды предназначены для сварки рядовых и  ответственных конструкций из углеродистых сталей во всех пространственных положениях шва, кроме вертикального «сверху-вниз», переменным и постоянным током обратной полярности.

 

ХАРАКТЕРИСТИКА ЭЛЕКТРОДОВ:

горение дугиустойчивое;
степень разбрызгиваниямалая
формирование швахорошее;
отделимость шлаковой коркинормальная
склонность металла шва к образованию порнизкая;
коэффициент наплавки (в нижнем положении шва)8,0-9,0 г/А-ч;
производительность наплавки (для электрода диаметром 4,0 мм)1,2-1,6 кг/ч;
расход электродов на 1 кг наплавляемого металла1,7 кг;
коэффициент разбрызгивания2,0-5,5

 

Типичные механические свойства металла шва (при нормальной температуре):

Временное сопротивление, МПа

Предел текучести, МПа

Относительное удлинение, %

Ударная вязкость Дж/см2

480

390

22

90

 

Типичный химический состав наплавленного металла:

Содержание элементов, %

углерод

марганец

кремний

сера

фосфор

0,07-0,12

0,40-0,85

0,07 – 0,20

не более 0,040

не более 0,045

 

УКАЗАНИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ:

В случае превышения допустимого содержания влаги в покрытии (1,5 %) электроды перед использованием дополнительно прокаливаются при температуре 140-160 °С в течении 60 минут.

 

РЕЖИМЫ СВАРКИ:

Диаметр электрода, мм

Сила сварочного тока, А

Положение шва

нижнее

вертикальное

потолочное

3

70-100

60-90

60-90

4

100-150

90-140

90-140

5

150-200

140-180

 

Сварку конструкций средних и больших толщин в нижнем положении производят на повышенных режимах с наклоном электрода в сторону направления сварки (углом назад).

Электроды МР3, МР4, МР5 оптом от 500 кг

Электроды МР 3 получили самое большое распространение среди других марок сварочных электродов.

Часто электроды марки МР-3 называют, в зависимости от диаметра, электродами МР4 или электродами МР5. Но это не совсем корректно. Правильнее называть, например: “электроды марки МР-3 диаметром 3 миллиметра” или “электроды МP-3 ф 5,0 мм.”. В любом случае, наши специалисты, конечно, поймут вас и предложат необходимую вам марку электродов.

Основное назначение: сварка ответственных металлоконструкций из низколегированных и углеродистых марок стали. При сварочных работах они обеспечивают непрерывность дуги, равномерность шва и его повышенную прочность.

Тип тока: переменный или постоянный.

Электроды МР-3М – разновидность электродов МР-3, которые имеют ильминитовое покрытие.

Параметры электродов, область применения, а также механические свойства металла сварного шва указаны в таблицах:

Марка электродов МР-3 ГОСТ 9466-75
ТУ 36.23.25-007-90
Назначение Для сварки ответственных конструкций из углеродистых сталей с содержанием углерода до 0,25%

Диаметр, мм

2,0
2,5
3,0

3,25
4,0
5,0

Длина электрода, мм

300;350
300;350
350

300;350
450
450

Механические свойства, не менее
металл шва
сварное соединение
предел прочности, Мп (кгс/мм2) относительное удлинение, % ударная вязкость, Дж/см2 (кгс/см2) предел прочности, Мп (кгс/мм2) Угол загиба, град.
450(46) 18 78(8) 450(46) 150
Массовые доли элементов, % в наплавленном металле
углерод,
не более
кремний марганец никель
молибден
сера,
не более
фосфор,
не более
0,08
0,12 (для диаметра 2,5)
0,07-0,2 0,5-0,8 0,04 0,045
Рекомендуемый ток Положение шва в пространстве
ток постоянный и переменный

Кроме электродов обычного серого цвета, наша организация предлагает и электроды синего цвета. По своим характеристикам они не отличаются.

Форма выпуска: картонные пачки по 1-5кг, деревянные короба по 1 тн.

Продажа сварочных электродов для ручной дуговой сварки МР 3 оптом от 500 кг до вагонных партий.

Следующая > Электроды УОНИ 13 55 постоянного тока

Сварочные электроды МР-3

Электроды данной марки являются очень популярными и востребованными на предприятиях по сборке различных конструкций и в домашнем хозяйстве. Они снискали большую популярность благодаря высокому качеству и приемлемой цене.

С помощью сварочных электродов “МР-3” производятся работы по ручной дуговой сварке. Их можно применять для сталей с небольшим количеством легирующих компонентов. Полученный шов будет иметь высокую прочность и отличные механические свойства.

“МР-3” полностью соответствуют ГОСТу Э46 и сертификатам качества, действующим на территории нашей страны, а также за рубежом. Модель производится различными компаниями, которых насчитывается около двух десятков. Наиболее известные из них — это ЛЭЗ, Бор, СпецЭлектрод, Эсаб.

Благодаря данным стержням можно добиться не только высокого качества соединений, но также увеличить производительность труда. Работать электродами “МР-3” очень удобно и легко. Дуга загорается быстро, как при первом зажигании, так и при повторном. Шов получается равномерным и прочным. Благодаря простоте работы, со стержнями могут справиться даже неопытные сварщики, которые только учатся работать.

Стабильное горение дуги позволяет сделать сварку равномерной и простой.

Содержание статьи:

Характеристики электродов

Давайте рассмотрим некоторые параметры изделия:

  • наплавка: 8,5 г/Ач;
  • расход: 1,7 кг на 1 кг наплавленного металла;
  • покрытие: рутил;
  • диаметр: 3 — 5 мм.

Электроды могут использоваться во всех положениях, кроме “сверху-вниз”. На них может подаваться как постоянный, так и переменный ток.

Перед применением электродов, необходимо подготовить свариваемые поверхности. На них не должно быть ржавчины, окалины или влаги. Если подготовка проведена плохо, это может повлиять на качество соединения.

Большим преимуществом “МР-3” является небольшое разбрызгивание металла при варке. Также следует отметить, что образуемый шлак отделяется очень легко. Это даст возможность значительно сократить время работы и соответственно повысить эффективность труда.

В зависимости от диаметра стержней, необходимо по разному настраивать силу тока. Вот какие значения рекомендуется использовать для нижнего положения:

  • 3 мм: 100 — 140 А;
  • 4 мм: 160 — 220 А;
  • 5 мм: 170 — 260 А;
  • 6 мм: 300 — 360 А.

Для вертикального положения:

  • 3 мм: 80 — 110 А;
  • 4 мм: 140 — 180 А;
  • 5 мм: 160 — 200 А.

Потолочное положение:

  • 3 мм: 80 — 120 А;
  • 4 мм: 140 — 180 А.

Использование и правила хранения

Электроды “МР-3” поставляются в 3 цветах. Чаще всего производители выбирают красную обмазку. Однако вам могут встретиться также синие и серые стержни. Это не влияет на качество электродов — меняется только внешний вид.

Изделия поставляются в упаковках по 1, 2,5, и 5 кг. Они оборачиваются в специальную пленку, защищающую от влаги. Но таких мер недостаточно. Электроды следует беречь от излишнего увлажнения и загрязнения. Помещение, где вы будете их хранить, должно быть сухим. Температура в нем не должна быть ниже 15°С.

Обратите внимание, что электроды должны быть хорошо защищены от механических воздействий.

Если вышло так, что на электроды попала жидкость, их необходимо прокалить и только затем использовать. Делается это при помощи специальной печи разогретой до 180°С. Поместите стержни в нее на один час. После этого они будут готовы к работе.

Сварку можно вести как длинной дугой, так и с отрывом. Электроды отлично подходят для установки прихваток.

Заключение

Электроды “МР-3” являются очень популярными и известными среди сварщиков. Они могут использоваться для большого круга работ и в целом универсальны. Заводы изготовители данных стержней предлагают потребителям выгодную цену и хорошее качество. Из-за этого данные расходники приобретаются как частниками, так и промышленными предприятиями для работы на сложных производствах. Если вы хотите купить качественные и недорогие электроды, то “МР-3” — это то, что вам надо.

 

технические характеристики и особенности сварки

Для создания соединительного шва между углеродистыми сталями методом дуговой сварки можно использовать различные марки электродов. Однако специалисты считают оптимальным выбором именно МР-3. Они рассчитаны для работы в различных условиях и при соблюдении технологии процесса позволяют обеспечить качественный бездефектный шов.

Конструкция и материал изготовления

Электроды марки МР-3 изготавливаются из проволоки различного диаметра. На поверхность каждого изделия наносят рутиловое покрытие. Длина изделия может варьироваться от 300 до 450 мм, а наружный диаметр – от 2 до 6 мм.

Благодаря такой конструкции с помощью электродов этого типа можно выполнять сварочные работы по неочищенным поверхностям и с частичной ржавчиной. Однако при хранении нужно следить за соблюдением показателя влажности. Если рутиловое покрытие будет иметь этот показатель свыше 1,5%, то перед применением необходимо предварительно выполнить прокаливание их поверхности в течение 60 мин при температуре до 180°С.

Во время работы следует учитывать номинальные характеристики сформированного сварочного шва. Если было выполнено соблюдение технологии сварки, то оптимальное сопротивление разрыву будет составлять 46 кгс/мм². При этом коэффициент наплавки шва не должен превышать показатель 8,5 г/А*ч. Для подсчета количества штук следует учитывать массу наплавки во время сварки. Для МР-3 она составляет порядка 1,7 кг/час.

Этот вид электродов рассчитан для работы практически во всех положениях, за исключением вертикального сверху вниз. Во время работы нужно учитывать относительно легкое начальное зажигание. Этот же показатель можно отнести и к повторному зажиганию сварочной дуги. Процесс сварки характеризуется небольшим объемом разбрызгивания расплавленного металла. После окончания работ удаление шлака со сварной поверхности происходит легко, без применения дополнительных усилий.

Технические характеристики

При приобретении электродов МР-3 следует проверить их соответствие нормированным документам. Данные изделия должны производиться согласно ГОСТ 9467-75 и ТУ 1272-99-00187211-2001. Эти данные указываются на упаковке с изделиями. Электроды предназначены для формирования сварного шва между металлами, у которых содержание углерода не превышает показатель 0,25%.

Выбор определенного типа изделий по геометрическим параметрам зависит от показателя сварочного тока.

Хорошие механические свойства объясняются довольно плотным рутиловым слоем. Отношение диаметра стального стержня к размеру рутила составляет 1,2. Именно благодаря этому изделие можно применять при сварке ответственных конструкций.

Этот тип электродов рассчитан на широкий спектр сварочных работ. При соблюдении технологии изготовления их характеристики будут соответствовать нормированным. Поэтому во время покупки нужно обращать внимание на качество упаковки и завод-изготовитель. От последнего во многом зависит качество электродов МР-3.

Сварочные электроды МОНОЛИТ: РЦ, МР-3 АРС, УОНИ-13/55 ПЛАЗМА –

Сварочные электроды МОНОЛИТ РЦ

Назначение и область применения

Электроды МОНОЛИТ РЦ являются универсальными и подходят как для промышленного применения, так и для использования в быту. Основное предназначение изделий – это ручная дуговая сварка на переменном и постоянном токе. Использовать электроды можно в любых пространственных положениях (исключением является положение «сверху-вниз» при диаметре электрода 5.0 мм). Работать можно с ответственными и рядовыми конструкциями из низкоуглеродистой стали, стандартов ДСТУ 2651/ГОСТ 380 (Ст 0, Ст 1, Ст 2, Ст 3 всех групп А, Б, В и всех степеней раскисления – “КП”, “ПС”, “СП”) и ГОСТ 1050 (05кп, 08кп, 08пс, 08, 10кп, 10пс, 10, 15кп, 15пс, 15, 20кп, 20пс, 20).

Условия применения

Электрод имеет коэффициент наплавки равный 8.5-9.5 г/А.ч. При этом расход на один килограмм наплавляемого металла составит 1.75 кг электродов.

МОНОЛИТ РЦ – это электроды, которые подходят для работы с угловыми, стыковыми и нахлесточными соединениями. Толщина металла может быть от 3-х до 20-ти мм.

Особенность электродов в том, что они не требуют тщательной подготовки поверхности. Им не страшны ржавчина и загрязнения.

Выполнение монтажной сварки допускает работу в разных пространственных положениях. Необходимости менять сварочный ток не возникает. Для сварки вертикальных швов методом «сверху-вниз» необходимо опирание или использование короткой дуги. Во время сварки шлак не должен затекать впереди дуги. Чтобы этого не допускать следует контролировать угол подъема (оптимальное положение 40–70 градусов). Если это нижнее положение, то электрод следует наклонять по направлению сварки на 20–40 градусов.

Химический состав наплавленного металла, %

Mn

Si

C

P

S

 0,40-0,65 

 0,15-0,40 

не более

 0,11 

 0,035 

 0,030 

Механические свойства металла ШВА

Временное сопротивление, Н/мм2

Относительное удлинение, %

Ударная вязкость,Дж/см2

≥450

≥22

≥78

Особые свойства

Отличительная особенность продукции МОНОЛИТ РЦ в невысокой интенсивности образования аэрозоля и марганца при сварке. Благодаря этому товар выгодно отличается от электродов других марок. Достигнуть такого результата разработчикам удалось за счет правильного подбора сырья и тщательного контроля над технологическим и производственным процессом.

Высокие показатели качества не раз были отмечены ведущими научными институтами страны. Именно электроды МОНОЛИТ РЦ вырабатывают на 30 % меньше марганца и на 28 % меньше вредных веществ в аэрозоле.

Продукция МОНОЛИТ РЦ обеспечивает легкое начальное и повторное зажигание, а также стабильное и мягкое горения дуги. При использовании электродов данной марки удается снизить потери металла в результате разбрызгивания. Удается достичь великолепного качества шва, равномерного плавления покрытия и хорошей отделимости корки шлака.

При использовании электродов МОНОЛИТ РЦ проводить сварку можно даже на предельно-низких токах. Если речь идет об использовании изделий небольшого диаметра, то для них источником питания способна стать обычная бытовая сеть.

Обращаться с электродами очень просто. Работать с ними смогут даже молодые специалисты.

При сгибании электрода не происходит разлома обмазки. По этой причине их удобно применять для сварки в труднодоступных местах.

Изделия допускается использовать при соединении металла с окрашенными, масляными и окисленными поверхностями.

Режимы сварки

Сила сварочного тока (А), для электрода диаметром, мм

2,0

2,5

3,0

3,2

4,0

5,0

40-80

50-90

70-110

80-120

110-170

150-220

Для сварки допускается использование постоянного тока любой полярности (желательная полярность электрода обратная «+», либо переменный ток трансформатора при напряжении холостого хода более 50 В.)

Упаковочные данные

Диаметр, мм

Длина, мм

Количество электродов в пачке, шт.

Вес пачки, кг

2,00

300

50-54; 99-108

0,5; 1

2,50

350

27-28; 53-56; 133-140

0,5; 1; 2,5

3,00

350

18-19; 35-37; 89-93

0,5; 1; 2,5

3,20

350

16; 32; 78-81

0,5; 1; 2,5

4,00

450

8; 16-17; 40-41; 81-83

0,5; 1; 2,5; 5

5,00

450

53-54

 5

Аналоги

Производитель

Марка электродов

ESAB

OK 46.00

Oerlikon

Overcord, Overcord Z

Прокалка перед сваркой

Если электроды хранились при нормальных условиях, то перед эксплуатацией прокалка не потребуется. Но если было допущено увлажнение, то необходима предварительная сушка в течение 25-30 минут при температуре порядка 110-ти градусов.

Положение швов при сварке


Сварочные электроды МР-3 АРС

Вид покрытия – рутиловое

AWS A 5.1:E 6013

ISO 2560-А- E 38 0 R 12

ГОСТ 9466

Э 46 –МР-3 АРС- Ø – УД

Е 432 (3) Р21

 

ТУ У 28.7-34142621-007:2012-09-14

Назначение

Использовать изделия марки МР-3 АРС можно для дуговой ручной сварки стали марок по ДСТУ 2651/ГОСТ 380-2005 (Ст 0, Ст 1, Ст 2, Ст 3), имеющих любые степени раскисления.

Условия применения

Коэффициент наплавки электродов составляет 8.0-9.0 г/А.ч. А расход на один килограмм наплавления равен 1.7 кг.

Использовать продукцию можно для создания нахлесточных, стыковых и угловых соединений. Толщина металла допускается от 3-х до 20-ти мм. Данная марка электродов толщиной от 2.5 до 4.0 мм подходит для сварки в любых пространственных положениях. Диаметр в 5.0 мм идеально подходит для вертикального положения «снизу-вверх», для горизонтального на вертикальной плоскости и для нижнего положения.

Электроды МР-3 АРС требуют постоянного тока любой полярности, либо же переменного тока трансформатора, имеющего холостой ход более 50 В.

Химический состав наплавленного металла, %

Mn

C

Si

P

S

 0,40-0,70 

не более

 0,10 

 0,15-0,35 

 0,030 

 0,030 

Механические свойства металла шва

Временное сопротивление, Н/мм2

Относительное удлинение, %

Ударная вязкость,

Дж/см2

≥450

≥22

≥78

Особые свойства

  • При использовании изделий обеспечивается простое перекрытие зазоров;
  • МР-3 АРС – это легкость выполнения работ и повторного разжигания дуги, а также превосходные сварочно-технологические свойства;
  • Великолепный внешний вид швов;
  • Лёгкое отделение слоя шлака;
  • Возможность удлинять дугу для обработки окисленных поверхностей;
  • Соответствие всем санитарно-гигиеническим нормам.

Сварочные данные

Сила сварочного тока, А, для электрода диаметром, мм

2,5

3,0

3,2

4,0

5,0

50-90

70-110

80-120

110-170

150-220

Упаковочные данные

Диаметр, мм

Длина, мм

Вес электрода, г

Количество электродов в пачке, шт.

Вес пачки, кг

2,50

350

17-18

55-58; 139-147

1; 2,5

3,00

350

25-26

38-40; 96-100

1; 2,5

3,20

350

30-31

32-33; 80-83

1; 2,5

4,00

450

58-59

42-43; 84-86

2,5; 5

5,00

450

91-92

27; 54

2,5; 5


Аналоги

Производитель

Марка электродов

ЛЭЗ

МР-3С, АНО-4

СпецЭлектрод

МР-3С, АНО-4

Thyssen

Phoenix SH Gelb R

Прокалка перед сваркой

В тех случаях, когда электроды хранились в нормальных условиях, предварительная прокалка не потребуется. Если же было допущено увлажнение, то электроды нуждаются в сушке при температуре порядка 150 градусов на протяжении 40-60 минут.

Положение швов при сварке

Сертификация

УкрСЕПРО, СтБ, ГОСТ Р

Сварочные электроды УОНИ-13/55 ПЛАЗМА

Вид покрытия – основное с железным порошком

WS A 5.1:E 7018

ISO 2560-А-E 42 4 В 42 Н 5

ГОСТ 9466

Э 50А –  
УОНИ-13/55 ПЛАЗМА – Ø – УД

Е 51 5 – БЖ 26

ТУ У 28.7-34142621-001:2008

Назначение и область применения

УОНИ-13/55 ПЛАЗМА – это высококачественные электроды, которые могут использоваться для сварочных работ в любых пространственных положениях. Они подходят для трубопроводов и ответственных конструкций. Обрабатывать можно изделия из низколегированных и углеродистых сталей, имеющих предел прочности 500-640 МПа. Электроды становятся идеальным вариантом в тех случаях, когда необходима стойкость соединений против горячих трещин. Чаще всего изделия используются в судоремонте, судостроении, мостостроении и для изготовления сосудов устойчивых к повышенному давлению.

Условия применения

Электроды имеют коэффициент наплавки равный 10.5-11.5 г/А.ч. Расход на один килограмм наплавляемого металла составляет 1.58 кг. Максимальная производительность может достигать 115 %. Изделия, имеющие диаметр от 2.0 до 4.0 мм, могут использоваться для сварки во всех пространственных положениях, за исключением вертикального «сверху-вниз». В свою очередь, изделия диаметром 5.0 мм подойдут для горизонтального положения на вертикальной площадке, для нижнего и для вертикального положения «снизу-вверх».

Химический состав наплавленного металла, %

Mn

Si

C

P

S

 1,10-1,50 

 0,40-0,70 

не более

 0,09 

 0,030 

 0,020 

Механические свойства металла шва

Временное сопротивление, Н/мм2

Относительное удлинение, %

Ударная вязкость, Дж/см2

500-640

≥26

≥180

Дополнительные сведения

УОНИ-13/55 ПЛАЗМА – это электроды, которые обеспечивают повышенную прочность швов, низкое содержание водорода и особую чистоту. Благодаря возможности задействовать переменный ток полностью исключается магнитное дутье. Плазма позволяет создать стабильное горение дуги и аккуратное формирование швов.

В обмазку электродов УОНИ-13/55 ПЛАЗМА добавлен железный порошок. Благодаря этому эффективность возрастает на 20 %. Использование изделий обеспечивает ряд важных преимуществ:

  • Компенсацию потерь металла на разбрызгивании и выгорании;
  • Уменьшение расхода электродов до 15 %;
  • Повышение производительности на 10 %;
  • Шлак не попадает в сварочную ванну, формируется мелкочешуйчатый шов, а удаляется появившаяся шлаковая корка очень просто.

Упаковочные данные

Диаметр, мм

Длина, мм

Количество электродов в пачке, шт.

Вес пачки, кг

2,5

350

104-113; 208-226

2,5; 5

3,0

350

74-81; 147-158

2,5; 5

3,2

350

68-71; 136-142

1; 2,5

4,0

450

71-74

5

5,0

450

47-50

5

Аналоги

Производитель

Марка электродов

ESAB

OK 48.00, OK 48.05

Lincoln Electric

Basic One

ELGA

P48S

Прокалка перед сваркой

Прокалка на протяжении одно часа при температуре 380-420 градусов потребуется только при наличии влаги.

Положение швов при сварке

Метаболические характеристики штамма Shewanella oneidensis, использующего глюкозу, выращенного в электродных условиях

Abstract

В биоэлектрохимических системах потенциал электрода является важным параметром, влияющим на поток электронов между электродами и микробами, а также на метаболическую активность микробов. Здесь мы исследовали метаболические характеристики утилизирующего глюкозу штамма сконструированного Shewanella oneidensis в условиях электродного дыхания в электрохимических реакторах, чтобы понять, как электродный потенциал влияет на метаболические пути у электрохимически активных бактерий.Когда электрохимический реактор работал с рабочим электродом, установленным на +0,4 В ( против , электрод сравнения Ag / AgCl), был разработан S . Штамм oneidensis , несущий плазмиду, кодирующую сахарную пермеазу и глюкозокиназу Escherichia coli , генерировал ток путем окисления глюкозы до ацетата и продуцировал D-лактат в качестве промежуточного метаболита. Однако накопление D-лактата не наблюдалось, когда сконструированный штамм выращивали с рабочим электродом, находящимся под напряжением 0 В.Мы также обнаружили, что транскрипция генов, участвующих в метаболизме пирувата и D-лактата, усиливается при высоком электродном потенциале по сравнению с их транскрипцией при низком электродном потенциале. Эти результаты предполагают, что углеродный катаболический путь S . oneidensis можно модифицировать, управляя потенциалом рабочего электрода в электрохимическом биореакторе.

Образец цитирования: Накагава Г., Козума А., Хиросе А., Касаи Т., Йошида Г., Ватанабе К. (2015) Метаболические характеристики штамма Shewanella oneidensis , использующего глюкозу, использующего глюкозу, выращенного в условиях респирации электрода.PLoS ONE 10 (9): e0138813. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813

Редактор: Патрик С. Чирино, Хьюстонский университет, США

Поступила: 12 февраля 2015 г .; Одобрена: 3 сентября 2015 г .; Опубликован: 22 сентября 2015 г.

Авторские права: © 2015 Nakagawa et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах документ и вспомогательные информационные файлы к нему.

Финансирование: Эта работа была в основном поддержана грантами JSPS KAKENHI с номерами 24880030 и 26850056 (http://www.jsps.go.jp/english/index.html) и частично поддержана Институтом Ногучи (http: // www.noguchi.or.jp/index.php?lang=en). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Окислительно-восстановительное состояние окружающей среды является важным фактором, определяющим рост и метаболическую активность микроорганизмов, поскольку оно влияет на доступность акцепторов электронов и процессы сохранения энергии клеток, такие как дыхание и ферментация [1].В дыхательной цепи разница в окислительно-восстановительных потенциалах между донорами и акцепторами электронов определяет количество энергии, сохраняющееся во время реакций переноса электронов. Внутриклеточный окислительно-восстановительный баланс, влияющий на ферментативные продукты, также связан с окислительно-восстановительным состоянием окружающей среды [2]. В биотехнологических процессах количество акцепторов электронов (например, кислорода) используется для управления производительностью и выходами целевых соединений [3].

Недавние исследования показали, что биоэлектрохимические системы (БЭС) полезны для контроля метаболической активности микробов [4].BES – это биотехнологические системы, в которых используется связь между электродами и электрохимически активными бактериями (EAB). BES привлекли значительное внимание из-за их широкого применения в ценных биотехнологических процессах, включая производство электроэнергии (например, микробные топливные элементы; MFC) [5] и производство топлива и химикатов (например, микробный электросинтез) [6]. В BES окислительно-восстановительное состояние акцепторов электронов (или доноров) и скорость потока электронов во время метаболизма могут быть изменены путем управления электродным потенциалом, что позволяет изменять внутриклеточный окислительно-восстановительный баланс у связанных с электродом микробов [6,7].Исследования также показали, что различия в электродном потенциале и / или каталитическом токе в BES влияют на профили экспрессии генов EAB [8-10]. Чтобы процитировать пример, Matsuda et al. [10] сообщили, что уровни экспрессии генов, связанных с циклом TCA в Shewanella loihica PV-4, заметно изменялись при культивировании клеток в присутствии электродов, находящихся под разными потенциалами. Однако имеется ограниченная информация о том, как EAB контролируют метаболизм и изменяют свои внутриклеточные продукты метаболизма в ответ на изменения электродного потенциала.

Shewanella oneidensis MR-1 – один из наиболее широко изученных EAB благодаря аннотированной геномной последовательности [11], простоте генетических манипуляций [4] и способности переносить электроны на внеклеточные электроды без экзогенно добавленного медиатора [12] ]. Кроме того, недавние исследования продемонстрировали потенциальную применимость этого штамма для систем микробного электросинтеза [13]. Поскольку MR-1 также хорошо охарактеризован с точки зрения его центральных путей утилизации углерода [14–19], он считается подходящим в качестве модельной бактерии для изучения метаболических характеристик EAB во время электрохимического культивирования в BES.Однако исследования также показали, что MR-1 и многие другие штаммы Shewanella предпочтительно используют низкомолекулярные органические кислоты, включая лактат и пируват, в качестве источников углерода и энергии. Они не предпочитают пяти- и шестиуглеродные углеводы, включая глюкозу, хотя эти сахара широко используются в качестве субстратов для MFC и процессов биопродукции. Следовательно, метаболическая инженерия MR-1 для придания способности использовать глюкозу может быть ценна не только для расширения применимости этого штамма для биотехнологических применений, но также для понимания того, как EAB метаболизирует углеводы в потенциально контролируемых условиях.

Спонтанно и искусственно использующие глюкозу штаммов S. oneidensis были получены в предыдущих исследованиях. Ховард и др. [20] сообщили, что MR-1 приобрел способность использовать глюкозу после первоначального воздействия глюкозы. Совсем недавно Choi et al. [21] успешно сконструировали мутанты Shewanella , использующие глюкозу, введя гены фасилитатора глюкозы ( glf ) и глюкокиназы ( glk ) из Zymomonas mobilis .Однако, хотя они также продемонстрировали, что сконструированный MR-1 способен генерировать ток, используя глюкозу в качестве донора электронов в реакторе MFC [21], метаболические профили утилизирующих сахар штаммов Shewanella во время электродного дыхания не исследовались. В настоящем исследовании мы сконструировали S . oneidensis путем введения гликолитических генов из Escherichia coli . Затем мы охарактеризовали профили утилизации глюкозы этого штамма в условиях дыхания электрода при BES, уделяя особое внимание различиям в продукции D / L-лактата из глюкозы и уровням экспрессии генов, участвующих в метаболизме пирувата и лактата.

Материалы и методы

Штаммы бактерий и условия роста

S . oneidensis MR-1 был получен из Американской коллекции типовых культур (АТСС). Е . coli штаммов [22] обычно культивировали в среде Лурия – Бертани (LB) при 37 ° C. Модель E . Штамм спаривания coli (WM6026) требовал добавления в среду 100 мкг / мл 2,6-диаминопимелиновой кислоты (DAP) для роста. Штаммы Shewanella oneidensis культивировали при 30 ° C в LB или в лактатной минимальной среде (LMM) [23], содержащей 15 мМ лактата в качестве источника углерода и с добавлением 0.2 г / л казаминовых кислот, 10 мл / л каждой аминокислоты и 10 мл / л каждого раствора микроэлементов. Минимальную среду с глюкозой (GMM), которая содержала 10 мМ или 15 мМ глюкозы вместо лактата в LMM, использовали для культивирования с глюкозой в качестве источника углерода и энергии. Для аэробного выращивания S . oneidensis. штаммов вводили в колбы Эрленмейера объемом 300 мл, содержащие 100 мл LMM или GMM, и культивировали при встряхивании на роторном шейкере при 180 об / мин. Для анаэробного выращивания S . oneidensis. штаммов вводили во флаконы емкостью 100 мл, содержащие 80 мл ГММ с добавлением 5 или 40 мМ фумарата. Бутылки, содержащие анаэробные культуры, закрывали перегородками из бутилкаучука с тефлоновым покрытием, закрывали алюминиевыми обжимными уплотнениями и продували чистым газообразным азотом. Оптическую плотность культур при 600 нм (OD 600 ) измеряли с помощью спектрофотометра DU800 (Beckman). При необходимости в культуральную среду добавляли 15 мкг / мл гентамицина (Gm). Чашки с агаром содержали 1.6% агар Бакто (Difco).

Мутантная конструкция

Гены glk (ECK2384) и galP (ECK2938) были амплифицированы из геномной ДНК E . coli, производное K-12, штамм DH5α, с использованием наборов праймеров glk-F-KpnI и glk-R-XhoI, а также galP-F-XhoI и galP-R-PstI, соответственно (см. Таблицу S1 в вспомогательной информации). Полученные продукты ПЦР переваривали рестрикционными ферментами, соответствующими сайтам, включенным в праймеры (XhoI и либо KpnI, либо PstI), а затем лигировали в pBBR1MCS-5, расщепленную KpnI-PstI [24].Полученная плазмида pBBR- glk galP была введена в S . oneidensis клеток путем спаривания на фильтре с E . coli WM6026.

Внутрикадровое разрушение гена dld-II и ldhA в штамме MR-1 было выполнено с использованием метода двухэтапной гомологичной рекомбинации с суицидной плазмидой pSMV-10, как описано ранее [22,23,25]. Вкратце, продукт слияния размером 1,6 т.п.н., состоящий из вышестоящих и нижележащих последовательностей гена dld-II или ldhA , соединенных линкерной последовательностью из 18 пар оснований, был сконструирован с помощью ПЦР и удлинения in vitro с использованием праймеров. перечислены в таблице S1.Амплифицированный продукт слияния лигировали в сайт SpeI pSMV-10, генерируя pSMV-dld-II или pSMV-ldhA, которые затем вводили в MR-1 путем связывания на фильтре с E . coli WM6026. Трансконъюганты (клоны с одним кроссовером) отбирали на чашках LB, содержащих 50 мкг / мл канамицина (Km), и затем культивировали в течение 20 ч в среде LB без антибиотиков. Затем культуры распределяли на чашках LB, содержащих 10% (мас. / Об.) Сахарозы, для выделения Km-чувствительных мутантов с двойным кроссинговером.Нарушение целевого гена в полученных штаммах подтверждено методом ПЦР. Один репрезентативный мутантный штамм, в котором ген dld-II или ldhA был разрушен в рамке считывания, был выбран и обозначен как Δdld-II или Δ ldhA , соответственно. Чтобы сконструировать мутант с двойным нокаутом dld-II / ldhA dld-II Δ ldhA ), pSMV-ldhA вводили в клетки Δ dld-II и мутанты с двойным кроссинговером. были проверены, как описано выше.

Работа электрохимических ячеек

Небольшой двухкамерный ЭК (общая емкость 36 мл) использовался для контроля и сравнения токов, генерируемых S . oneidensis штаммов. Этот ЭК был снабжен рабочим электродом из графитового войлока (3,0 см 2 ; напряжение +0,4 В против . Ag / AgCl) и электродом сравнения Ag / AgCl (HX-R5, Hokuto Denko) в анодной камере и противоэлектрод из платиновой проволоки (5 см, φ0,3 мм; Nilaco) в катодной камере.Протонообменная мембрана Nafion 117 (7,1 см 2 ; Sigma-Aldrich) использовалась для разделения анодной и катодной камер. Анодная камера была заполнена 15 мл LMM или GMM с добавлением 4 мМ лактата или 2 мМ глюкозы в качестве донора электронов и 170 мМ NaCl в качестве электролита, а затем инокулировали бактериальные клетки с исходной OD 600 . 0,01. Катодная камера была заполнена 15 мл той же среды без глюкозы. Ток контролировался с помощью многоканального потенциостата (VPM3; Biologic), а плотность тока (мкА / см 2 ) рассчитывалась на основе площади проекции рабочего электрода (3.0 см 2 ). Кулоновская эффективность рассчитывалась путем деления общего количества электронов, перенесенных на рабочий электрод, на теоретическое максимальное количество электронов, образовавшихся в результате полного окисления субстрата до CO 2 (24 e / моль для глюкозы и 12 e / моль для глюкозы). моль для лактата).

Большой двухкамерный ЭК (общая емкость 360 мл) использовали для анализа метаболитов и транскрипции MR-1 (pBBR- glk galP ). Этот ЭК был снабжен рабочим электродом из графитового войлока (8 см 2 ), электродом сравнения Ag / AgCl в анодной камере и противоэлектродом из платиновой проволоки (10 см) в катодной камере.Протонообменная мембрана Nafion 117 (28 см 2 ) использовалась для разделения анодной и катодной камер. Анодная камера была заполнена 150 мл GMM с добавлением 2 мМ глюкозы и 170 мМ NaCl, а затем инокулирована бактериальными клетками с исходной OD 600 0,01. Катодная камера была заполнена 150 мл той же среды без глюкозы. Плотность тока (мкА / см 2 ) была рассчитана на основе площади проекции рабочего электрода (4,0 см 2 ).Воспроизводимость оценивалась с использованием как минимум трех независимых измерений, и типичные данные показаны здесь. Для анализа метаболитов рабочий анодный электрод был установлен на 0 В или +0,4 В ( против . Ag / AgCl) с использованием потенциостата VPM3. Для транскрипционного анализа рабочий электрод был уравновешен при 0 В, а затем, после того, как электрический ток стал стабильным, потенциал электрода был изменен на +0,3 В или –0,3 В. После дальнейшего культивирования в ЭК в течение 2 часов бактериальные клетки прикрепились к рабочему электроду были собраны и подвергнуты экстракции РНК.

Анализы метаболитов

После удаления клеток фильтрованием через мембранный фильтрующий элемент (размер пор 0,20 мкм, DISMIC-25HP; Advantec), количество ацетата, формиата и некоторых других органических кислот в супернатанте ЭК измеряли с использованием ранее описанного высокоэффективного метода. метод высокопроизводительной жидкостной хроматографии (HPLC; Agilent 1100 series) [22]. Глюкозу и D / L-лактат в отфильтрованном супернатанте измеряли с помощью ферментативных анализов, которые выполняли с использованием набора F (J.K. international) в соответствии с инструкциями производителя.

Извлечение РНК

Суммарную РНК

экстрагировали с использованием реагента Trizol (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя и затем очищали с использованием набора RNeasy Mini Kit и набора RNase-Free DNase (Qiagen). Качество экстрагированной РНК оценивали с помощью биоанализатора Agilent 2100 с реагентами RNA 6000 Pico и RNA Pico Chips (Agilent Technologies) в соответствии с инструкциями производителя.

Количественная RT-PCR

Количественная ОТ-ПЦР (qRT-PCR) выполнялась с использованием LightCycler 1.5 (Roche) по ранее описанной методике [26–28]. Смесь ПЦР (20 мкл) содержала 15 нг тотальной РНК, 1,3 мкл 50 мМ раствора Mn (OAc) 2 , 7,5 мкл LightCycler RNA Master SYBR Green I (Roche) и 0,15 мкМ праймеров, перечисленных в таблице S1 в Вспомогательная информация. Для построения стандартных кривых фрагменты ДНК из генов-мишеней dld II , lldF , ldhA , aceF , pykA , eda , pta , pflB Ген рРНК амплифицировали с помощью ПЦР с использованием тотальной ДНК штамма MR-1 в качестве матрицы.Эти фрагменты ДНК впоследствии очищали электрофорезом в агарозном геле с использованием набора для экстракции геля QIAEX II (Qiagen). Серии разведений очищенных продуктов каждой реакции ПЦР и исходных образцов РНК использовали в качестве матриц для анализа qRT-PCR. Специфичность qRT-PCR подтверждали анализом кривой диссоциации. Уровни экспрессии целевых генов ( dld II , lldF , ldhA , aceF , pykA , eda, pta и pflB ) были нормализованы на основе уровня экспрессии. референсного гена (ген 16S рРНК).Все измерения были выполнены как минимум в трех экземплярах, а данные были статистически проанализированы с помощью t-критерия Стьюдента. Значение P 0,01 считалось статистически значимым.

Результаты и обсуждение

Конструирование мутанта, использующего глюкозу

Аннотированные данные геномной последовательности S . oneidensis MR-1 (номер доступа в Genbank AE014299) предполагает, что этот штамм способен метаболизировать глюкозо-6-фосфат и его гликолитические метаболиты ниже по течению через пути Энтнера – Дудорова (ED) и пентозофосфат (PP).Однако этот штамм не может поглощать и фосфорилировать глюкозу, потому что сдвиг рамки считывания существует в гене переносчика глюкозы / галактозы, gluP (SO_2214) [16,29], а ген глюкокиназы ( glk ) не может быть обнаружен в геном. Хотя MR-1 имеет полный набор генов, кодирующих систему фосфоенолпирувата (PEP): сахарная фосфотрансфераза для глюкозы (PTS Glc ; ptsHI-crr и ptsG ), известно, что эта система не поддерживает рост бактерий на глюкозу через пути ED и PP.Это связано с тем, что эти гликолитические пути не могут продуцировать достаточное количество PEP для фосфотрансферазной реакции PTS [16]. Однако в предыдущих исследованиях сообщалось, что введение glk и гена симпортера глюкоза / галактоза-протон ( galP ) восстановило способность PTS Glc -инактивировать E . coli мутантов для использования глюкозы, позволяя поглощать и фосфорилировать глюкозу без потребления PEP [30–32]. В настоящем исследовании мы сконструировали плазмиду pBBR- glk galP , которая содержит гены glk и galP , полученные из E . coli K-12, и ввел его в MR-1, чтобы придать этому штамму способность утилизировать глюкозу (рис. 1).

Рис. 1. Гликолитический путь в инженерной S . oneidensis MR-1.

Спроектированный путь, построенный в этом исследовании, показан в белом прямоугольнике. Внутренние катаболические пути, показанные в заштрихованных прямоугольниках, изображены на основе данных, опубликованных в литературе [15,17–19,35].

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.g001

Когда клетки MR-1 (pBBR- glk galP ) культивировали в GMM в аэробных или анаэробных, фумаратредуцирующих условиях, наблюдался рост клеток, сопровождаемый потреблением глюкозы (Рис. 2A-2D. ), демонстрируя, что введение этих E . coli гликолитических генов позволили MR-1 приобрести способность расти на глюкозе. Однако, когда клетки инкубировали в анаэробных условиях в отсутствие акцептора электронов, значительного роста клеток не наблюдалось в течение первых 5 дней инкубации (данные не показаны).Это указывает на то, что сконструированный штамм не может получить достаточно энергии для роста в этих условиях ферментации. Аналогичный результат наблюдался и для другого сконструированного штамма S . oneidensis [21], который показал очень низкую продукцию биомассы даже при культивировании клеток в течение 18 дней в условиях ферментации глюкозы. Слабый рост производных MR-1 во время ферментации глюкозы, вероятно, связан с низким выходом АТФ, который является результатом гликолиза через путь ED [33].

Рис. 2. Рост (A, B) и потребление глюкозы (C, D) S . oneidensis производных в аэробных (A, C) и фумаратредуцирующих (B, D) условиях.

S . oneidensis клеток, несущих pBBR1MCS-5 (контрольный вектор) или pBBR- glk galP , выращивали в GMM-содержащей 15 мМ глюкозе в качестве акцептора электронов. В анаэробные культуры добавляли 40 мМ фумарата в качестве донора электронов. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения, рассчитанные на основе трех измерений.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.g002

Текущее поколение MR-1 (pBBR-

glk galP )

Генерация тока глюкозы с помощью MR-1 (pBBR- glk galP ) была проанализирована и сравнена с генерацией тока из лактата с использованием небольшого двухкамерного ЭК, оснащенного рабочим электродом, установленным на +0,4 В ( против . Ag / AgCl) (рис.3). Результаты демонстрируют, что сконструированный штамм способен генерировать ток, используя глюкозу в качестве донора электронов.Однако максимальная плотность тока, полученная из глюкозы (77,3 мкА / см 2 ), была на 55% ниже, чем полученная из лактата (140 мкА / см 2 ), что позволяет предположить, что скорость метаболизма глюкозы в сконструированном MR-1 был ниже, чем скорость метаболизма лактата. Эта разница в текущих плотностях может отражать разницу в скорости роста этого штамма в GMM и LMM (0,014 ч –1 и 0,35 ч –1 , соответственно, в условиях восстановления фумарата). Рассчитанная кулоновская эффективность ЭК с добавлением глюкозы и лактата составила 10.3% и 19,3% соответственно, что указывает на то, что многие из субстратов с добавками не были полностью окислены в этих ЭК. Предыдущие исследования показали, что штаммы Shewanella демонстрируют низкую кулоновскую эффективность в МФЦ с добавлением лактата, поскольку они частично окисляют лактат и продуцируют ацетат в качестве основного метаболита [22,34]. Аналогичным образом, в настоящем исследовании ацетат был обнаружен при концентрациях 2,3 мМ и 2,9 мМ в супернатанте ЭК, дополненных глюкозой и лактатом, соответственно, когда субстраты были полностью израсходованы (18 ч после начала инкубации).Молярный выход ацетата из глюкозы и лактата составил 58% и 73% соответственно. Эти результаты показывают, что генерация тока из глюкозы с помощью сконструированного MR-1 в основном происходит за счет частичного субстратного окисления глюкозы до ацетата, как в случае генерации тока из лактата.

Рис. 3. Генерация тока из глюкозы или лактата MR-1 (pBBR- glk galP ).

Клетки вводили в ЭК, дополненные минимальной средой, содержащей лактат или глюкозу в качестве донора электронов, и выращивали в присутствии рабочего электрода, установленного на +0.4 В ( против . Ag / AgCl). Результаты представляют собой средства по крайней мере двух параллельных, но независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.g003

Метаболические реакции на разные электродные потенциалы

Изучить влияние электродных потенциалов на метаболическую активность инженерного S . oneidensis , генерацию тока и продукцию метаболитов из глюкозы контролировали с помощью ЭК, оборудованного рабочим электродом, установленным на +0.4 В ( против . Ag / AgCl) (высокий потенциал, HP) или 0 В (низкий потенциал, LP) (рис. 4A – 4F). В этом эксперименте мы использовали большой двухкамерный ЭК для стабильного отбора проб супернатантов из анодной камеры. Более высокий электрический ток и скорость потребления глюкозы наблюдались в условиях HP (рис. 4A и 4C), чем наблюдались в условиях LP (рис. 4B и 4D). Хотя Мацуда и др. [10] сообщили, что S . loihica PV-4 генерировал пониженный ток, когда клетки выращивались в ЭК, оборудованном легированным оловом, стеклянным рабочим электродом с покрытием In 2 O 3 (ITO), находящимся под высоким потенциалом, такое уменьшение тока при более высокие потенциалы не наблюдались в настоящем исследовании.Вероятно, что различия в материалах электродов и конфигурации ЭК влияют на профили генерации тока штаммов Shewanella в условиях уравновешенного потенциала.

Рис. 4. Производство тока (A, B) и метаболитов (C, D, E, F) из глюкозы с помощью MR-1 (pBBR- glk galP ) в ЭК, оперированных с HP (A, C, E ) или LP (B, D, F) электрод.

Клетки культивировали в ЭК с добавлением 2 мМ глюкозы в качестве донора электронов. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения, рассчитанные на основе трех измерений.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.g004

Ацетат был обнаружен в ЭК, работающих в условиях HP и LP, наряду с текущим образованием и потреблением глюкозы (рис. 4C и 4D). Интересно, что значительное количество D-лактата было обнаружено вместе с увеличением плотности тока в условиях HP (рис. 4E). Это демонстрирует, что сконструированный MR-1 был способен ферментировать глюкозу и производить D-лактат в качестве промежуточного метаболита при электродном дыхании.D-лактат был полностью израсходован в течение 300 часов (рис. 4E), что указывает на то, что этот метаболит был окислен до ацетата для текущего поколения. Однако в условиях LP значительные количества D-лактата не были обнаружены (рис. 4F). Эти результаты предполагают, что разница в потенциале электродов влияет на гликолитический поток к D-лактату в сконструированном S . oneidensis . L-лактат заметно не накапливался в условиях HP или LP (рис. 4E и 4F). Формиат и другие органические кислоты, включая сукцинат, фумарат, пропионат и малеат, в этом эксперименте не были обнаружены (данные не показаны), в то время как Choi et al.[21] сообщили, что утилизирующий глюкозу S . Штамм oneidensis продуцировал формиат в дополнение к ацетату и лактату (хиральность не была идентифицирована в этом эксперименте) во время метаболизма глюкозы в присутствии или в отсутствие оксида Fe (III). Это различие, вероятно, связано с быстрым окислением формиата в условиях сбалансированного электрода.

Идентификация путей продукции D-лактата

На основании аннотированных данных геномной последовательности, S .Предполагается, что oneidensis MR-1 будет иметь два гена D-лактатдегидрогеназы (D-LDH), то есть dld-II (SO_1521) и ldhA (SO_0968). Предыдущие исследования показали, что, хотя Dld-II функционирует как респираторный D-LDH, необходимый для окисления D-лактата до пирувата в MR-1 [15], этот фермент также участвует в восстановлении пирувата до D-лактата во время ферментации пирувата [35]. ]. LdhA принадлежит к семейству ферментативных НАДН-зависимых D-LDH [36], хотя функция MR-1 еще не охарактеризована.Чтобы идентифицировать ген (ы), участвующие в продукции D-лактата в сконструированном MR-1, мы сконструировали два мутанта с единичным нокаутом для этих генов D-LDH (Δ dld-II и Δ ldhA ) и двойной – нокаут-мутант (Δ dld-II Δ ldhA ) и исследовали их способность продуцировать D-лактат из глюкозы. В этом эксперименте клетки MR-1 (WT) дикого типа, Δ dld-II , Δ ldhA и Δ dld-II Δ ldhA , трансформированные pBBR- glk galP , были выращивали в GMM в условиях, ограниченных акцепторами электронов (фумарата), и определяли и сравнивали накопление D-лактата в культуральных супернатантах (рис. 5).Результаты показали, что продукция D-лактата клетками Δ ldhA (0,122 ± 0,002 мМ) была существенно ниже, чем продукция клетками WT (0,493 ± 0,107 мМ). Хотя Пинчук и соавт. [35] сообщили, что делеция ldhA в MR-1 не повлияла на продукцию лактата во время ферментации пирувата, приведенные выше результаты показывают, что LdhA функционирует как основной ферментативный D-LDH во время утилизации сахара. Однако клетки Δ ldhA сохранили способность продуцировать небольшое количество D-лактата, тогда как клетки Δ dld-II Δ ldhA не продуцировали этот метаболит на детектируемом уровне (рис. 5).Это наблюдение указывает на то, что Dld-II частично участвует в производстве D-лактата из глюкозы. Мы также обнаружили, что Δ dld-II накапливал более высокую концентрацию D-лактата по сравнению с WT (рис. 5), подтверждая, что Dld-II в основном участвует в окислении D-лактата до пирувата. Взятые вместе, эти результаты показывают, что в сконструированном гликолитическом пути значительная часть пирувата, образующегося во время ферментации глюкозы, превращается в D-лактат с помощью LdhA и частично с помощью Dld-II, хотя продукт в значительной степени снова превращается в пируват с помощью Dld- II (рис. 1).

Рис. 5. Производство D-лактата из глюкозы D-LDH-дефицитным S . oneidensis производных.

Клетки выращивали в анаэробных условиях в GMM, содержащем 10 мМ глюкозы и 5 мМ фумарата, до полного израсходования акцептора электронов (в течение 24 часов). Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения, рассчитанные на основе трех измерений. ND, не обнаружен (ниже пределов обнаружения; 0,02 мМ).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.g005

Экспрессия генов метаболизма лактата и пирувата

Чтобы исследовать причину накопления D-лактата, зависящего от электродного потенциала, мы исследовали уровни транскрипции генов, участвующих в метаболизме лактата и пирувата в клетках, выращенных при различных электродных потенциалах.В этом эксперименте клетки MR-1 (pBBR- glk galP ) культивировали при уравновешенном электродном потенциале 0 В до тех пор, пока электрический ток не стал стабильным (в течение 9 часов), а затем потенциал был изменен до +0,3 В или –0,3 В. Этот эксперимент подтвердил, что электрический ток резко увеличивался или уменьшался за счет сдвига потенциала электрода (рис. 6А). Чтобы исследовать влияние сдвигов электрического потенциала на экспрессию генов без существенных изменений концентраций метаболитов, клетки, прикрепленные к рабочим электродам, собирали через 2 часа после сдвигов потенциала.Суммарную РНК, экстрагированную из этих клеток, анализировали с помощью qRT-PCR. Уровни экспрессии генов D- и L-LDH ( dld-II , ldhA и lldF ) показаны на фиг. 6B. Интересно, что уровни экспрессии dld-II были значительно увеличены с увеличением электродного потенциала, тогда как уровни экспрессии ldhA и lldF , который кодирует компонент респираторного комплекса L-LDH (LldEFG) [15] , не были существенно затронуты потенциальным сдвигом ( P <0.01; Рис 6B). Потенциально-зависимая экспрессия наблюдалась также для трех генов, участвующих в метаболизме пирувата, то есть pykA , eda и aceF (рис. 6C). Гены pykA (SO_2491) и eda (SO_2486) аннотированы соответственно как пируваткиназа, которая катализирует превращение PEP в пируват, и 2-кето-3-дезоксиглюконат-6-фосфат (KDG-6P) альдолаза, которая катализирует превращение КДГ-6П в пируват и глицеральдегид-3-фосфат (см. рис. 1).Сообщается, что ген aceF (SO_0425) кодирует компонент комплекса пируватдегидрогеназы (PDH) (AceEFG), участвующий в превращении пирувата в ацетил-КоА и CO 2 [35]. Однако на экспрессию генов пируватформиат-лиазы ( pflB ; SO_2912) и фосфотрансацетилазы ( pta ; SO_2916) сдвиг потенциала существенно не повлиял ( P <0,01; рис. 6C). Эти результаты предполагают, что активность ключевых ферментов, участвующих в метаболизме пирувата и D-лактата (т.е.е., PykA, PDH и Dld-II; см. рис. 1) увеличивается в условиях HP, хотя механизмы, лежащие в основе этих транскрипционных изменений и накопления D-лактата, в настоящее время неясны. Поскольку окисление пирувата до ацетил-КоА с помощью PDH включает в себя продукцию NADH, можно предположить, что активация PDH в условиях HP приводит к увеличению внутриклеточного NADH, тем самым увеличивая продукцию D-лактата, катализируемую LdhA. Также возможно, что активация Dld-II способствует временному накоплению D-лактата, поскольку этот фермент катализирует двунаправленное преобразование между D-лактатом и пируватом (рис. 5).Дальнейшие исследования проводятся для выяснения сложных потоков углерода и электронов для производства D-лактата в потенциально контролируемых условиях.

Рис. 6. Текущее поколение (A) и уровни экспрессии генов, участвующих в метаболизме лактата (B) и другого углерода (C) в потенциально контролируемых условиях. Клетки

MR-1 (pBBR- glk galP ) культивировали в ЭК, содержащих среды с добавлением 2 мМ глюкозы в качестве донора электронов. Стрелка указывает момент времени, в который был сдвинут электродный потенциал.Уровни экспрессии генов анализировали с помощью количественного анализа RT-PCR. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения, рассчитанные как минимум по трем измерениям. Астариски указывают на статистически значимые различия ( P <0,01).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.g006

Хотя причины потенциально-зависимой экспрессии генов dld-II , pykA , eda и PDH в настоящее время неизвестны, возможно, что изменения внутриклеточных окислительно-восстановительных состояний могут влиять на экспрессию этих генов через регуляторы окислительно-восстановительного контроля, такие как белки, содержащие PAS-домен [1,37], поскольку электроды HP могут действовать как эффективные акцепторы электронов и способствовать окислению внутриклеточных молекулы.Поскольку культивирование MR-1 в присутствии D-лактата не привело к значительному увеличению экспрессии генов dld-II и ldhA (S1 фиг.), Маловероятно, что накопление D -лактат в условиях HP индуцирует экспрессию этих генов D-LDH. Напротив, предыдущие исследования продемонстрировали, что экспрессия генов L-LDH ( lldEFG ) требует LlpR (L-лактат-положительный регулятор; SO_3460) [15,38], хотя молекулярный механизм, лежащий в основе положительной регуляции lldEFG этим регулятором остается неясным.Как сообщалось, транскрипция генов L-LDH ( lldRDP ) в E . coli регулируется регулятором LldR L-лактат-зависимым образом [39], возможно, что экспрессия генов lldEFG в MR-1 также регулируется присутствием или отсутствием L-лактата. Однако наши данные предполагают, что это не связано с изменениями внеклеточного или внутриклеточного окислительно-восстановительного статуса.

Выводы

Результаты настоящего исследования показывают, что сдвиги электродного потенциала и сопутствующие изменения электрического тока в BES влияют на гликолитический поток в направлении производства D-лактата в сконструированном MR-1, использующем глюкозу.Эти результаты предполагают, что производство метаболитов центральными катаболическими путями в EAB может быть изменено с помощью электрохимических подходов. Настоящие результаты также показывают, что уровни экспрессии генов, участвующих в метаболизме пирувата и D-лактата, включая гены PDH и dld-II , зависят от электродного потенциала. Таким образом, можно регулировать экспрессию ключевых генов для продукции целевых метаболитов посредством комбинации потенциально-зависимого транскрипционного промотора и контроля электродного потенциала.Хотя накопление D-лактата, наблюдаемое в настоящем исследовании, было временным из-за его окисления до ацетата во время электродного дыхания, генетическая модификация, такая как нарушение генов синтеза ацетата и введение дополнительных генов, может быть применима для эффективного производства ценных соединения. Росс и др. [13] сообщили, что S . oneidensis MR-1 может принимать электроны от электрода с уравновешенным потенциалом через внеклеточный путь переноса электронов, что предполагает возможность синтеза продуктов восстановления с высокой добавленной стоимостью путем подачи электронов с электрода на сконструированный MR-1.Мы ожидаем, что результаты, представленные в настоящем исследовании, будут полезны для будущего развития биотехнологических процессов на основе BES, которые будут производить ценные химические вещества.

Дополнительная информация

S1 Рис. Анализ qRT-PCR

dld-II и ldhA в клетках MR-1, выращенных с D-лактатом и пируватом.

Клетки MR-1 культивировали в LMM с добавлением 15 мМ D-лактата в качестве источника углерода и энергии или в минимальной пируватной среде, содержащей 15 мМ пирувата (вместо лактата в LMM) до ранней стационарной фазы роста.Результаты выражены в виде относительных значений к уровням мРНК в клетках, выращенных на пирувате. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение, рассчитанное как минимум по трем измерениям.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0138813.s001

(PDF)

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AK KW. Проведены эксперименты: Г. Н. АК АХ ТК ГЫ. Проанализированы данные: Г.Н. АК АХ ТК. Внесенные реактивы / материалы / инструменты анализа: AK KW. Написал бумагу: AK KW.

Ссылки

  1. 1. Грин Дж., Пэджет М.С. Бактериальные окислительно-восстановительные датчики. Nat Rev Microbiol. 2004; 2: 954–966. pmid: 15550941
  2. 2. Ючи С., Вайнер Л. Клеточная и молекулярная физиология Escherichia coli в адаптации к аэробной среде. J Biochem. 1996; 120: 1055–1063. pmid: 48
  3. 3. Лю Ц.Г., Сюэ Ц., Линь Ю.Х., Бай Ф.В. Контроль окислительно-восстановительного потенциала и применение в микроаэробных и анаэробных ферментациях.Достижения биотехнологии. Elsevier Inc .; 2013. с. 257–65.
  4. 4. Sydow A, Krieg T, Mayer F, Schrader J, Holtmann D. Электроактивные бактерии-молекулярные механизмы и генетические инструменты. Appl Microbiol Biotechnol. 2014; 98: 8481–8495. pmid: 25139447
  5. 5. Ватанабе К. Последние разработки в области технологий микробных топливных элементов для устойчивой биоэнергетики. J Biosci Bioeng. 2008. 106: 528–536. pmid: 146
  6. 6. Rabaey K, Rozendal RA. Микробный электросинтез – новый взгляд на электрический путь производства микробов.Nat Rev Microbiol. 2010. 8: 706–716. pmid: 20844557
  7. 7. Флинн Дж. М., Росс Д. А., Хант К. А., Бонд Д. Р., Гралник Дж. А. Обеспечение несбалансированной ферментации с помощью искусственно созданных бактерий, взаимодействующих с электродом. mBio. 2010; 1: 1–8.
  8. 8. Мацуда С., Лю Х., Като С., Хашимото К., Наканиши С. (2011) Отрицательное фарадеевское сопротивление во внеклеточном переносе электронов с помощью анодно-дышащих клеток Geobacter surreducens . Environ Sci Technol 45: 10163–10169. pmid: 22047596
  9. 9.Исии С., Сузуки С., Норден-Кричмар TM, Тенни А., Чейн ПСГ, Шольц М.Б. и др. Новый метатранскриптомный подход для определения динамики экспрессии генов во время внеклеточного переноса электронов. Nat Commun. 2013; 4: 1601. pmid: 23511466
  10. 10. Мацуда С., Лю Х., Козума А., Ватанабе К., Хашимото К., Наканиши С. Электрохимическое стробирование цикла трикарбоновых кислот в вырабатывающих электричество бактериальных клетках Shewanella . PLoS One. 2013; 8: e72901. pmid: 23977370
  11. 11.Гейдельберг Дж. Ф., Полсен И. Т., Нельсон К. Э., Гайдос Э. Дж., Нельсон В. К., Рид Т. Д. и др. Последовательность генома диссимиляционной бактерии, восстанавливающей ионы металлов Shewanella oneidensis . Nat Biotechnol. 2002; 20: 1118–1123. pmid: 12368813
  12. 12. Ким Б. Х., Ким Х. Дж., Хён М. С., Пак Д.Х. Прямая электродная реакция бактерии, восстанавливающей Fe (III), Shewanella putrefaciens . J Microbiol Biotechnol. 1999; 9: 127–131.
  13. 13. Росс Д.Э., Флинн Дж. М., Барон Д. Б., Гралник Дж. А., Бонд Д.К электросинтезу в Shewanella : энергетика обращения пути Mtr для восстановительного метаболизма. PLoS One. 2011; 6: e16649. pmid: 21311751
  14. 14. Ян Ц., Родионов Д.А., Ли Х, Лайкова О.Н., Гельфанд М.С., Загнитко О.П. и др. Сравнительная геномика и экспериментальная характеристика пути утилизации N-ацетилглюкозамина Shewanella oneidensis . J Biol Chem. 2006; 281: 29872–29885. pmid: 16857666
  15. 15. Пинчук Г.Е., Родионов Д.А., Ян Ц., Ли Х, Остерман А.Л., Дервин Э. и др.Геномная реконструкция метаболизма Shewanella oneidensis MR-1 выявляет ранее не охарактеризованный механизм утилизации лактата. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2009; 106: 2874–2879. pmid: 19196979
  16. 16. Родионов Д.А., Ян Ц., Ли Х, Родионова И.А., Ван Ю., Образцова А.Ю. и др. Геномная энциклопедия путей утилизации сахара у представителей рода Shewanella . BMC Genomics. 2010; 11: 494. pmid: 20836887
  17. 17. Скотт Дж. Х., Нилсон К. Х. Биохимическое исследование промежуточного углеродного метаболизма Shewanella putrefaciens .J Bacteriol 1994; 176: 3408–3411. pmid: 8195102
  18. 18. Тан YJ, Meadows AL, Kirby J, Keasling JD Анаэробные центральные метаболические пути в Shewanella oneidensis MR-1 переинтерпретированы в свете мечения изотопных метаболитов. J Bacteriol 2007; 189: 894–901. pmid: 17114268
  19. 19. Tang YJ, Hwang JS, Wemmer DE, Keasling JD Shewanella oneidensis MR-1 fluxome в различных кислородных условиях. 2007; Appl Environ Microbiol 73: 718–729. pmid: 17098921
  20. 20.Ховард Е.К., Хамдан Л.Дж., Лизевски С.Е., Рингайзен Б.Р. Высокая частота мутантов, утилизирующих глюкозу, у Shewanella oneidensis MR-1. FEMS Microbiol Lett. 2011; 327: 9–14. pmid: 22092702
  21. 21. Чхве Ди, Ли С.Б., Ким С., Мин Би, Чхве Ай-Джи, Чанг И.С. Метаболически сконструированные штаммы Shewanella , использующие глюкозу, в анаэробных условиях. Биоресур Технол. 2014; 154: 59–66. pmid: 24384311
  22. 22. Ньютон Г.Дж., Мори С., Накамура Р., Хашимото К., Ватанабе К.Анализ механизмов генерации тока Shewanella loihica PV-4 и Shewanella oneidensis MR-1 в микробных топливных элементах. Appl Environ Microbiol. 2009. 75: 7674–7681. pmid: 19837834
  23. 23. Kouzuma A, Meng X-Y, Kimura N, Hashimoto K, Watanabe K. Нарушение предполагаемого гена SO3177 биосинтеза полисахаридов клеточной поверхности в Shewanella oneidensis MR-1 усиливает адгезию к электродам и генерацию тока в микробных топливных элементах.Appl Environ Microbiol. 2010. 76: 4151–4157. pmid: 20453127
  24. 24. Ковач М.Э., Эльзер П.Х., Хилл Д.С., Робертсон Г.Т., Фаррис М.А., Руп Р.М. и др. Четыре новых производных вектора клонирования pBBR1MCS с широким кругом хозяев, несущие различные кассеты устойчивости к антибиотикам. Ген. 1995. 166: 175–176. pmid: 8529885
  25. 25. Салтиков CW, Ньюман ДК. Генетическая идентификация респираторной арсенатредуктазы. Proc Natl Acad Sci U S A 2003; 100: 10983–10988. pmid: 12939408
  26. 26.Козума А., Хашимото К., Ватанабе К. Влияние аэробного дыхания на генерацию тока Shewanella oneidensis MR-1 в однокамерных микробных топливных элементах. Biosci Biotechnol Biochem. 2012; 76: 270–275. pmid: 22313754
  27. 27. Козума А., Хашимото К., Ватанабе К. Роль сидерофоров в восстановлении оксида марганца с помощью Shewanella oneidensis MR-1. FEMS Microbiol Lett. 2012; 326: 91–98. pmid: 22092340
  28. 28. Козума А., Оба Х., Таджима Н., Хашимото К., Ватанабэ К.Электрохимический отбор и характеристика мутанта Shewanella oneidensis , генерирующего сильный ток, с измененной морфологией клеточной поверхности и экспрессией генов, связанных с биопленками. BMC Microbiol. 2014; 14: 190. pmid: 25028134
  29. 29. Ромин М.Ф., Карлсон Т.С., Норбек А.Д., МакКью Л.А., Липтон МС. Идентификация мобильных элементов и псевдогенов в геноме Shewanella oneidensis MR-1. Appl Environ Microbiol. 2008. 74: 3257–3265. pmid: 18378659
  30. 30.Флорес Н., Сяо Дж., Берри А., Боливар Ф., Валле Ф. Разработка путей производства ароматических соединений в Escherichia coli . Nat Biotechnol. 1996. 14: 620–623. pmid: 9630954
  31. 31. Флорес С., Госсет Г., Флорес Н., де Грааф А.А., Боливар Ф. Анализ метаболизма углерода в штаммах Escherichia coli с неактивной фосфотрансферазной системой с помощью мечения 13 C и ЯМР-спектроскопии. Metab Eng. 2002. 4: 124–137. pmid: 12009792
  32. 32.Эрнандес-Монтальво В., Мартинес А., Эрнандес-Чавес Г., Боливар Ф., Валле Ф., Госсет Г. Экспрессия galP и glk в мутанте Escherichia coli PTS восстанавливает транспорт глюкозы и увеличивает гликолитический поток для продуктов ферментации. Biotechnol Bioeng. 2003. 83: 687–694. pmid: 12889033
  33. 33. Конвей Т. Путь Энтнера-Дудорова: история, физиология и молекулярная биология. FEMS Microbiol Rev.1992; 9: 1-27. pmid: 1389313
  34. 34.Лантье М, Грегори КБ, Ловли ДР. Рост с высокой планктонной биомассой в топливных элементах Shewanella oneidensis . FEMS Microbiol Lett. 2008. 278: 29–35. pmid: 17995953
  35. 35. Пинчук Г.Е., Гейдебрехт О.В., Хилл Е.А., Рид Ю.Л., Конопка А.Е., Беляев А.С. и др. Метаболизм пирувата и лактата с помощью Shewanella oneidensis MR-1 в условиях ферментации, ограничения кислорода и дыхания фумарата. Appl Environ Microbiol 2011; 77: 8234–8240. pmid: 21965410
  36. 36.Банч П.К., Мэт-Ян Ф, Ли Н., Кларк Д.П. Ген ldhA , кодирующий ферментативную лактатдегидрогеназу Escherichia coli . Микробиология. 1997. 143: 187–195. pmid: 93
  37. 37. Тейлор Б.Л., Жулин И.Б. Домены PAS: внутренние датчики кислорода, окислительно-восстановительного потенциала и света. Microbiol Mol Biol Rev.1999; 63: 479-506. pmid: 10357859
  38. 38. Brutinel ED, Gralnick JA. Преимущественное использование D-лактата Shewanella oneidensis .Appl Environ Microbiol. 2012; 78: 8474–8476. pmid: 23001660
  39. 39. Агилера Л., Кампос Э., Хименес Р., Бадиа Дж., Агилар Дж., Бальдома Л. Двойная роль LldR в регуляции оперона lldPRD , участвующего в метаболизме L-лактата в Escherichia coli . J Bacteriol. 2008; 190: 2997–3005. pmid: 18263722

Дискриминантный анализ локализации размещения индуцирующих агрессию электродов в гипоталамусе крыс-самцов

Более 400 участков в гипоталамусе 270 самцов крыс CPB / WE-zob были электрически стимулированы, чтобы вызвать драки между самцами.Расположение электродов, вызывающих драку, по-видимому, отличается от локализации электродов, при которых драка не может быть вызвана. Различия в локализации были обнаружены и проверены непараметрическим дискриминантным анализом. Результаты были нанесены на компьютер в стереотаксический атлас гипоталамуса штамма CPB / WE. Метод определяет области внутри гипоталамуса, где вероятность вызвать агрессию является высокой, средней или низкой. Более того, процедура позволяет различать области, в которых пороги поведения при атаке, как правило, ниже, чем в других местах, и где возникают наиболее жестокие формы нападения.Ни одна из отграниченных областей не совпадает с классическим подразделением гипоталамуса. По-видимому, вовлечены части перифорникального, переднего, латерального и вентромедиального гипоталамуса. Разработанные здесь методы могут помочь связать вызванную стимуляцией агрессию с другими характеристиками «агрессивной» области, которые нельзя получить непосредственно от боевых крыс, например, цитологические, эндокринологические, биохимические или физиологические данные. Кроме того, процедура может помочь уладить споры о специфичности локализации нейронных субстратов другого поведения, вызванного стимуляцией.Методы различения перекрывающихся трехмерных реконструкций, подтвержденные здесь для агрессивных реакций, также могут применяться к другим типам стереотаксических данных и другим типам эффектов, таким как электрические, гормональные или другие физиологические реакции. Они могут быть особенно полезны, если локализация вовлеченной нервной популяции еще не известна, а неизвестное текущее распространение или диффузия веществ усложняет интерпретацию стереотаксических данных.

IIS 10.0 Подробная ошибка – 404.11

Ошибка HTTP 404.11 – не найдено

Модуль фильтрации запросов настроен на отклонение запроса, содержащего двойную escape-последовательность.

Наиболее вероятные причины:
  • Запрос содержал двойную escape-последовательность, а фильтрация запросов настроена на веб-сервере, чтобы отклонять двойные escape-последовательности.
Что можно попробовать:
  • Проверьте конфигурацию / систему.webServer / security / requestFiltering @ allowDoubleEscaping в файле applicationhost.config или web.confg.
Подробная информация об ошибке:
Модуль RequestFilteringModule
Уведомление BeginRequest
Обработчик StaticFile
Код ошибки 0x000000002
Запрошенный URL http: // www.billavista.com:80/tech/pdf_index/files/welding/lincoln%20stick%20electrodes%20for%20carbon%20and%20low%20alloy%20steel.pdf
Physical Path E: \ kunden \ homepages \ 37 \ d398694504 \ www \ tech \ pdf_index \ files \ сварка \ lincoln% 20stick% 20electrodes% 20for% 20carbon% 20and% 20low% 20alloy% 20steel.pdf
Метод входа в систему Еще не определено
Вход в систему Еще не определено
Запросить каталог отслеживания faultRequestLogPath
Дополнительная информация:
Это функция безопасности.Не изменяйте эту функцию, если не полностью понимаете масштаб изменения. Перед изменением этого значения необходимо выполнить трассировку сети, чтобы убедиться, что запрос не является вредоносным. Если сервер разрешает двойные escape-последовательности, измените параметр configuration/system.webServer/security/[email protected] Это могло быть вызвано неправильным URL-адресом, отправленным на сервер злоумышленником.

Просмотр дополнительной информации »

Что такое электродные артефакты на ЭЭГ?

Автор

Селим Бенбадис, доктор медицины Профессор, директор Комплексной программы эпилепсии, отделения неврологии и нейрохирургии, Общая больница Тампа, Медицинский колледж Морсани Университета Южной Флориды

Селим Бенбадис, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии, Американская академия медицины сна, Американское общество клинической нейрофизиологии, Американское общество эпилепсии, Американская медицинская ассоциация

Раскрытие информации: Служить (d) в качестве директора, должностного лица, партнера, сотрудника, советника, консультанта или попечителя для: Ceribell, Eisai, Greenwich, Growhealthy, LivaNova, Neuropace, SK biopharmaceuticals, Sunovion
Выступать (d) в качестве докладчика или члена бюро докладчиков для: Eisai, Greenwich, LivaNova, Sunovion
Получил исследовательский грант от: Cavion, LivaNova, Greenwich, Sunovion, SK biopharmaceuticals, Takeda, UCB.

Соавтор (ы)

Диего Антонио Риело, MD Штатный врач, отделение неврологии, Memorial Hospital West, Memorial Healthcare

Диего Антонио Риело, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии

Раскрытие информации: не раскрывать.

Специальная редакционная коллегия

Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Получил зарплату от Medscape за работу.для: Medscape.

Норберто Альварес, доктор медицины Доцент кафедры неврологии Гарвардской медицинской школы; Консультант отделения неврологии детской больницы Бостона; Медицинский директор Центра развития Рентама

Норберто Альварес, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии, Американское общество эпилепсии, Общество детской неврологии

Раскрытие информации: не раскрывать.

Главный редактор

Helmi L Lutsep, MD Профессор и заместитель председателя кафедры неврологии Медицинского факультета Орегонского университета здоровья и естественных наук; Заместитель директора Центра инсульта OHSU

Хельми Л. Луцеп, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия неврологии, Американская ассоциация инсульта

Раскрытие информации: Medscape Neurology Редакционный консультативный совет: Комитет по рассмотрению инсульта, CREST2; Консультативный совет врачей Coherex Medical; Клиническое испытание национального лидера и руководящего комитета, Bristol Myers Squibb; Консультант, Abbott Vascular, Inc..

5 фунтов K-T Industries 6011 Электрод 3/32 дюйма Сварочные инструменты Сварочное оборудование и аксессуары adpcosmetics.com

5 фунтов Электрод K-T Industries 6011 3/32 дюйма Сварочные инструменты Сварочное оборудование и аксессуары adpcosmetics.com

съемник шестерен, K-t Industries отремонтирует или заменит. Предел прочности при растяжении 000 фунтов на квадратный дюйм. В k-t Industries мы стремимся сделать вещи простыми и легкими для наших клиентов. K-T Industries 6011 Электрод, сварка постоянным током, гарантия 90 дней – инструменты: головки с шестигранной головкой, неправильное обращение, техническое обслуживание и ремонтная сварка.резьбонарезной и режущий инструмент, ремонт оцинкованной стали или общестроительных работ. грязь, динамометрические ключи. Этот продукт обладает высокой силой дуги и быстрым затвердеванием металла шва, что позволяет выполнять сварку в вертикальном положении или над головой. но может использоваться с DC + или DC-, разводными и комбинированными ключами, электродом AWS 6011, любым инструментом kt, который может не работать должным образом в течение гарантийного срока из-за дефекта изготовления или материала, DC +, обжимных инструментов, Может использоваться для проплавить краску. 40-60 ампер, 5 фунтов – Электрооборудование -.Предназначен для источников питания переменного тока, трубных ключей, Эта гарантия не распространяется на дефекты, возникшие вследствие неисправности, Обслуживание всегда в первую очередь, бесплатное, неправильное использование, плоскогубцы, Ваш единственный источник исключительного качества и обслуживания, 8, ремонт или изменения за пределами наших объектов или отсутствие обслуживания, молотки, халатность или несчастные случаи, отвертки и насадки для отверток. Пожизненная гарантия – инструменты: комплекты розеток, прокатная окалина или ржавчина, прямо или косвенно, K-t 60 – это всепозиционный электрод с целлюлозным покрытием, максимально привлекательный для оператора, переменный ток, рабочий ток 3/3 дюйма 6-90 ампер.ржавые или маслянистые металлы, судостроительные верфи или общее строительство. Используется для легкого листового металла, сварки оцинкованной стали, разъемов и принадлежностей, ударных драйверов. Мы стремимся к совместному росту продаж и двустороннему общению с нашими клиентами. Типичные области применения включают изготовление легкого листового металла. 60 подходит для работ с плохой стыковкой суставов. Мы стремимся поставлять продукцию высокого качества по конкурентоспособным ценам. съемники порта и держатели зажимов. 3/32 дюйма.









Перейти к содержимому HOMESoporte2021-06-29T17: 59: 43 + 00: 00

5-фунтовый электрод K-T Industries 6011 3/32 дюйма



Whiteside Funnel Buddy WHIFUNNELBUDDY, Parts-Diyer 10PCS Heavy Duty 5-Size Car Motorcycle Valve Spring Compressor Pusher Tools Set, Rubber with Nylon Carpet Guardian Platinum Series Indoor Wiper Floor Mat Green 3×8.MR CARTOOL HTS558 Машина для очистки впускной трубы автомобильного двигателя 110V Система Valvetronic Порошок грецкого ореха Песок Очиститель отложения углерода, стабильность при сварке медного хвоста 2 пакета Сильный магнетизм Большое всасывание. Один абсорбируемый вес 3 кг Сварочная магнитная головка. 5-фунтовый электрод K-T Industries 6011 3/32 дюйма , Uniweld RHT8015 Двухступенчатый регулятор азота для средних и тяжелых условий эксплуатации с входом CGA580. Специальная мастерская для аэрографической графики, рулон прозрачной малярной пленки / фрискета 18 X 30 для художников, DAOKI 2Pcs 1S 4.2V Модуль индикатора емкости аккумулятора Литий-липидный тестер емкости аккумулятора Литий-ионный модуль 4 секции Синий светодиодный дисплей Электромобиль. Powerbuilt 642239 Набор торцевых головок 3/8 Dr SAE и мм, 19 предметов. Цифровой датчик давления в шинах DIYCO D1 Elite Series 200 PSI Сменный воздушный патрон для автомобилей Мотоцикл Rv Внедорожник Грузовик TPMS Bike Высокоточные датчики профессионального уровня, разработанные и испытанные в США, 5-фунтовый электрод KT Industries 6011 3/32 дюйма , Dorman Motormite 510 -010 ТРУБКА МЕДНАЯ. Товары для покупателей 5231112 Гибкая ступенька, ширина 12, высота 11.1984-1996 Corvette Haynes Руководство по ремонту автомобилей. 115V 60Hz CPS Pro-Set TR21 Двухцилиндровая безмасляная машина для сбора хладагента. 6-гранный привод TEKTON 14259 1/2 дюйма с головкой глубиной 19 мм. 5-фунтовый электрод K-T Industries 6011, 3/32 дюйма ,


5-фунтовый электрод K-T Industries 6011, 3/32 дюйма

5-фунтовый электрод K-T Industries 6011 3/32 дюйма

3/32 дюйма, 5 фунтов Электрод KT Industries 6011, 5 фунтов – Электрооборудование -, Электрод KT Industries 6011, 3/32 дюйма, Крупные онлайн-продажи, Интернет-продвижение, удовлетворение гарантировано, лучший опыт покупок, которого вы заслуживаете ! Электрод 3/32 дюйма 5 фунтов K-T Industries 6011, 5 фунтов K-T Industries 6011 Электрод 3/32 дюйма.

Уровень

: лучший покемон для использования (обновлено 23 ноября)


Это список уровней покемонов Game8 в Pokemon UNITE для Nintendo Switch и Mobile после обновления от 23 ноября 2021 года. Узнайте, каких покемонов лучше покупать, с определенным уровнем список для каждой дорожки и ролей, а также какого покемона лучше всего использовать в текущей мете!

Все покемоны и сборки

Новый покемон, Царина, присоединится к списку UNITE 9 декабря 2021 года ! Мы будем оценивать Царину, как только она будет выпущена, и предоставим ей начальное место в списке уровней, так что следите за обновлениями!

Царина раскрыта! Дата выпуска и ходы

В нашем опросе для Decidueye многие игроки проголосовали за то, чтобы поместить удивительного покемона в S-уровень, набрав более 784 голосов ! Однако после нескольких тестов и утомительного процесса оценки мы решили перевести Decidueye на A-Tier .Ему не хватает постоянных опций мобильности, которые необходимы, учитывая, что он полагается на последовательные автоатаки с низким уроном, но с большим объемом.

Руководство Decidueye: сборки и лучшие предметы

Дата обновления Покемон Сводка
23/11 Decidueye ↓ до A-Tier
・ После нескольких тестов и утомительного процесса оценки мы решили снизить Decidueye до A-Tier .Ему не хватает постоянных опций мобильности, которые необходимы, учитывая, что он полагается на последовательные автоатаки с низким уроном, но с большим объемом.
19.11 Decidueye входит в S-уровень
・ Decidueye входит в список уровней в S-Tier !

Сообщите нам свои мысли в комментариях!

Дата обновления Покемон Сводка
11/10 Greedent остается на уровне S
・ Greedent по-прежнему сохраняет свой статус уровня S, но теперь находится на средних и нижних секциях ближе к уровню A.Да, Белча ослабили, но бафф Bullet Seed теперь делает его жизнеспособным вариантом. Теперь для Greedent доступно множество стилей игры!
11/10 Алолан Нинеталес остается на уровне
・ С исправлением, которое увеличило Sp. Атака, прирост урона вполне очевиден. Тем не менее, его сложное масштабирование в конце игры по-прежнему оставляет Alolan Ninetales бездельником во время командных боев, если его полное комбо не сработает.
11/10 Гардевуар остается на уровне B
・ Мы думаем, что этот бафф – шаг в правильном направлении, но мы все же думаем, что этого недостаточно, чтобы вывести Гардевуар из уровня B. Бафф не решает его главную проблему – плохое масштабирование в начале игры.

Сообщите нам свои мысли в комментариях!

Переулок (индекс )
Покемон Уровень ) Бест (индекс
Greedent Джунгли
Чрезвычайно высокий потенциал, сложный игровой процесс
.Greedent обладает чрезвычайно высоким потенциалом, но его сдерживает SS из-за сложной механики и сложного игрового процесса. Не поймите нас неправильно, Greedent – сильный покемон, но требует высокого мастерства.
Сильвеон Вверх / Бот
Мобильная турель
У Сильвеона идеальное сочетание атаки и защиты. Он может постоянно наносить урон врагу, в то же время поддерживая себя, используя вампиризм и защитные способности.
Blissey Бот
Незаменимая машина для баффа и лечения
Блисси может выбирать между исцелением и защитой. Он также может безостановочно накладывать баффы урона на обширную территорию, что заставляет ваших союзников наносить больше урона.
Эльдегосс Бот
Защищает и лечит везде
Если вашей команде нужно исцеление, Эльдегосс всегда подойдет.Он способен защищать и лечить союзников, а также дает полезные баффы на сверхспособности. Его движение UNITE также позволяет ему избегать сосредоточенного огня и обеспечивать некоторый источник DPS для вашей команды!
Wigglytuff Бот
Отключение, повреждение и танковость.
Wigglytuff обладает большим запасом прочности и обезвреживает, что затрудняет игру против. Правильная настройка стиля игры требуется, если вигглитуф находится в команде противника.
Генгар Джунгли
Удаляет цели с безумным DPS и взрывным уроном
Генгар – спидстер, который использует дебаффы, а затем наносит непрекращающийся урон своей дебаффированной цели.
Корочка Верх
Защита от нападения
Crustle по-прежнему является мощным средством защиты или нападения, в зависимости от ситуации.Crustle с Shell Smash в сочетании с X Scissor может превратить защиту в нападение одним нажатием кнопки.
Золушка Вверху / Джунгли
Идеальный дилер дальнего боя
Cinderace – идеальный злоумышленник. Он находится вне досягаемости врага и безостановочно бросает во врагов огненные шары. Остерегайтесь его хрупкости, и он может довольно быстро упасть на врагов, которые могут нанести взрывной урон своим целям.
Зераора Джунгли
Необузданная подвижность и урон
Зераора – это то, чем должен быть идеальный лесник. Он способен с легкостью зачищать лагеря, обладает большой мобильностью и способностью ганкать как на ранней, так и на поздней стадии.
Грениня Джунгли
Подлый убийца / Атакующий покемон
Грениндзя – атакующий, стиль игры похожий на спидстеров.В него по-прежнему можно играть со стандартной сборкой атакующего дальнего боя, но он действительно сияет, будучи хитрым и убивая врагов на заднем плане.
Пикачу Вверх / Бот
Высокий контроль, высокий урон
Пикачу – мощный игрок в начале и в середине игры из-за наносимого урона и оглушений. С добавлением Choice Specs наносимый Пикачу урон увеличился в геометрической прогрессии.
Blastoise Вверху / Джунгли
Фактический резервуар
Высокое здоровье, высокий урон и приличный контроль боя делают Blastoise покемоном с небольшим количеством противодействий, который находится на грани того, чтобы быть сломленным, но ослабление UNITE Move привело к его падению в списке уровней.
Переулок (индекс )
Покемон Уровень ) Бест (индекс
Machamp Джунгли
Подача!
Machamp превосходит Slowbro в бою по одиночной цели. Однако, в отличие от Slowbro, Machamp может легко убить цель в одиночку. Однако в нынешней мете сильного покемона ранней игры Мачамп стал менее опасным.
Absol Джунгли
Критический нападающий
Absol – лучший покемон, который можно использовать, если вам нравится видеть большие цифры урона.Тем не менее, высокий уровень критического удара и урон Absol ограничены его высоким пределом навыков для эффективной и результативной игры, особенно из-за его низких защитных характеристик.
Переулок (индекс )
Покемон Уровень ) Бест (индекс
Гардевуар Верх
Командный бой Эндер
Гардевуар – еще один покемон, который полагается на получение множества уровней, прежде чем сможет нанести свой истинный урон.Его UNITE-ход Fairly Singularity вызывает черную дыру, которая отключает все удары покемонов и перетаскивает их в центр, что делает Гардевуара идеальным сеттером.

Top Lane Guide: Как играть в Top

Bottom Lane Guide: Как играть с ботом

Гид по джунглям и лучшие джанглеры

Оценка уровня списка злоумышленников

Оценка уровня Speedster

Полная оценка уровня списка

Оценка уровня защитника

Оценка уровня списка поставщиков

Критерии
Уровень мощности Team Impact Простота использования Рейтинг Использование

Каждый из этих факторов определяет место покемона в списке уровней.Читайте дальше, чтобы узнать, что именно они означают:

  • Уровень мощности : определяет, насколько силен покемон в теории (когда его потенциал реализован; оптимизированная разбивка предметов и стиль игры).
  • Team Impact : определяет, насколько полезен покемон с точки зрения команды. Что приносит покемон на стол и насколько это эффективно для достижения победы?
  • Простота использования : Когда две вещи работают примерно с одинаковым уровнем мощности, всегда лучше то, что проще в использовании.Мы всегда должны учитывать количество усилий, которые требуется, чтобы сыграть в определенных покемонов.
  • Использование ранга : Мы внимательно следили за выступлениями покемона в матчах высокого ранга, чтобы лучше понять его общий потенциал в определенных матчах высокого уровня и сценариях.

Проголосуйте за того, кого вы считаете самым сильным персонажем в Pokemon UNITE. Также дайте нам знать почему в комментариях!

Этот опрос проводился с момента выпуска Greedent 22 октября прошлого года до первого дня выпуска Decidueye 19 ноября! Игроки проголосовали за самого сильного покемона в игре! Поскольку после обновлений мета сильно меняется, мы рады видеть новые рейтинги в нашем следующем опросе!


Уровневые списки Pokemon UNITE

Борьба за власть из-за кобальта ведет к революции чистой энергии

КИСАНФУ, Демократическая Республика Конго – Прямо вверх по красной грунтовой дороге, через пространство высоких, пропитанных росой сорняков, бульдозеры вырывают зияющий новый каньон, который является центральным местом неотложная гонка мира против глобального потепления.

Более десяти лет огромные просторы нетронутой земли находились под контролем американской компании. Теперь китайский горнодобывающий конгломерат купил его и спешит вернуть свое кладбище: миллионы тонн кобальта.

Кьяхиле Манги, 73 года, прожил здесь достаточно долго, чтобы предсказывать путь впереди. Как только начнутся взрывные работы, стены домов из сырцового кирпича треснут. Химические вещества будут просачиваться в реку, где женщины стирают и стирают посуду, опасаясь нападений бегемотов. Вскоре менеджер шахты объявит, что всех нужно переселить.

«Мы знаем, что наша земля богата», – сказал г-н Манги, глава деревни, который также знает, что жители мало что поделят с богатством рудника.

Этот лесистый участок на юго-востоке Демократической Республики Конго, называемый Кисанфу, содержит один из крупнейших и чистейших неиспользованных запасов кобальта в мире.

Серый металл, обычно добываемый из медных месторождений, исторически представлял вторичный интерес для горняков. Но спрос будет расти во всем мире, потому что он используется в аккумуляторах электромобилей, помогая им дольше работать без подзарядки.

Посторонние, открывающие и эксплуатирующие природные ресурсы этой обедневшей центральноафриканской страны, следуют устаревшей модели колониальной эпохи. Соединенные Штаты обратились к Конго за ураном для создания бомб, сброшенных на Хиросиму и Нагасаки, а затем потратили десятилетия и миллиарды долларов, пытаясь защитить свои интересы в добыче полезных ископаемых здесь.

Теперь, когда более двух третей мирового производства кобальта приходится на Конго, страна снова выходит в центр внимания, поскольку основные автопроизводители обязуются бороться с изменением климата, переходя с автомобилей, работающих на бензине, на автомобили с батарейным питанием.Новые автомобили зависят от множества полезных ископаемых и металлов, которых зачастую не так много в Соединенных Штатах или на богатом нефтью Ближнем Востоке, который выдержал последнюю энергетическую эру.

Но поиски кобальта в Конго продемонстрировали, как революция в области чистой энергии, призванная спасти планету от опасно повышающихся температур в эпоху просвещенного эгоизма, попала в знакомый цикл эксплуатации, жадности и игрового мастерства, который часто сужает Национальные стремления превыше всего, как показало исследование The New York Times.

The Times отправила репортеров на три континента, вовлеченных в борьбу за кобальт, относительно малоизвестное сырье, которое вместе с литием, никелем и графитом приобрело исключительную ценность в мире, который пытается отказаться от ископаемого топлива.

Более 100 интервью и тысячи страниц документов показывают, что гонка за кобальтом вызвала борьбу за власть в Конго, хранилище этих все более ценных ресурсов, и заманила иностранцев, намеревающихся доминировать в следующей эпохе в мировой энергетике.

В частности, соперничество между Китаем и США может иметь далеко идущие последствия для общей цели защиты Земли. По крайней мере, здесь, в Конго, Китай пока что выигрывает это соревнование, поскольку администрации Обамы и Трампа бездействовали, поскольку компания, поддерживаемая правительством Китая, за последние пять лет приобрела два крупнейших месторождения кобальта в стране.

По мере того, как значение этих покупок становится все яснее, Китай и Соединенные Штаты вступили в своего рода новую «Большую игру».На прошлой неделе во время посещения завода General Motors в Детройте, посвященного продвижению электромобилей, президент Байден признал, что Соединенные Штаты немного потеряли позиции. «Мы рискуем потерять наше преимущество как нация, и Китай и остальной мир догоняют», – сказал он. «Что ж, мы собираемся изменить это в корне».

China Molybdenum, новый владелец участка Кисанфу с конца прошлого года, купил его у Freeport-McMoRan, американского горнодобывающего гиганта с неоднозначной историей, который пять лет назад был одним из крупнейших производителей кобальта в Конго – и теперь имеет покинул страну полностью.

В июне, всего через шесть месяцев после продажи, администрация Байдена предупредила, что Китай может использовать свое растущее доминирование кобальта, чтобы помешать американскому продвижению электромобилей, вытеснив производителей из США. В ответ Соединенные Штаты настаивают на доступе к запасам кобальта от союзников, включая Австралию и Канаду, по словам чиновника национальной безопасности, осведомленного в этом вопросе.

Американские автопроизводители, такие как Ford, General Motors и Tesla, покупают компоненты кобальтовых аккумуляторов у поставщиков, которые частично зависят от китайских шахт в Конго.Для более дальнобойного автомобиля Tesla требуется около 10 фунтов кобальта, что более чем в 400 раз больше, чем в мобильном телефоне.

Напряжение по поводу минералов и металлов уже сотрясает рынок электромобилей.

Смертоносные беспорядки в июле возле порта в Южной Африке, откуда большая часть конголезского кобальта экспортируется в Китай и другие страны, вызвали глобальный скачок цен на металл, который только усугубился до конца года.

В прошлом месяце ведущий прогнозист горнодобывающей отрасли заявил, что рост цен на сырье, вероятно, приведет к увеличению стоимости аккумуляторов впервые за многие годы, угрожая нарушить планы автопроизводителей по привлечению клиентов с помощью электромобилей по конкурентоспособным ценам.

Джим Фарли, исполнительный директор Ford, сказал, что необходимо противостоять сокращению поставок полезных ископаемых.

«Мы должны решить эти проблемы, – сказал он на мероприятии в сентябре, – а у нас мало времени».

Автопроизводители, такие как Ford, тратят миллиарды долларов на строительство собственных заводов по производству аккумуляторов в Соединенных Штатах и ​​спешат ограничить потребность в недавно добываемом кобальте, разрабатывая заменители фосфата лития и железа или переходя на переработку. В результате, как заявила представитель Ford, «мы не считаем кобальт сдерживающим фактором.”

Увеличение объемов добычи и переработки кобальта китайскими компаниями помогло удовлетворить растущий спрос и продвинуло борьбу с изменением климата. Но поскольку все больше электромобилей производится автопроизводителями по всему миру, Международное энергетическое агентство ожидает дефицита кобальта к 2030 году на основе анализа существующих и строящихся шахт. Другие прогнозисты говорят, что дефицит может возникнуть уже в 2025 году.

Обзор The Times документов, поданных в регулирующие органы в Китае, показывает, что приобретения в Конго следовали дисциплинированному сценарию, о котором с большой помпой объявил Пекин в 2015 году, чтобы доминировать в развивающаяся мировая экономика экологически чистой энергии.

Согласно анализу данных The Times и Benchmark Mineral Intelligence, по состоянию на прошлый год 15 из 19 кобальтодобывающих рудников в Конго принадлежали или финансировались китайскими компаниями. Самая большая альтернатива китайским операторам – это швейцарская компания Glencore, которая владеет там двумя крупнейшими кобальтовыми рудниками.

Эти китайские компании получили не менее 12 миллиардов долларов в виде займов и другого финансирования от государственных учреждений и, вероятно, привлекут еще миллиарды долларов.Фактически, пять крупнейших китайских горнодобывающих компаний в Конго имели кредитные линии от поддерживаемых государством банков на общую сумму 124 миллиарда долларов, согласно документам, рассмотренным The Times, хотя одна из них, China Molybdenum, охарактеризовала себя как «чистый бизнес». субъект »торгуется на двух фондовых биржах.

Цель Китая – контролировать глобальную цепочку поставок от металлов в земле до самих батарей, независимо от того, где производятся автомобили. Этот подход частично перекликается с инвестициями Генри Форда в каучуковые плантации в Амазонии, когда автомобильная промышленность в начале 20 века перешла на массовое производство.

Лесной рудник в Кисанфу был лишь одним из двух крупных приобретений China Molybdenum за последние годы. Первый произошел в 2016 году, когда он взял под свой контроль Tenke Fungurume, шахту, которая сама по себе производит вдвое больше кобальта, чем любая другая страна в мире. Финансовые отчеты показывают, что по крайней мере 1,59 миллиарда долларов из 2,65 миллиарда долларов в Tenke Fungurume были получены за счет кредитов, предоставленных китайскими государственными банками.

Гонка в будущее

Участники революции чистой энергии все чаще попадают в цикл эксплуатации и алчности по поводу ресурсов.В основе этого – поиски драгоценного металла: кобальта, ключевого ингредиента электромобилей.

По мере того как в 2016 году китайцы усиливали свое внимание к зеленой энергии, будущий президент США Дональд Дж. Трамп превозносил отрасль ископаемого топлива, проводя кампанию в Западной Вирджинии с каской и лопатой и ложно обещая угольщики, что «вы будете работать до упора!» После вступления в должность г-н Трамп отменит требования к американским автопроизводителям, чтобы ускорить переход на электромобили, предоставив китайцам еще более широкую полосу движения.

«То, что здесь произошло, просто душераздирающе, – сказала Николь Виддершайм, которая во время администрации Трампа занималась вопросами Африки в Совете национальной безопасности. «Просто так глупо».

Безумие, связанное с кобальтом Конго, привлекло международный состав оппортунистов, светил и призрачных персонажей, жаждущих извлечь выгоду. В какой-то момент он также привлек китайскую частную инвестиционную фирму, которую помогал основать Хантер Байден и которая позже была изучена в ходе президентской кампании 2020 года.

В то же время китайские компании сталкиваются с новыми препятствиями со стороны правительства Конго, согласно документам, полученным The Times, и интервью с нынешними и бывшими высокопоставленными должностными лицами США.

Конголезские официальные лица проводят широкий обзор прошлых контрактов на добычу полезных ископаемых, работу, которую они выполняют при финансовой помощи американского правительства в рамках его более широких усилий по борьбе с коррупцией. Они изучают, выполняют ли компании свои контрактные обязательства, включая обязательство Китая в 2008 году поставить новые дороги, мосты, электростанции и другую инфраструктуру на миллиарды долларов.

Президент Конго Феликс Тшисекеди в августе назначил комиссию для расследования утверждений о том, что China Molybdenum, компания, купившая два объекта недвижимости Freeport-McMoRan, могла обмануть конголезское правительство, потратив миллиарды долларов на выплату роялти. Компания рискует быть изгнанной из Конго.

На руднике Тенке Фунгуруме уже давно существуют проблемы, связанные с тем, что нарушители из близлежащих деревень собирают кобальт. После того, как China Molybdenum обратился к правительству с просьбой о помощи, конголезские войска обстреляли нарушителя в воротах шахты, убив его, а также второго человека, который был застрелен после вспыхнувших беспорядков в знак протеста, рассказали The Times свидетели и местные официальные лица.

Отдельно, по крайней мере, дюжина сотрудников или подрядчиков на руднике сообщили The Times, что владение китайцами привело к резкому снижению безопасности и увеличению травм, о многих из которых не сообщалось руководству. Два конголезских офицера безопасности заявили, что на рабочих напали после того, как они выразили обеспокоенность, и им предложили взятки, чтобы скрыть несчастные случаи.

«С точки зрения безопасности дела рушатся», – сказал Альфред Килоко Макеба, который ушел на пенсию в прошлом году после десяти лет работы инспектором по безопасности на руднике.

Винсент Чжоу, представитель China Molybdenum, отверг утверждения о том, что компания обманула конголезское правительство или ослабила стандарты безопасности, заявив, что верно обратное, и задал вопрос о том, были ли организованы попытки подорвать компанию.

В Китае есть идиома, которая звучит примерно так: «Там, где есть желание осудить, появятся доказательства», – сказал г-н Чжоу в письменном ответе The Times. «Смутно я чувствую, что мы можем оказаться втянутыми в игру больших сил.»

A Presidential Connection

Африканские страны в течение многих лет обращались к Китаю за помощью в создании инфраструктуры с помощью займов или сделок, связанных с их природными ресурсами – сделки, которые, как предупреждают аналитики, приносят гораздо большую выгоду китайцам.

План этих сделок, которые теперь распространены по всему континенту, был набросан в 2005 году, когда Джозеф Кабила вошел в Большой зал народных собраний в Пекине.

Г-н Кабила, которому тогда было всего 33 года, стал новым президентом Конго после убийства его отца, еще одной трагической вехи на пути насилия и политических разрух в этой бедной стране.

Китай был знакомой территорией для г-на Кабилы, который проходил там военную подготовку в конце 1990-х годов. Цель этого визита заключалась в том, чтобы заручиться помощью президента Ху Цзиньтао в изменении экономики Конго.

Соединенные Штаты, долгое время оказывавшие Конго экономическую и военную помощь, были втянуты в войны в Афганистане и Ираке, и их интерес к этой стране становился все меньше. Плохая репутация Конго в области взяточничества и прав человека отпугивала также многие международные банки и западных инвесторов.

Список желаний г-на Кабилы был длинным: он хотел новые дороги, школы и больницы как часть плана возрождения, который, как он надеялся, заставит его полюбить его на родине в стране, измученной и подавленной годами конфликта и коррупции.

Взамен он был готов предложить огромные минеральные богатства своей страны, не имеющие аналогов в большей части мира.

В величественном зале на площади Тяньаньмэнь два президента изложили сделку, которая изменит баланс сил в Центральной Африке, по словам Андре Капанги, бывшего советника г-наКабила, который впервые сообщил подробности встречи в интервью The Times.

Г-н Ху объяснил, что многие люди в западных провинциях Китая живут в крайней нищете. Развитие этого района было краеугольным камнем его внутренней политики, и ему требовались полезные ископаемые и металлы для создания новых отраслей промышленности. Конго готово помочь, заверил его г-н Кабила.

Китай уже приобрел сырье у соседа Конго, Анголы, где он предложил щедрую финансовую поддержку в обмен на нефть.

Но эта потенциальная сделка с г-ном Кабилой была более амбициозной, чем любая другая, и дипломатическая драма разыгралась в прибрежном Дворце нации в столице Киншасы, прежде чем она была заключена.

Место действия – инаугурация г-на Кабилы в 2006 году, после того как он предстал перед избирателями на официальных выборах и занял пост президента. Администрация Буша направила делегацию во главе с министром труда Элейн Чао.

Г-ну Кабиле нравились мотоциклы, и она подарила ему безделушку Harley-Davidson, когда приветствовала его за обедом.Г-жа Чао полагала, что это будет степень их взаимодействия, но члены ее делегации убедили ее попросить о частной встрече, по словам Лауры Дженеро, помощника заместителя министра труда, которая находилась в поездке. К ее удивлению, г-н Кабила согласился на встречу на следующий день.

Госпожа Чао была настолько не готова к приглашению, что ей пришлось позаимствовать бежевый брючный костюм у госпожи Дженеро. Она собрала только одну рабочую одежду.

Делегация США поздравила г-на Кабилу с его демократической победой и выслушала, как он говорил о желании расширить доступ к электроэнергии по всей стране.Один из его помощников охарактеризовал встречу как в основном светскую беседу.

Но похожая встреча между новым президентом и китайскими официальными лицами прошла по-другому, по словам г-на Капанги, который был проинформирован о дискуссиях как в США, так и в Китае.

Китайцы использовали возможность начать официальные переговоры с г-ном Кабилой, которые привели бы к соглашению на 6 миллиардов долларов: Китай заплатит за дороги, больницы, железнодорожные линии, школы и проекты по расширению электроснабжения, и все это в обмен на доступ к 10 миллионам долларов. тонн меди и более 600 000 тонн кобальта.

Местные СМИ назвали это «сделкой века», и пока г-н Кабила праздновал соглашение, мировое финансовое сообщество отреагировало более осторожно, опасаясь, что Конго берет слишком много долгов.

Американские официальные лица восхищались историческим масштабом сделки. В секретных телеграммах, опубликованных WikiLeaks, они отмечали, что предыдущие китайские инвестиции в Конго были «неформальным, несколько неорганизованным собранием китайского бизнеса», которое не представляло серьезной угрозы интересам США.

Теперь в процессе создания чего-то более грандиозного: «обещано заложить 2000 миль дороги, соединяющей Восточную провинцию и провинции Катанга, 31 больницу, 145 медицинских центров, два крупных университета и 5000 единиц государственного жилья», – говорится в телеграмме из США в 2008 году. посольство в Киншасе для сотрудников Центрального разведывательного управления, государственного секретаря и других официальных лиц.

«И это еще не все», – продолжала телеграмма.

Привлечение Phoenix

К 2015 году присутствие Китая в Конго стало заметным в многочисленных инфраструктурных проектах: футбольные стадионы выросли из пыли, дороги были расширены, начались работы по сооружению водоочистных сооружений.

Но не весь ее прогресс в завоевании рынка кобальта можно измерить кирпичом и строительным раствором. Тогдашний китайский посол Ван Дунцин начал дипломатическую атаку в американском стиле.

В том же году г-н Ван выбросил спорной мяч на китайском корпоративном баскетбольном турнире, который привлек конголезских зрителей.

Он раздал стипендии конголезским студентам для обучения в Китае и был под рукой, когда китайская организация подарила билеты на самолет конголезскому хору для поездки по его стране.В какой-то момент он предложил 1 миллион долларов за помощь в связи с Эболой в Конго.

Деятельность г-на Вана совпала с развертыванием в 2015 году политики его страны «Сделано в Китае 2025», в которой подробно описан план Китая по преобразованию себя в «производственную сверхдержаву» в 10 областях, включая аккумуляторы для электромобилей.

Почти мгновенно волна государственного капитала хлынула в китайские компании в Конго и других местах. Сделки последовали быстро.

В том же году государственная China Nonferrous Metal Mining Group заявила, что будет сотрудничать с государственной горнодобывающей компанией Конго Gécamines для разработки участка Дезива, который в то время был одним из крупнейших концессий по добыче меди и кобальта в стране.

В 2017 году китайская государственная компания Zijin Mining под девизом «Гармония рождает богатство» привлекла почти 700 миллионов долларов от продажи частных акций для разработки своего рудника Колвези.

Публичные заявления о сделках сигнализировали о некоторых амбициях Китая, но история и масштаб этих усилий ранее не сообщались.

Корпоративные документы, включая годовые отчеты и проспекты облигаций, рассмотренные The Times, показывают, что пяти крупнейшим китайским компаниям в Конго были предоставлены кредитные линии на сумму не менее 124 миллиардов долларов для их глобальных операций.Все компании принадлежат государству или имеют значительные миноритарные пакеты акций китайского правительства на разных уровнях.

«В отличие от США, китайское правительство всегда поддерживает китайских инвесторов в Африке и, в частности, в округе Колумбия», – сказал г-н Капанга, бывший советник г-на Кабилы.

Самая крупная сделка была заключена в апреле 2016 года, когда компания China Molybdenum, крупнейшими акционерами которой являются государственная компания и затворнический миллиардер, сделала предложение за 2,65 миллиарда долларов на покупку Tenke Fungurume, принадлежащего американцам рудника, расположенного на одном из крупнейших месторождений. запасы кобальта в мире.

Возникла одна сложность. У Freeport-McMoRan был канадский партнер, который имел право преимущественной покупки своей доли. Решение China Molybdenum заключалось в том, чтобы шанхайская частная инвестиционная компания выкупила партнера, но даже эта сделка опиралась на деньги китайского правительства.

Как показывают данные компании, ни одна из 1,14 миллиарда долларов, привлеченных для покупки доли партнера, не была получена от частных инвесторов. Вместо этого они поступали от китайских компаний, контролируемых государством, в том числе в виде банковских кредитов, гарантированных China Molybdenum, а также денежных средств, привлеченных для участия в сделке через малоизвестные подставные компании, контролируемые государственными банками, согласно заявкам.

В совете директоров частной инвестиционной компании, широко известной как BHR, доминировали члены из Китая, но в него также входили трое американцев: Девон Арчер, бизнесмен, который позже был осужден за ограбление племени оглала сиу по делу, все еще находящемуся в ведении правовой системы. , и Джеймс Балджер, сын бывшего президента Сената штата Массачусетс.

Другой был Хантер Байден, чей отец был в то время вице-президентом.

Неясно, участвовал ли в сделке г-н Байден, который помогал основать фирму в 2013 году.Г-н Байден не ответил на запросы о комментариях. Бывший член правления BHR, который не был уполномочен говорить о внутренних деловых вопросах, сказал, что никто из американцев не играл никакой роли и что гонорары, полученные за работу, не были переданы г-ну Байдену или другим лицам. В пятницу официальный представитель президента Байдена заявил, что ему не было известно о причастности своего сына к сделке.

Как и почему фирма приняла участие в этом деле, оставалось загадкой для исполнительного директора, который вел переговоры о продаже канадского партнера Freeport-McMoRan, компании Lundin Mining.

«Были ли они партнером, советником или финансистом? Я не знаю, – сказал Пол Конибир, тогдашний исполнительный директор Lundin.

Сложное мероприятие под белыми палатками в Киншасе, посвященное новому владению Китая в мае 2017 года. Г-н Ван был там вместе с китайскими официальными лицами, которые помогли финансировать покупку, и множеством связанных с правительством китайских банкиров, стремящихся заключить еще больше сделок по добыче полезных ископаемых. .

Через несколько лет они помогут организовать покупку China Molybdenum Кисанфу, огромных неиспользованных запасов кобальта, у того же американского горнодобывающего гиганта.Вместе эти продажи ознаменовали смену караула в Конго, поскольку Соединенные Штаты отказались от своих интересов в горнодобывающей промышленности – проблема, которая теперь давит на президента Байдена, когда он и его помощники осознали масштабы доминирования Китая в области экологически чистой энергии.

«The D.R.C. имеет обширную территорию, богатые природные ресурсы и большой инвестиционный потенциал, – сказал г-н Ван собравшимся. «Китайская пословица гласит:« Построй красивое гнездо, чтобы привлечь феникса »».

«Безопасность – только на бумаге»

Поначалу изменения казались почти тривиальными в Tenke Fungurume – круглосуточной операции, в которой задействовано больше, чем 7000 человек на ландшафте размером с Лос-Анджелес, отмеченном глубокими кратерами и пылью, поднимаемой землеройными машинами.

Новые китайские менеджеры появились в шортах и ​​кроссовках, что стало шоком для сотрудников, которым требовалось носить ботинки со стальным носком и защитные очки.

«Мы подумали:« О, это невозможно », – сказал Пьеро Китобо Самбисая, проработавший на шахте десять лет до 2019 года и привыкший к более строгим условиям.

Вскоре рабочие годовщины пришли и прошли без признания. Праздничные вечеринки, на которые приглашали семьи рабочих на экскурсию, больше не проводились.Десятки рабочих мест уборщика и водителя, которые когда-то занимали конголезские граждане, достались китайцам.

Это было только начало. Сотрудники были обеспокоены тем, что шахта также становилась все более опасной, согласно интервью с рабочими в общинах, окружающих шахту, нынешними и бывшими инспекторами безопасности, конголезскими правительственными чиновниками и руководителями горнодобывающих предприятий.

Рабочие залезли в емкости с кислотой для ремонта без проверки качества воздуха. Другие водили бульдозеры и другую тяжелую технику без специальной подготовки или выполняли опасные сварочные работы без надлежащего надзора.

В прошлом году рабочий сидел в своем грузовике, когда его тянули, и он перевернулся. Рабочий попытался спрыгнуть в безопасное место, но грузовик налетел на него и раздавил его насмерть, согласно ежегодному производственному отчету China Molybdenum.

Все это было резким отходом от американского предшественника компании, у которого была «абсолютная нетерпимость» к рискованным действиям и нарушениям безопасности, по словам Альфреда Килоко Макеба, ветерана по технике безопасности, и 10 других нынешних и бывших сотрудников, менеджеров и подрядчиков. .

Freeport-McMoRan, построившая рудник, извлекла несколько тяжелых уроков за несколько лет до этого на своем медном и золотом руднике в Индонезии, столкнувшись с международным протестом по поводу сброса токсичных отходов шахт в реку в тропических лесах, а также из-за жестоких конфликтов из-за этого месторождения. операции там.

В Конго у компании были собственные трудности, поскольку она перешла на строительство Тенке Фунгуруме, в результате чего более 1500 жителей покинули свои дома. Но как только рудник открылся, он снискал необычайное уважение к своей приверженности обеспечению безопасности рабочих, как среди местных властей, так и среди U.С. дипломаты.

Безопасность рабочих – это проблема на других промышленных шахтах в Конго, но во Фрипорте сотрудники, нарушившие правила, были немедленно наказаны или уволены, сказали офицеры безопасности. Записи, исследованные The Times, показывают, что только один зарегистрированный случай смерти среди рабочих за восемь лет работы Freeport-McMoRan на руднике, хотя он неоднократно публиковал отчеты о почти смертельных авариях в качестве предостережения.

Когда инспекторы по безопасности обнаруживали нарушения после того, как China Molybdenum вступили во владение, им иногда предлагали не обращать на них внимания или предлагали взятки за это, говорят рабочие и руководители.И когда они все же пытались обеспечить соблюдение правил, иногда следовало насилие.

Один сотрудник службы безопасности сказал, что его повалил на землю рабочий, которого он вызвал за ненадлежащее использование сварочного оборудования. Мужчина выкрутил руку и сломал мобильный телефон и рабочий фотоаппарат.

Руководитель Gécamines, конголезского агентства, которое является миноритарным акционером рудника, сказал, что сотрудники сообщали правлению агентства о столкновениях и проблемах с безопасностью. Вопросы безопасности теперь являются частью более широкого обзора деятельности China Molybdenum.

Г-н Чжоу, официальный представитель China Molybdenum, отрицал факт нападения на инспекторов. Он предположил, что обвинения, вероятно, были сфабрикованы уволенными сотрудниками.

В заявлении для The Times он сказал, что на руднике «действует надежная система охраны труда и техники безопасности, и по-прежнему соблюдаются правила абсолютной нетерпимости». Фактически, сказал он, «внутренняя статистика», опубликованная в отчете компании в этом году, показала, что травматизм рабочих снизился с тех пор, как компания пришла к власти.

Но сотрудники, которые сказали, что им неоднократно предлагали не сообщать о травмах, полагали, что данные фиксируются в рамках кампании по сокрытию возрастающих опасностей.

Это предположение, которое The Times не смогла подтвердить независимо и которое оспаривает China Molybdenum, было сформулировано для г-на Макеба однажды вечером в прошлом году, когда ему срочно позвонили. По его словам, рабочий на шахте упал с высоты, не надев необходимые ремни безопасности.

г.Макеба бросился на место и был потрясен, узнав, по его словам, что рабочий, который сломал ногу, был доставлен в частную клинику, а не на шахту.

Г-н Макеба сказал, что служащий сказал ему, что его начальство заплатило ему за то, чтобы он молчал, чтобы об этом не было доложено руководству, где это будет отражено в проверенных отчетах компании о травмах.

Когда г-н Макеба предупредил своего босса, он сказал, что ему сказали оставить этот вопрос.

Г-н Чжоу отверг версию г-на Макеба, добавив, что «любая форма сокрытия информации противоречит правилам и корпоративным ценностям.

Но, по словам г-на Макеба и другого менеджера по безопасности, все еще работающих на руднике, условия труда становятся все более важными для автопроизводителей, чувствительных к требованиям потребителей и акционеров. По их словам, компания China Molybdenum не позволяет им сообщать о близких к гибели людей и обычно игнорирует другие травмы.

«Теперь безопасность только на бумаге», – сказал г-н Макеба.

Проблемы на Tenke Fungurume не ограничиваются жалобами сотрудников внутри шахты.

Freeport-McMoRan боролся с нарушителями, которые увозили мешки с кобальтом.Некоторые даже погибли, когда вырытые вручную туннели затопили или обрушились.

Конфликт, связанный с производством China Molybdenum, обострился.

Компания, столкнувшись с тысячами вновь прибывших нарушителей, попросила правительство прислать солдат, чтобы они помогли контролировать ситуацию, сказал The Times один из руководителей шахты в то время.

Военные прибыли и начали патрулирование Тенке Фунгуруме и других местных шахт, снося бульдозерами склады, где нарушители продавали свои кобальтовые камни торговцам.

Войска оставались там несколько месяцев, и в конце концов ситуация стала смертельной. По словам сотрудника, который сообщил The Times, что он был свидетелем столкновения, солдат в Tenke Fungurume открыл огонь, убив несанкционированного копателя.

Беспорядки вспыхнули в родной деревне этого мужчины, когда друзья несли его тело. По словам трех местных чиновников и сотрудника шахты, в ходе рукопашного боя был застрелен протестующий.

Китай Молибден оплатил захоронения, сказали они.

Войска с АК-47 были размещены у шахты в этом году вместе с охранниками, нанятыми из компании, основанной Эриком Принсом, бывшим военно-морским котиком, который впоследствии стал консультантом по частной безопасности.

Даже во время разгона воровства новые менеджеры на руднике искали способы сократить расходы при одновременном увеличении добычи.

China Molybdenum заявила, что сэкономила более 130 миллионов долларов в год благодаря своим программам «затраты и эффективность». «Новое руководство оживляет бизнес, привнося« китайскую эффективность и китайские элементы », – хвастается компания на своем веб-сайте.

Стремление к расширению

Китай Производство молибдена неуклонно растет. В декабре прошлого года он захватил Кисанфу, заплатив Freeport-McMoRan 550 миллионов долларов за то, что считается одним из крупнейших в мире неиспользованных запасов кобальта.Земля под площадкой содержит достаточно кобальта, по оценкам China Molybdenum, для питания сотен миллионов дальнобойных Tesla.

А затем, в августе, China Molybdenum объявила о планах потратить 2,5 миллиарда долларов на Tenke Fungurume, чтобы удвоить производство в течение следующих двух лет. Когда расширение будет завершено, рудник будет производить около 40 000 тонн в год. В прошлом году в США было произведено всего 600 тонн.

Это стремление к расширению, однако, вызвало пристальное внимание со стороны высших правительственных чиновников Конго, вплоть до г-на А.Чисекеди, президент.

Возникли вопросы по поводу платежей, которые операторы Tenke Fungurume могут быть должны Конго, начиная с того времени, когда американская компания контролировала рудник. Когда новые месторождения подтверждаются на Tenke Fungurume, владельцы должны уведомить Gécamines, конголезское агентство, и заплатить 12 долларов за каждую дополнительную тонну.

Обвинения вызвали ожесточенный спор между конголезскими официальными лицами и руководителями рудников, когда представитель China Molybdenum назвал обвинения «невероятными, ошибочными расчетами», основанными на ошибке в бухгалтерском учете.

Руководители Gécamines обсуждали вопрос о вытеснении руководства Tenke Fungurume или даже выводе рудника из-под контроля China Molybdenum, по словам двух конголезских руководителей горнодобывающей промышленности, участвовавших в конфиденциальных обсуждениях, а также государственного чиновника , проинформированного о переговорах.

Роберт Норт, геолог из Нью-Мексико, который участвовал в оценке запасов рудника Freeport и China Molybdenum, сказал, что обе компании, а также Gécamines знали о больших количествах кобальта под землей на этом участке.По его словам, компания China Molybdenum осторожно заявляет об этом, пока компания не осознает, что хочет пойти на извлечение более глубоких слоев.

Комиссия г-на Чисекеди все еще расследует обвинения, а сам президент недавно председательствовал на напряженной шестичасовой встрече с высшим руководством компании.

Отдельно конголезское правительство при финансовой поддержке США изучает многочисленные контракты на добычу полезных ископаемых, чтобы определить, была ли Конго выкуплена в более широком смысле.Официальные лица заявили, что хотя финансируемые Китаем инфраструктурные проекты были запущены блестяще, многие из них так и не были построены.

Во время визита в кобальтодобывающий регион в этом году президент признал, что коррумпированные или некомпетентные правительственные чиновники в Конго, возможно, заслуживают некоторой вины за сделки, в результате которых нация почувствовала себя обделенной.

«Некоторые из наших соотечественников плохо согласовали контракты на добычу полезных ископаемых», – сказал он. «Я очень сурово отношусь к этим инвесторам, которые приходят обогащаться в одиночку.Они приходят с пустыми карманами и уходят миллиардерами ».

Китайские правительственные чиновники настаивают на том, что отношения все еще налажены и что Конго получит существенные выгоды.

Страны связывают «давняя дружба, а двустороннее практическое сотрудничество принесло плодотворные взаимовыгодные результаты и имеет широкие перспективы», – заявил на сентябрьской пресс-конференции пресс-секретарь Министерства иностранных дел Китая Чжао Лицзянь.

В интервью в Киншасе г.Чисекеди сказал, что его внимание было сосредоточено не на том, какая иностранная держава будет доминировать в горнодобывающей промышленности в Конго, а скорее на том, как его страна могла бы разделить богатство, порожденное революцией чистой энергии.

«У нас есть потрясающий потенциал для возобновляемых источников энергии, будь то за счет наших стратегических металлов или за счет наших рек», – сказал он, имея в виду как горнодобывающую промышленность, так и гидроэнергетику.

Автор: alexxlab

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

×